试管苗的增殖和生根培养.docx

专业班级：12级生物2班 学号：20120322239姓名：王雪娇 组：第三组组长：卢晓燕同组人：杨佳梅蒋薇袁蓉莽斌林星龙刘显号李玉胜关德红实验日期：2014年6月16日 室温：25.4 °C 大 气压：82.3Kpa实验序号：五 实验名称：试管苗的增殖和生根培养一、 实验目的1. 了解不同植物及不同繁殖体材料的增殖繁殖方式；2. 掌握不同增殖扩繁方式试管苗的转接技术；3. 掌握生根培养阶段培养基类型的选择及配置方法；4. 掌握试管苗生根培养的转接技术；5. 掌握试管苗生根培养的环境条件控制技术；6. 掌握移栽基质的配制、消毒方法；7. 掌握生根试管苗的炼苗、常规移栽及移栽后的养护管理技术二、 实验原理组培中通过外植体的初代培养以及试管苗的继代增殖培养，诱导产生了大量 的丛生芽、丛生茎或原球茎，离体繁殖产生的芽、嫩梢和原球茎，一般都需进- 步诱导生根，才能得到完整的植株，当培养材料增殖到一定数量后，就要使部分 培养物分流到生根培养阶段，并进行进一步的驯化移栽，使其适应外界的栽培环 境，以获得高质量的商品苗若不能及时将培养物转移到生根培养基上去，就会 使久不转移的试管苗发黄老化，或者因过分拥挤而使无效苗增多造成抛弃浪费。

试管苗的生根与移栽是植物组培快繁的第三个阶段，也是植物组培快繁的最后一 道工序，是能否进行大量生产和实际应用的重要问题，也是商品化生产出售产品、 取得效益的最终环节♦试管苗的增殖试管苗增殖培养也叫继代培养，是实现植物快速繁殖的重要环节这一阶段 的培养目的是在较短的时间内繁殖大量有效的芽和苗初代培养的结果，往往可 以得到不定芽、再生芽、原球茎或胚状体等，但数量非常有限，还要进行增殖培 养增殖培养时选用的培养基可以和初代培养的一样，也可以略加调整，调整与 否取决于增殖率，如果增殖率高，细胞分裂素的浓度可不作调整，加入适量的生 长素类激素，以促进生根和防止玻璃化苗的大量发生如果增殖率低，要调整细 胞分裂素的用量，常常是提高细胞分裂素的含量继代培养周期由分化和生长速 度而定，当不定芽长满瓶时，或者培养基的养分消耗快尽时，要及时继代培养， 继代周期一般为4-6周继代培养的次数和规模要根据生产计划来确定♦试管苗的生根试管苗的生根培养是使无根苗生根形成完整植株的过程，这个过程的目的就 是使试管苗生出浓密而粗壮的不定根，以提高试管苗对外界环境的适应力及驯化 移栽的成活率，获得更多高质量的商品苗试管苗的生根一般需转入生根培养基 中或直接栽入基质中促进其生根，并进一步长大成苗。

试管苗的生根可分为试管 内生根和试管外生根两种方式I、试管内生根（一）影响试管苗生根的因素植物离体培养中根的发生都来自不定根，根原基的形成与生长素有关，但根 原基的伸长和生长可以在没有外源生长素的条件下实现影响试管苗生根的因素 很多，有植物材料自身的生理生化状态，也有外部的培养条件，如基本培养基、 生长调节物质以及外部的环境因素等等，要提高试管苗的生根率，就必须考虑这 些影响因素1. 植物材料不同植物种、不同的基因型、甚至同一植株的不同部位和不同年龄对根的分 化都有决定性的影响因植物材料的不同，试管苗生根从诱导至开始出现不定根， 一般快的只需3〜4天，慢的则要3〜4周甚至更久此外，生根难易还与母株所 处的生理状态有关，因取材季节和所处环境条件不同而异不同植物材料生根的 一般规律是：木本植物较草本植物难，成年树较幼年树难，乔木较灌木难，同- 植物中上部材料较基部材料难，休眠季节取材较开始旺盛生长的季节取材难但 是具体到不同的植物种类也存在个性的差异，一般自然界中营养繁殖容易生根的 植物材料在离体繁殖中也较容易生根2. 基本培养基诱导生根的基本培养基，一般需要降低无机盐浓度以利于根的分化，常使用 低浓度的MS培养基，如使用1/2MS、1/3MS或1/4MS的基本培养基，如无籽 西瓜在1/2MS时生根较好，硬毛猕猴桃在1/3MS时生根较好，月季的茎段在 1/4MS时生根较好，水仙的小鳞茎则在1/2MS时才能生根。

