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凝血功能检查凝血功能检查1. 1. 血小板计数血小板计数 2. 2. 血浆凝血酶原时间测定血浆凝血酶原时间测定 3. 3. 部分活化血浆凝血时间测定部分活化血浆凝血时间测定一、血小板计数一、血小板计数n n[ [原理原理] ]血液经稀释液按一定比例稀释和破坏血液经稀释液按一定比例稀释和破坏 红细胞后，充入血细胞计数板中，在显微红细胞后，充入血细胞计数板中，在显微 镜下计数一定范围内的血小板数量，经过镜下计数一定范围内的血小板数量，经过 换算求出每升血液中的血小板数量换算求出每升血液中的血小板数量 n n[ [器材器材] ] 一次性注射器针、一次性微量吸管一次性注射器针、一次性微量吸管 、试管、、试管、2ml2ml吸量管、显微镜、吸量管、显微镜、EDTAEDTA抗凝抗凝 管 n n[ [试剂试剂] ]10g/L10g/L草酸铵稀释液草酸铵稀释液 [ [标本标本] ] 外周血外周血[ [操作操作] ]n n1 1．吸取稀释液．吸取稀释液 取试管取试管1 1支，加入支，加入0.38ml0.38ml草草 酸铵稀释液酸铵稀释液n n2 2．采血．采血 常规抽取静脉血常规抽取静脉血2ML2ML于于EDTAEDTA抗凝抗凝 管中混匀，准确取管中混匀，准确取20ul20ul，加入稀释液中，立，加入稀释液中，立 即充分混匀。

即充分混匀n n3 3．稀释静置．稀释静置 待完全溶血后再混匀待完全溶血后再混匀1min1min，置，置 室温室温10min10minn n4 4．充池静置．充池静置 取混匀后的血小板悬液充入取混匀后的血小板悬液充入 细胞计数板中，静置细胞计数板中，静置10-15min10-15min，使血小板充，使血小板充 分下沉 计数与计算计数与计算n n计数计数 高倍镜计数血细胞计数板中央大方格高倍镜计数血细胞计数板中央大方格四角和中央共五个中方格内的血小板数量四角和中央共五个中方格内的血小板数量n n计算计算 PLT/L=5PLT/L=5个中方格内血小板数个中方格内血小板数Χ10Χ109 9/L/L血小板镜下形态血小板镜下形态n n血小板呈带微折光性的卵圆形或逗点状小血小板呈带微折光性的卵圆形或逗点状小 体，其直径约为红细胞的体，其直径约为红细胞的 1/5 1/5 －－ 1/3 1/3 镜下血小板形态（未染色）镜下血小板形态（未染色）注意事项注意事项n n1 1．．草酸铵稀释液应清洁无细菌、尘埃污染草酸铵稀释液应清洁无细菌、尘埃污染 n n2 2．．采集末梢血时，针刺应达到足够深度，采集末梢血时，针刺应达到足够深度， 使血液流畅，切忌用力挤压。

另外采血时使血液流畅，切忌用力挤压另外采血时 擦去第一滴血后应当立即采血，以防血小擦去第一滴血后应当立即采血，以防血小 板聚集和破坏板聚集和破坏n n3 3．．血液加入血小板稀释液后要充分混匀，血液加入血小板稀释液后要充分混匀， 但不可过度震荡，以免导致血小板破坏和但不可过度震荡，以免导致血小板破坏和 聚集 注意事项注意事项n n4 4．．充池后计数板需静置充池后计数板需静置10-15min10-15min，使血小，使血小 板完全下沉后再计数同时注意保持湿度板完全下沉后再计数同时注意保持湿度 ，避免水分蒸发影响计数结果避免水分蒸发影响计数结果n n5 5．．注意血小板与尘埃等杂质的区别，附着注意血小板与尘埃等杂质的区别，附着 在红细胞旁的血小板也要计数在红细胞旁的血小板也要计数n n6 6、应在、应在1 1小时内计数完毕小时内计数完毕 质量控制质量控制n n充池前，必须轻轻摇动标本充池前，必须轻轻摇动标本2min2min或或200200次次 以上，但用力不宜过大以上，但用力不宜过大n n血小板计数时间过长会导致血小板失去光血小板计数时间过长会导致血小板失去光 泽不易辨认，应把握好计数时间。

