实验8 干热灭菌及高压蒸汽灭菌.docx

实验 8 干热灭菌及高压蒸汽灭菌一、目的与要求了解干热灭菌及高压蒸汽灭菌的操作方法二、原理干热灭菌是利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的， 细胞内的蛋白质凝固性与其本身的含水量有关，在菌体受热时，当环境和细胞内 含水量越大，则蛋白质凝固越快，反之含水量越小，凝固越慢因此，与湿热灭 菌相比，干热灭菌所需温度高（160〜170°C）,时间长（1〜2h）高压蒸汽灭菌是将待 灭菌的物品放入一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅内水沸腾产生蒸 汽，水蒸气急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀，继续加热， 此时由于水蒸气不能溢出而增加了灭菌锅内的压力，从而使沸点升高，得到高 100C的温度，导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的一般培养基用 0.1 MPa（ 相当于 15 Ib/In2 或 1.05 kg/cm2 ）121.5C15〜30min 可达到彻底灭菌，灭菌的温度及维持的时间随灭菌物品的性质和 容量等具体情况而有所改变三、材料与仪器吸管，培养皿，试管，电热干燥箱，手提式高压蒸汽灭菌锅，牛肉膏蛋白胨 培养基蒸馏水实验图-8 电热干燥箱的外观与结构门室层 侧作温 工保实验图-9 手提式高压锅四、操作步骤（一）干热灭菌法 适用于空的干燥的玻璃器皿的灭菌。

培养基不适用1. 将包好的待灭菌物品（培养皿试管、吸管等）放入电热干燥箱（注意留定问除） 关好箱门2 接通电源，打开排气孔，使箱内湿空气能逸出旋动恒温调节器，保持加热 升温状态，至箱内达到100°C时关闭排气孔3•当温度升到160〜170C时，借恒温调节器的自动控制，保持此温度2h4•切断电源，冷却至70°C时，打开箱门，取出灭南物品（未降至，70°C以前， 切勿打开箱门，否则温度骤降导致玻璃器皿炸裂）二）高压蒸汽灭菌1. 首先将内层锅取出，再向外层锅内加入适量的水，使水面与三角搁架相平 为宜2. 放回内层锅，并装入待灭菌物品 （内装培养基或小的三角瓶），不要装得太 挤，以免妨碍蒸汽流通影响灭菌效果，三角瓶口不要与桶壁接触，以免冷凝水淋 湿包口的纸而透入棉塞加盖，并将盖上的排气软管插入内层锅的排气槽内，再 以两两对称的方式同时旋紧相对的两个螺栓，使螺栓松紧一致，勿使漏气3. 用电炉或其他方法加热，并同时打开排气阀，使水沸腾以排除锅的冷空气， 待冷空气排尽后，关上排气阀让锅内的温度随蒸汽压力增加而逐渐上升，当锅内 达到所需压力时，控制热源，维持压力至所需时间4. 停止加热，待压力表的压力降至零位时，打开排气阀，旋松螺栓，打开盖 子取出灭菌物品。

注意，当压力不为零时，不能开盖取物，否则由于压力突然下降，容器内外 要不平衡而冲出烧瓶口或试管口，造成棉塞沾染而发生污染，甚至灼伤操作者五、实验报告（一） 结果 检查灭菌是否彻底二） 思考题1. 干热灭菌操作过程中应注意哪些问题，为什么？2. 为什么干热灭菌所需温度要比湿热灭菌高？3. 高压蒸汽灭菌时，为什么要排尽锅内的冷空气？。