矿质元素的种类对生根也有一定的影响对大多数植物而言，大量元素中NH4+ 多不利于发根；生根培养一般需要磷和钾元素，但不宜太多；Ca2+一般有利于 根的形成和生长；微量元素中以硼(B)、铁(Fe)对生根有利此外，糖的浓度对试管苗的生根也有一定的影响，一般低浓度的蔗糖对试管苗的 生根有利，且有利于试管苗的生活方式由异养到自养转变，提高生根苗的移栽成 活率，其使用浓度一般在1%〜3%，如桉树的不定枝发根最适宜的蔗糖浓度为 0.25%，马铃薯发根则为1%但也有些植物在高浓度时生根较好，如怀山药在 蔗糖6%时生根状况最好3.植物生长调节剂（1）植物生长调节剂的选用及配比在试管苗不定根的形成中，植物生长调节剂起着决定性的作用，一般各种类型的 生长素均能促进生根赤霉素、细胞分裂素和乙烯通常不利于发根，如与生长素 配合使用，则浓度一般宜低于生长素浓度脱落酸（ABA）有助于部分植物试 管苗的生根植物生长延缓剂如多效锉（PP333）、矮壮素（CCC）、比久（B9） 对不定根的形成具有良好的作用，在诱导生根中所使用的浓度一般为 0.1〜 4.0mg/L，如苹果试管苗生根时若在培养基中附加PP333O.5〜2.Omg/L可显著提 高生根率。

据统计，试管苗的生根培养中单一使用一种生长素的情况约占51.5%， 使用生长素加激动素的约占20.1%生根培养中常用的生长素主要为IBA、NAA、IAA和2, 4-D等，其中IBA、 NAA使用最多IBA作用强烈，作用时间长，诱导根多而长，NAA诱导根少而 粗，一般认为用IBA、NAA 0.1〜1.0mg/L有利生根，两者可混合使用，但大多 数单用一种人工合成生长素即可获得较好的生根效果，常见植物生根培养基的生 长调节剂水平见表6-1此外，生根粉（ABT）也可促进不定根的形成，并可与生 长素、赤霉素等配合使用，如猕猴桃采用lmg/L或1.5mg/L的1号ABT生根粉 生根率可达100%，在赤按组织苗生根中ABT与IBA配合使用较单独使用效果 好植物名称生长调节剂种 类生长调节剂浓度桃非洲紫罗兰变叶木NAANAANAA0.1mg/L0.O1〜0.2mg/L0.5mg/L康乃馨球根秋海棠铁皮石斛NAAIBAIBA0.2mg/L0.5mg/L0.1mg/L羽叶甘蓝大花蕙兰君子兰IBA+ NAAIAA或IBA+NAAIBA +NAAIBA0.5mg/L+ NAA0.lmg/LIAA1.0mg/L或 IBA 0.8mg/L+NAA0.lmg/LIBA 0.O1〜1.0mg/L+NAA 0.O1 〜1.Omg/L表1-1常见植物生根培养基的生长调节剂水平外植体的类型不同，试管苗不定根的形成所需的植物生长调节剂也不一样。

一般愈伤组织分化根时，使用萘乙酸（NAA）最多，浓度在0.02〜6.0mg/L，以 1.0〜2.0mg/L为多；使用吲噪乙酸（IAA）+激动素（KT）的浓度范围分别为0.1〜 4.0mg/L 和 0.01 〜1.0mg/L，而以 1.0〜4.0mg/L 和 0.01 〜0.02mg/L 居多而胚轴、 茎段、插枝、花梗等材料分化根时，使用吲噪丁酸IBA）居首位，浓度为0.2〜 10mg/L，以 1.0mg/L 为多不同植物试管嫩茎诱导生根的合适生长调节剂，需进一步通过试验来确定若使 用浓度过高，容易使茎部形成一块愈伤组织，而后再从愈伤组织上分化出根来，这样，因为茎与根之间的维管束连接不好，既影响养分和水分的输导，移栽时， 根又易脱落，且易污染，成活率不高如苹果生根培养基中IBA或NAA浓度超 过1.0mg/L，多数苗都是先于苗基切口处产生愈伤组织，随后在愈伤组织上分化 生根，这样当生根移出栽植后，苗基的愈伤组织很快干死，使苗与根间形成一个 隔层，成活率大大降低总之，试管苗的生根培养多数使用生长素，大都以吲噪丁酸（IBA）、萘乙酸 （NAA）、吲噪乙酸（IAA ）单独使用或配合使用，或与低浓度细胞分裂素配合 使用，萘乙酸与细胞分裂素配合时一般摩尔比在（20〜30）： 1为好。