泽不易辨认，应把握好计数时间n n每份标本最好计数两次，取均值报告每份标本最好计数两次，取均值报告实验二、血浆凝血酶原时间测定实验二、血浆凝血酶原时间测定 （试管法）（试管法） PTPT检测检测n n[ [原理原理] ]在受检血浆中加入足量的凝血活酶和在受检血浆中加入足量的凝血活酶和 钙离子，测定血浆凝固的时间，即血浆凝钙离子，测定血浆凝固的时间，即血浆凝 血酶原时间（血酶原时间（PTPT）本试验是检查外源性）本试验是检查外源性 凝血系统常用的筛选实验凝血系统常用的筛选实验n n[ [器材器材] ] 水浴箱、试管、注射器、秒表、硅水浴箱、试管、注射器、秒表、硅 化试管、离心机化试管、离心机n n[ [试剂试剂] ] 凝血活酶商品试剂、凝血活酶商品试剂、109mmol/L109mmol/L的枸的枸 橼酸钠溶液橼酸钠溶液n n[ [样本样本] ] 静脉血抗凝后分离的乏血小板血浆静脉血抗凝后分离的乏血小板血浆 操作步骤操作步骤n n1 1．采血并分离血浆．采血并分离血浆 常规静脉采血常规静脉采血1.8ml1.8ml，加入，加入 109mmol/L109mmol/L的枸橼酸钠溶液，充分混匀，的枸橼酸钠溶液，充分混匀，30003000转转/ / 分离心分离心1010分钟，分离血浆。

分钟，分离血浆n n2 2．平衡温度．平衡温度 将将PTPT试剂置室温试剂置室温1515分钟分钟n n3 3、预温、预温 将凝血活酶试剂置将凝血活酶试剂置3737℃℃水浴箱温育水浴箱温育5 5分钟分钟n n4 4、测定、测定 取小试管取小试管1 1支，加入待测血浆支，加入待测血浆0.1ML0.1ML，， 3737℃℃水浴预温水浴预温30s30s，再加入凝血酶原试剂，再加入凝血酶原试剂0.2ML0.2ML，， 立即启动秒表计时立即启动秒表计时n n5 5、计时、计时 不断轻轻倾斜试管，观察试管内液体流不断轻轻倾斜试管，观察试管内液体流 动情况，当液体动情况，当液体 流动缓慢趋于停止时，终止计时流动缓慢趋于停止时，终止计时 ，并记录所需时间并记录所需时间n n6 6、结果报告、结果报告 以直接测定的时间（以直接测定的时间（PTPT）报告 实验三、活化部分凝血活酶时间实验三、活化部分凝血活酶时间 测定（试管法）测定（试管法） APTTAPTT测定测定n n[ [原理原理] ]在在3737℃℃条件下，以白陶土（激活剂）激活条件下，以白陶土（激活剂）激活 ⅪⅪ、、ⅫⅫ因子，以脑磷脂替代血小板第三因子，在因子，以脑磷脂替代血小板第三因子，在 CaCa2+2+参与下，测定血浆凝固所需时间。

本试验是参与下，测定血浆凝固所需时间本试验是 检查内源性凝血系统常用的筛选实验检查内源性凝血系统常用的筛选实验n n[ [器材器材] ] 水浴箱、试管、注射器、秒表、硅化试管水浴箱、试管、注射器、秒表、硅化试管 、离心机、离心机n n[ [试剂试剂] ] APTT APTT商品试剂、商品试剂、109mmol/L109mmol/L的枸橼酸钠溶的枸橼酸钠溶 液、液、25mmol/L25mmol/L氯化钙溶液氯化钙溶液n n[ [样本样本] ] 静脉血抗凝后分离的乏血小板血浆静脉血抗凝后分离的乏血小板血浆 操作步骤操作步骤n n1 1．采血并分离血浆．采血并分离血浆 常规静脉采血常规静脉采血1.8ml1.8ml，加入，加入 109mmol/L109mmol/L的枸橼酸钠溶液，充分混匀，的枸橼酸钠溶液，充分混匀，30003000转转/ / 分离心分离心1010分钟，分离血浆分钟，分离血浆n n2 2．平衡温度．平衡温度 将凝血活酶将凝血活酶(APTT)(APTT)试剂置室温试剂置室温1515分分 钟钟n n3 3、预温、预温 将将APTTAPTT试剂和待测血浆各试剂和待测血浆各0.1ML0.1ML，混匀，混匀 ，置，置3737℃℃水浴箱温育水浴箱温育3 3分钟。

分钟n n4 4、加钙计时、加钙计时 于试管中加入预温至于试管中加入预温至3737℃℃的氯化钙的氯化钙 溶液，并立即计时，置于水浴中不断轻轻振摇溶液，并立即计时，置于水浴中不断轻轻振摇 20s20s后，不时缓慢倾斜试管，观察试管内液体流动后，不时缓慢倾斜试管，观察试管内液体流动 情况，当液体流动停止时，终止计时，并记录所情况，当液体流动停止时，终止计时，并记录所 需时间n n5 5、结果报告、结果报告 以直接测定的时间（以直接测定的时间（APTTAPTT）报告凝血时间测定操作示范凝血时间测定操作示范示 范课后思考题课后思考题1 1、、PTPT、、APTTAPTT测定的注意事项有哪些？测定的注意事项有哪些？2 2、血小板假性减低时可采取哪些措施予以纠、血小板假性减低时可采取哪些措施予以纠 正？正？讲解完毕讲解完毕 开始实验开始实验。