实验六 过氧化物酶活性测定.docx

实验六 过氧化物酶活性测定一、实验目的 过氧化物酶是植物体内普遍存在的、活性较高的一种酶，它与呼吸作用、光合作 用及生长素的氧化等都有密切关系，在植物生长发育过程中，它的活性不断发生 变化，因此测量这种酶，可以反映某一时期植物体内代谢的变化通过本实验了 解过氧化物酶的作用，掌握愈创木酚法测定过氧化物酶二、实验原理在过氧化物酶（POD）催化下，H2O2将愈创木酚氧化成茶褐色产物此产物在 470 nm 处有最大光吸收值，故可通过测 470 nm 下的吸光度变化测定过氧化 物酶的活性四、设备与试剂分光光度计，TDL-5000B型低速冷冻多管离心机（R=18cm），研钵，容量瓶，量 筒，试管，吸管0.05mol・L-1的磷酸缓冲液（pH5.5）, 0.05 mol・L-1愈创木酚 溶液， 2％ H2O2五、实验步骤（一） 酶液的制备取1.0〜5.0g洗净去皮的马铃薯块茎，切碎，放入研钵中，加适量的磷酸缓冲液 研磨成匀浆将匀浆液全部转入离心管中，于3000Xg离心10min,上清液转入 25mL容量瓶中沉淀用5mL磷酸缓冲液再提取两次，上清液并入容量瓶中，定 容至刻度，低温下保存备用二） 过氧化物酶活性测定酶活性测定的反应体系：依次加入2.9mL0.05mol・L-1磷酸缓冲液；1.0mL2 % H2O2； 1.0mL 0.05mol・L-1愈创木酚和0.1mL酶液。

用加热煮沸5min的酶液 为对照，反应体系加入酶液后，立即于34°C水浴中保温3min，然后迅速稀释1 倍，470nm波长下比色，每隔1min记录1次吸光度A470，共记录5次，然后 以每分钟内A470变化0.01为1个酶活性单位（U）六、实验结果以每分钟内A470变化0.01为1个过氧化物酶活性单位（U）△他沖x Vt过氧化物酶活性（U • g1 WX VsXO. oixtW——马铃薯鲜重（g）； t 反应时间（m in）；VT——提取酶液总体积（mL）； VS——测定时取用酶液体积（mL）七、注意事项酶液的的提取过程要尽量在低温温条件下进行H2O2要在反应开始前加，不能 直接加入实验七 过氧化氢酶活性的测定一、实验目的 过氧化氢酶普遍存在于植物的所有组织中，其活性与植物的代谢强度及抗寒、抗 病能力有一定关系，故常加以测定熟悉过氧化氢酶活性的不同测定方法二、实验原理滴定法：过氧化氢酶（CAT）属于血红蛋白酶，含有铁，它能催化过氧化氢分解 为水和分子氧，在此过程中起传递电子的作用，过氧化氢则既是氧化剂又是还原 剂可根据 H2O2 的消耗量或 O2 的生成量测定该酶活力大小在反应系统中加 入一定量（反应过量）的过氧化氢溶液，经酶促反应后，用标准高锰酸钾溶液（在 酸性条件下）滴定多余的过氧化氢，即可求出消耗的 H2O2 的量。

5H2O2+2KMnO4+4H2SO4—5O2+2KHSO4+8H2O+2MnSO4 氧电极法：过氧化氢在过氧化氢酶的作用下，放出氧气，其放氧量与过氧化氢酶 的活性成正比放出的氧可用氧电极定量测定磷酸盐缓冲液（pH7.0）取磷酸二氢钾0.68g，加O.1mol/L氢氧化钠溶液29.1ml, 用水稀释至100ml，即得磷酸盐缓冲液（pH7.8）:取磷酸氢二钠35.9g，加水溶解，并稀释至500ml已液：取磷酸氢二钠2.76g，加水溶解，并稀释至100ml取甲液91.5，乙8.5混合得。