分光光度仪法测定亚硝酸盐.pdf

分光光度法：（测亚硝酸盐）一．仪器：1. 天平：感量为 0.1mg和 1mg2. 组织捣碎机3. 超声波清洗机4. 恒温干燥箱5. 分光光度计二．步骤1.溶液配制：1.1 亚铁氰化钾溶液（ 106/L） ：称取 106.0g 亚铁氰化钾，用水溶解，并稀释至 1000ml1.2 乙酸锌溶液（ 220g/L） ：称取 220.0g乙酸锌，先加 30ml 冰醋酸溶解，用水稀释至 1000ml1.3 饱和硼砂溶液（ 50g/l） ：称取 5.0g 硼酸钠，溶于 100ml 热水中，冷却后备用1.4对氨基苯磺酸溶液（4g/L） ： 称取 0.4g对氨基苯磺酸，溶于 100ml20%的盐酸中，置棕色瓶中混匀，避光保存1.5 盐酸奈乙二胺溶液（ 2g/l） ：称取 0.2g盐酸萘乙二胺，溶于100ml水中，混匀后，置棕色瓶中混匀，避光保存2.实验步骤2.1 试样预处理：用四分法取适量或全部，用食物粉碎机制成匀浆备用2.2 提取：称取 5g（精确至 0.01g）制成匀浆的试样（如制备过程中加水，应按加水量折算），置于 50ml 烧杯中，加 12.5ml 饱和硼砂溶液，搅拌均匀， 以 70°C左右的水约 300ml 将试样洗入 500ml 容量瓶中，于沸水浴中加热 15min，取出置冷水浴中冷却，并放置至室温。

2.3 提取液净化在振荡上述提取液时加入5ml 亚铁氰化钾溶液，摇匀，加入5ml乙酸锌溶液，以沉淀蛋白质加水至刻度，摇匀，放置30min，除去上层脂肪，上清液用滤纸过滤，弃去初滤液30ml，滤液备用2.4 亚硝酸盐的测定吸取 40ml上述滤液于 50ml 带塞比色管中，另吸取 0.00ml,0.20ml，0.40ml,0.60m,0.80ml,1.00ml,1.50ml,2.0ml,2.5ml 亚硝酸钠标准使用液，分别置于 50ml 带塞比色管中于标准管与试样管中分别加入2ml 对氨基苯磺酸溶液，混匀，静置3min~5min 后各加入 1ml 盐酸萘乙二胺溶液，加水至刻度，混匀，静置15min，用 2cm 比色杯，以零管调节零点，于波长538nm 处测吸光度，绘制标准曲线比较同时做试剂空白3.分析结果的计算：亚硝酸钠的含量按式进行计算：式中：X1——试样中亚硝酸钠的含量，单位为毫克每千克A1——测定用样液中亚硝酸钠的质量，单位为微克m——试样质量，单位为克V1——测定用样液体积，单位为毫升V0——试样处理液总体积，单位为毫升以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留两位有效数字。