对于已经 分化根原基的试管苗，则可在没有外源生长素的条件下实现根的伸长和生长2）植物生长调节剂的使用方法植物生长调节剂常用的使用方法是将植物生长调节剂预先加入到培养基中， 然后再接种材料诱导其生根，即“一步生根法”最常用的方法是采用固体琼脂 培养基进行生根培养，以利于植株的固定和生根对于在固体培养基中较难生根 的植物类型，则可采用液体培养基，并在液体培养基上加一滤纸桥进行生根培养， 以解决试管苗固定和缺氧的问题近年来，人们为了促进试管苗的生根，在植物生长调节剂的使用方法进行了创新， 将需生根的植物材料先在一定浓度的植物生长调节剂（无菌）中浸泡或培养一定 时间，然后转入无植物生长调节剂的培养基中进行培养，即“两步生根法”，可 显著提高生根率，常见植物两步生根法的处理方法及其生根率见表植物名称诱导生根的处理方法生根率1/4DKW+IBA5.0〜10.0mg/L （暗培养 10〜60.5%〜核桃15天）89.7%牡丹IBA50〜100mg/L （浸泡2〜3小时）90%以上板栗IBA1.0mg/ml （浸泡2分钟）90%猕猴桃IBA 50mg/L （浸泡3〜3.5小时）93.3%4. 其他物质一般认为黑暗条件对根的生长有利，因此在生根培养基中加入适量的活性炭 对许多植物的生根均有利，如草莓、非洲菊、水稻等的生根培养中加入活性炭可 进行根系生长粗壮、白嫩，且生根数量多。

另外，在一些难生根的植物生根培养 基中加入间苯三酚、脯氨酸（100mg/L）和核黄素（1mg/L）等也有利于试管苗 的生根，如苹果新梢的生根5. 继代培养次数试管嫩茎（芽苗）继代培养的代数也影响其生根能力，一般随着继代代数的增 加，生根能力有所提高如苹果试管嫩茎继代培养的次数越多则生根率越高，长 富士苹果在前6代之内生根率低于30%，生根苗的平均根数不足2条，而10代 时生根率达80%，12代以后则生根率稳定在95%以上，生根条数平均可达7条 左右；新红星苹果虽然生根困难，但继代培养12代以后，其生根率可达60%左 右其他植物如杜鹃、杨树、葡萄等经过若干次继代培养也能提高生根率，而且 从试管苗长成的植株上切取插条要比在一般植株上切取的更易生根6. 光照光照强度和光照时数对发根的影响十分复杂，结果不一一般认为发根不需 要光，如毛樱桃新梢适当暗培养可使生根率增加20%，生根比较困难的苹果暗培 养可提高其生根率，杜鹃试管嫩茎低光强度处理也可促进其生根但草莓生根培 养中根系的生长发育则以较强的光照为好一般认为在减少培养基中蔗糖浓度的 同时，需要增加光照强度（如增至3000〜100001x），以刺激小植株使之产生通过 光合作用制造食物的能力，便于由异养型过渡到自养型，使植株变得坚韧，从而 对干燥和病害有较强的忍耐力。

虽然在高光强下植株生长迟缓并轻微退绿，但当 移人土中之后，这样的植株比在低光强下形成的又高又绿的植株容易成活7. pH 值试管苗的生根要求一定的pH值范围，不同植物对pH值要求不一，一般为 5.0〜6.0，如杜鹃试管嫩茎的生根与生长在pH值为5.0时效果最好，胡萝卜幼苗 切后侧根的形成在pH为3.8时效果最好，水稻离体种子的根生长在pH为5.8效 果最好8. 温度试管苗在试管内生根，或在试管外生根，都要求一定的适宜温度，一般为 16°C25°C，过高过低均不利于生根植物生根培养的温度一般要比增。