组培实验讲义3.docx

实验三、固体培养基的配制与灭菌及培养器械的灭菌实验目的、要求：学习、掌握植物组织固体培养基的配制和灭菌方法 实验原理：组织培养所以的培养基含有植物生长所必须的各类营养物 质，同时也是微生物繁殖的极好场所，因此必须对培养基灭菌处理， 以确保无菌操作的顺利进行实验材料、试剂盒仪器设备：1、 试剂：琼脂、蔗糖、蒸馏水，0.1mol/L的NaOH和HCl溶液、各 类母液2、 仪器设备：分析天平、超净工作台、烧杯、；量筒、移液管、药品 勺子、称量纸、pH计、培养罐实验内容与步骤：一、MS培养基的配制：1. 量取及称量：根据培养基配方，按所需容量分别吸取母液，母液 吸取量=需配制培养基体积/母液浓缩的倍数如，需配1000ml培 养基，则其需要大量元素母液量50毫升，其他依次类推将母液 混在1L的大烧杯中，加入蔗糖（常用量30g/L），容量瓶内加水至 1L定容2. 加入激素：根据需要加入一定量的激素：如配制NAA0.5mg/L+6-BA0.5mg/L的培养基，则需要利用枪头吸取0.5ml,1mg/ml 的 NAA 溶液和 0.5ml, 1mg/ml 的 6-BA 溶液3.混合与调节pH值:将定容好的加入激素的培养基倒入大烧杯中, 调节pH值，利用盐酸和氢氧化钠溶液，将培养基pH值调节至 5.8-6.0范围内，边用玻璃棒搅拌边加盐酸和氢氧化钠溶液，调节 好后，将溶液倒入1L的试剂瓶中，称取适量的琼脂（常用量10g/L）加入试剂瓶中，准备灭菌。

4.灭菌：封严培养容器口后，121°C灭菌30min后，待高压灭菌锅 的压力为零时，将培养基取出，置于水平台子上，在室温下冷却 （紫外灭菌），分装到培养罐中，备用二、培养皿和培养器械的灭菌报纸包裹培养皿，将镊子、剪刀、滤纸放入不锈钢饭盒中以及消毒瓶、无菌水等放入高压灭菌锅中，进行灭菌，灭菌完毕 后放入烘箱中烘干备用作业：1、将自己的操作流程简要写出来，2、在培养基制备过程中应注意哪些环节？。