葛根素对局灶性脑缺血再灌注大鼠行为及病理改变的保护作用.doc

1葛根素对局灶性脑缺血再灌注大鼠行为及病理改变的保护作用【摘要】 目的：研究葛根素对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用，并探讨其神经保护作用的机制方法：Wistar 大鼠分为 3 组：假手术组，模型组和给药组，采用局灶性脑缺血再灌注模型(即大脑中动脉栓塞法)，预先给予葛根素，然后分别观察和检测脑组织形态学、脑组织含水量及神经功能障碍评分指标结果：给药组与模型组相比，脑组织病理损害和水肿明显减轻，梗死面积减少，神经功能障碍评分明显降低结论：葛根素对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤具有一定的保护作用 【关键词】 葛根素; 局灶性脑缺血; 脑组织含水量; 神经功能障碍评分葛根系豆科植物野葛的根，据历史记载，它具有祛风解表功能，主治消渴、中风头痛及项背痛等症[1]葛根素(Puerarin，Pue) 则是从葛根中提取的一种异黄酮单体，化学名为 4，7  二羟基 8 D葡萄糖基异黄酮[2]用现代药理学方法研究证明，它具有 β 受体阻断作用[3]及增加脑血流和脑代谢作用[1]实验证明，它对心肌缺血和大鼠急性脑缺血有一定的保护作用[4]那么对于局灶性脑缺血再灌注损伤，葛根素是否也具有一定的保护作用呢?本研究对此进行2了以下的实验研究。

1 材料与方法1.1 实验动物及分组健康雄性 Wistar 大鼠，体重 250～280g ，华中科技大学同济医学院实验动物中心提供实验中，Wistar 大鼠随机分为 3 组：假手术组(Sham 组) ，缺血再灌注组 (IR 组)，葛根素组(Pue 组)，每组 8 只大鼠1.2 实验药品葛根素注射液由陕西省安康制药厂生产1.3 实验模型制备1.3.1 线栓制备 取德国产钓鱼线 50mm(直径 0.2mm)，头端 0.5mm 用电烙铁加热成光滑的球形，使其头部大小一致，光镜下成光滑的球形，并于距线球端 17、18、19mm 处作标记，酒精清洁后置生理盐水中备用31.3.2 实验模型 采用改良 Longa 法制作 MCAO 模型，大鼠用 10%水合氯醛(0.35ml/100g)腹腔注射麻醉后，仰卧固定，稍靠右侧切开分离右侧颈总动脉(CCA)，颈外动脉 (ECA)，颈内动脉(ICA) ，并沿 ICA 向下分离翼腭动脉(PPA)，结扎 PPA、ECA 及 CCA 近心端，于远心端备线，CCA 近分叉处切口，插入栓线[深度(18.5 ±0.5)mm]，然后扎紧备线，外留 1cm 钓鱼线头，缝合皮肤，再灌注时轻轻提拉所留线头至有阻力即可[5]。

假手术组操作同上，但栓线只插入15mm[6]葛根素组在缺血前 10min，舌下静脉注射葛根素注射液4.8ml/kg，缺血再灌注组注射等容积生理盐水1.4 检测指标1.4.1 神经功能障碍评分[7] 待大鼠麻醉清醒后，观察其行为及瘫痪情况根据文献，将大鼠行为分为 6 个等级评分0 级：大鼠未见活动异常;1 级：左前肢不能完全伸直 ;2 级：左前肢阻力减小，行走偏左侧;3 级：左侧旋转行走;4 级：原地左旋;5 级：完全性左瘫1.4.2 对脑组织形态学影响 脑切片行常规 HE 染色，然后光镜下观察大鼠脑组织情况1.4.3 脑组织含水量测定[8] 缺血 2h 再灌注 24h 后，断头取4脑组织，用滤纸吸干表面水分称湿重后，置 95℃烘箱中烤 24h，称取干重按公式计算：脑组织含水量=(湿重-干重)/ 湿重×100% 1.5 统计学方法各组动物脑组织测定结果用(±s)表示，两组均数差异的比较采用 t 检验2 结果2.1 神经功能障碍评分结果见表 1，葛根素可明显减轻大鼠神经功能缺失症状表1 各组大鼠神经功能障碍评分2.2 对脑组织形态学影响大体检查：肉眼可见缺血再灌注组脑组织苍白、肿胀明显，葛根素组脑组织颜色鲜红、肿胀不明显。

光镜下观察缺血再灌注组脑组织水肿，神经元之间间隙扩大，部分神经元呈皱缩状，胞浆呈浓染，细胞核固缩、消失葛根素组梗塞侧脑组织则有明显减轻2.3 DG 对再灌注后脑水肿的影响5缺血再灌注组脑组织含水量增高，其与假手术组相比有显著性差异(P<0.05);而给予葛根素后，与缺血再灌注组相比，则能显著降低脑组织含水量(P<0.05)见表 2表 2 DG 对大鼠缺血  再灌注损伤脑组织含水量的影响3 讨论缺血性脑血管病是当今死亡率和致残率较高的疾病之一，已严重危害了人类的健康，因此，对缺血性脑血管疾病的药物研究显得尤为重要已有报道，葛根素本文通过实验，从神经功能、脑组织形态学、脑组织含水量这几个方面，初步研究了葛根素对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用葛根素本实验显示缺血再灌注组神经功能障碍明显，与文献报道一致在给予葛根素后，能明显减轻缺血再灌对脑组织的损伤：受损神经元减少，脑组织含水量明显降低，大鼠神经行为缺失症状也明显减轻，这些结果都表明葛根素对局灶性脑缺血再灌注损伤有保护作用至于其保护作用机制，正在进一步研究之中参考文献】1 陈连壁，柴强，赵爱萍,等.葛根素对犬血流的影响.中国中药杂志,1995,20(9):560～562.62 张梅，郑海燕.葛根素对脑梗塞患者红细胞变形能力的影响.安徽中医学院学报,1996,15(5):12 ～13.3 王磊一，赵爱平，柴象枢. 葛根素对猫离体血管平滑肌的作用. 中国药理学报,1994,15(2):180～182.4 王磊一，赵爱平，王福文，等. 葛根素对大鼠急性脑缺血的保护作用.中国中药杂志,1997,22(12):752 ～754.5 Charriaut MC,Ben AY.Cerebral ischemia: is cell death type of apoptosis?Arch Pediatr,1996,3(supple 1 ):245～247.6 Rosomoff HL,Kochanek PM,Clark R,et al.Resuscitation from severe brain trauma. Crit Care Med,1996,24(supple 2 ):S48～56.7 梁健，王富强，郑香平，等. 延胡索乙素抗过氧化作用与对脑缺血再灌注大鼠行为及病理改变的保护.中国药理学通报,1999,15(2):167～169.8 王春霞，刘春风，包仕尧. 大鼠局灶脑缺血再灌注模型改良7后的实验研究.苏州医学院学报，1999 ，19(3)：124～125.。