人N端前脑钠肽NT-proBNP试剂盒使用方法.docx

人N端前脑钠肽(NT-proBNP)试剂盒使用方法检测范围： 96T2 ng/L -80 ng/L使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中 N端前脑钠肽(NT-proBNP)含量实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人 N端前脑钠肽(NT-proBNP)水平用纯化的人N端前脑钠肽(NT-proBNP)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入 N端前脑钠肽(NT-proBNP),再与HRP标记的N端前脑钠肽(NT-proBNP)抗体结合，形成抗 体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物 TMB显色TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色颜色的深浅和样品中的 N端前脑钠肽(NT-proBNP)呈正相关用酶标仪在450nm波长下测定吸光度 (OD值)，通过标准曲线计算 样品中人N端前脑钠肽(NT-proBNP)浓度 试剂盒组成130倍浓缩洗涤液20ml X 1 瓶7终止液6ml x 1 瓶2酶标试剂6ml x 1 瓶8标准品(160 ng/L)0.5ml X 1 瓶3酶标包被板12孔X 8条9标准品稀释液1.5ml X 1 瓶4样品稀释液6ml x 1 瓶10说明书1份5显色剂A液6ml x 1 瓶11封板膜2张6显色剂B液6ml x 1/瓶12密封袋1个标本要求1 .标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。

若不能马上进行试验，可将标本放于 -20 C保存，但应避免反复冻融2 .不能检测含 NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性操作步骤1 .标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支， 用户可按照下列图表在小试管中进行稀释80 ng/L5号标准品150 d的原倍标准品加入150 M标准品稀释液40 ng/L4号标准品150 d的5号标准品加入150 M标准品稀释液20 ng/L3号标准品150 d的4号标准品加入150 M标准品稀释液10 ng/L2号标准品150 d的3号标准品加入150 M标准品稀释液5 ng/L1号标准品150 d的2号标准品加入150 M标准品稀释液2 .加样：分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂， 其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔在酶标包被板上标准品准确加样 50小待测样品孔中先加样品稀释液 40 M,然后再加待测样品10 d (样品最终稀释度为 5倍)加样将样品加于酶标板孔底部，尽 量不触及孔壁，轻轻晃动混匀3 .温育:用封板膜封板后置 37 c温育30分钟4 .配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸储水 30倍稀释后备用5 .洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6 .加酶：每孔加入酶标试剂 50 口，空白孔除外7 .温育:操作同38 .洗涤：操作同59 . 显色：每孔先加入显色剂 A50U,再加入显色剂 B50M,轻轻震荡混匀，37c避光显色15分钟.10 .终止：每孔加终止液 50口终止反应（此时蓝色立转黄色） 11 .测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（ OD值）测定应在加终止 液后15分钟以内进行操作程序总结：准备试剂，样品和标准品计算根据样品的OD值计算出标 再乘以稀释倍数，以标准物的浓度为横坐标， OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线,OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与 准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度， 即为样品的实际浓度注意事项1 .试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存2 .浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差一次加样时间最好控制在 5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样4． 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔如标本中待测物质含量过高（样本 OD 值大于标准品孔第一孔的 OD 值） ，请先用样品稀释液稀释一定倍数（ n 倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（X n X 5）。

5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染6．底物请避光保存7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准 .8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理9．本试剂不同批号组分不得混用10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准保存条件及有效期1 ．试剂盒保存： ； 2-8℃2．有效期： 6 个月。