石蜡切片方法.doc

石蜡切片方法采样采样 切成直径 5mm 以内，长 5-10mm 的长段杀生、固定杀生、固定 FAA 固定液中固定 24 小时 [根尖用卡诺固定液固定， （95%酒精：冰醋酸 3：1） ，15-30M，不超过 24 小时，用 95%、85%酒精浸洗，每级 20M，然后转入 70%酒精保存] 配方：福尔马林（38%甲醛） 5ml 冰醋酸 5ml 70%酒精 90ml 可保存整染整染 以 70%、50%酒精各 2~4 小时，转入爱氏苏木精稀释液（爱氏苏木清原液 1 份，加入50%酒精及冰醋酸各半的混合液 1 份）中整染 2-3 天 爱氏苏木精配制： 将苏木精溶于少量酒精中，加冰醋酸后搅拌，加速其溶解 加入甘油及其余酒精 研碎钾矾，溶于水中并加温 将加温的钾矾溶液一滴滴地加入染色剂中，并不断挥动 瓶口用双层纱布包扎，放于通风处，并经常摇动，直到颜色变为紫红进即可使用，成熟时间约需 2~4 周以致数月之久，若加 0.2g 碘酸钠即可立即成熟，成熟的原液，须用瓶塞密封，置低温暗处 长期保存[苏木精 2g 冰醋酸 10ml 甘油 100ml 95%酒精 100 ml 蒸馏水 100ml 硫酸铝钾 5g]水洗、返蓝水洗、返蓝 蒸馏水浸洗，勤换水至无浮色渗出，再转入自来水中，换 1-2 次水，至样品由紫色变为深蓝色为止，共需时约 1 天{镜检及分色镜检及分色 取一小块用刀片切碎后，滴一滴水，覆以盖玻片，进行镜检，要求染色体、核仁清晰，如发现染色过度，细胞核为一团深蓝色，则需以 1%盐酸或 45%醋酸分色至适度，再用水洗净。

脱水脱水 经 15%、30%、50%、70%、85%、95%、无水、无水各级酒精，每级 2-4小时，70%酒精中过夜，此为整染的步骤，复染直接进行下一步}{脱水及复染脱水及复染 经 30%、50%、70%、85%各级酒精，每级 3-4 小时5-1%伊红的 95%酒精中 4-6 小时（可以过夜） ，无水酒精两次，每次 2 小时 此为伊红复染的步骤}透明透明 5 级氯仿透明，每级 2-4 小时，最后一级纯氯仿两次，每次 2 小时，隔纸片加蜡，置36℃ 温箱中一天（将瓶划成五格，吸去一格液体加入一格氯仿，当 5 级换入后，换纯氯仿二次）浸蜡：浸蜡：分 2-3 次加入石蜡粉末，宜先少后多，每加完一次放回温箱（38-40℃）渗透、包埋渗透、包埋 经 50%、75%蜡各 3 小时，再经 A、B、C 三杯纯蜡各小时，包埋 （ 75%石蜡指 75%石蜡+25%二甲苯 石蜡应用 3-4 层桑皮纸过滤后使用）温度 处理时间 50%石蜡 40-42℃ 0.5-3 H 75%石蜡 48-50 0.5-3H 纯蜡 A 56-58 20M-1H 纯蜡 B 56-58 20M-1H 纯蜡 C 56-58 20M-1H 用玻璃铅笔在盒底作记号 包埋纸盒先用水润湿放于玻璃片上 材料倒入后用镊子拨动调整位置，表面呈薄膜凝固时可放入水中修蜡块、切片修蜡块、切片 厚 8μm 展片、粘片、烘片展片、粘片、烘片 镜检选取合适的材料进行粘片，展开后，置于 36℃ 温箱中烘干 粘片剂：将鸡蛋一端打开一个小口，只让蛋白慢慢流入烧杯内，用玻璃棒充分搅拌成泡沫状，然 后用粗滤纸或双层纱布过滤至量筒中，经一昼夜能滤出透明的蛋白液。

再加入等量甘油及少许防 腐剂（如樟脑精）振荡使其完全混合后即可使用不用时需放在低温干燥（如冰箱）中保存，可 长期使用 展片台调节成 35℃，涂沫少许蛋清甘油于载玻片上，加数滴蒸馏水，将已选择的小蜡片，用解 剖片的刀尖蘸水将蜡片移至有水的载玻片中部，当蜡片受热完全伸展看不到有任何皱纹时为止 从台上取下已展开的载片，略为倾斜使多余的水分流入培养皿中，同时对位置作最后调整定位 将选中的切片继续在展片台上烘烤，使蜡片中心、周围水分都除去，材料紧贴载玻片上，如材料 干后有透明质感，表明粘、展片工作较好如发白，应在酒精灯上来回烘烤直到变成透明状为止烘片 40℃烘箱中烘 3 天左右方可制片脱包埋剂脱包埋剂 二甲苯脱蜡 脱蜡缸中泡 30 分钟左右至蜡片材料的周围蜡溶去后再转入透明缸中泡 5~10 分钟封藏成永存片封藏成永存片 加拿大树胶封片 （中性加拿大树胶用二甲苯溶解，如已酸化，可加一些碳酸钙）。