穿山龙中薯蓣皂苷元的提取.docx

穿山龙中薯蓣皂苷元的提取、分离、鉴定薯蓣皂苷元俗称薯蓣皂素，存在于薯蓣科(Dioscoreaceae)植物中，一般含量约为1〜3%, 我国薯蓣科植物资源丰富种类亦多，分布南北各地其中作为薯蓣皂貳元生产原料的植物， 主要有盾叶薯蓣(Dioscorea zingiberesis C.H.Wright)俗称黄姜、穿龙薯蓣(D.nipponica Makino)俗称穿山龙，用其根茎提取薯蓣皂貳元薯蓣皂貳属甾体皂貳，水解可得薯蓣皂貳元，这种甾体皂貳元，是近代制药工业中合成甾体 激素和甾体避孕药的重要原料本实验以穿山龙为原料，穿山龙中含有多种甾体皂貳，有水溶性皂貳和水不溶性皂貳，结构 多数不详，总皂貳水解可得薯蓣皂貳元，其含量可达1.5〜2.6%一主要成分理化性质薯蓣皂貳(dioscin)为无定形粉末或针状结晶，mp288°C可溶于乙醇、甲醇、乙酸，难溶 于乙醚等弱极性有机溶剂，不溶于水薯蓣皂貳元(diosgenin)为白色结晶性粉末，mp204〜207C， [a]25D129 o (C=1.4氯仿) 可溶于常用有机溶剂及醋酸中，不溶于水二目的要求1•掌握亲脂性中性成分(甾体皂貳元)的提取方法2. 掌握薯蓣皂貳及薯蓣皂貳元的性质和检识方法。

三实验原理薯蓣皂貳元在植物体内与糖结合成甙 但经水解可得薯蓣皂貳元和单糖 利用薯蓣皂貳元不 溶于水，易溶于有机溶剂的性质，可用石油醚连续回流将其提取出来四实验方法及注意事项1•预实验取穿山龙粗粉5g,加水浸泡(1:10) 1小时或置80C水浴上温浸30分钟，过滤得滤液供以 下试验1) 泡沫试验：取供试液2ml于试管中，紧塞试管口后猛力振摇，试管内液体则产生大量 的持久性的似蜂窝状泡沫(示有皂貳)2) 溶血试验：取2%血球悬浮液1ml,加生理盐水8ml,再加上述供试液1 ml,混合均匀 后放置，几分钟内则溶液由红色混浊变成红色透明，产生溶血现象(示有皂貳)注：此试验可同时作空白对照以兹比较现象更为明显操作方法相同，只以生理盐水 1ml 代替供试液即可)2.薯蓣皂貳元的提取、分离穿山龙粗粉(40g)置园底烧瓶中，加水200ml,浓H2SO420ml，室温浸泡24小时，文火加热回流4〜6小时，放冷，倾出酸水液酸性药渣用清水漂洗三次，然后将药渣倒入乳钵中，力BNa2CO3粉末，反复研磨调PH至中性、 水洗、抽干中性药渣低温(80C )干燥12小时干燥药渣置乳钵中研成细粉，置索氏提取器中，以石油醚(60〜90C沸程)为溶剂连续回 流提取4〜5小时。

石油醚提取液回收石油醚至剩10〜15ml时，迅速倾入小三角瓶中、放置使充分冷却，过滤 滤液 沉淀用少量冷石油醚洗二次，抽干薯蓣皂貳元粗品无水 EtOH 或 CHC13： MeOH (1:3)重结晶薯蓣皂貳元精制品干燥、称重、计算收率薯蓣皂貳元纯品3. 薯蓣皂貳元的鉴定(1) 物理常数的测定：mp： 204〜207°C[a]25D-129 o (C=1.4 氯仿)2) 化学检识：① 醋酐-浓硫酸反应(Liebermann-Burchard反应)取样品少许，置白瓷皿中，加冰醋酸0.5ml使溶解，续加醋酐0.5ml搅匀，再于溶液的边沿 滴加1滴浓硫酸，液体则呈现紫红色，最后变为乌绿色② 氯仿-浓硫酸反应(Salkowski反应)：取样品少许，用1ml氯仿溶解，加入1ml浓硫酸后，在氯仿层出现红或蓝色，硫酸层有绿 色荧光出现3) UV鉴定UV 九H2SO4 max nm(log£)： 334 (3.68) 412 (4.1) 512 (3.52)(4) 薄层层析吸附剂：硅胶-CMC薄层板样 品：5%自制薯蓣皂貳元的乙醇液对照品：5%薯蓣皂貳元标准品的乙醇液展开剂：苯：乙酸乙酯(8:2)显色剂：25%磷钼酸的乙醇溶液(喷洒后110C加热5分钟)〖注〗1•原料经酸水解后应充分洗涤呈中性，以免烘干时炭化。

2•在干燥水解原料的过程中，应注意压散团块和勤翻动，以利快干3•在连续回流提取过程中，由于使用的石油醚极易挥发损失，故水浴温度不宜过高，能使石 油醚微沸即可此外可加快冷凝水的流速，以增加冷凝效果4•回收石油醚的蒸馏操作，不必另换蒸馏装置只将索氏提取器中的滤纸筒取出，再照原样 装好，继续加热回收烧瓶中的溶剂，待溶剂液面增高至虹吸管顶部弯曲处1cm处，暂停回 收，取下抽提器，将其中石油醚移置另外容器中如此反复操作，即可完成回收石油醚的操 作5•在连续提取过程中，欲检查有效成分是否提取完全，可取抽提器中提取液数滴，滴于白瓷 皿中，挥散溶剂、观察有无残留物然后进行醋酐-浓硫酸反应若反应呈阴性，示已提取 尽6•所得薯蓣皂貳元粗品可作溶点测定，若测定不合格时再进行重结晶处理五实验指导1•实验安排：(需16学时)2•思考题(1) 甾体皂貳可用哪些反应进行鉴定？(2) 试设计一种从穿山龙中提取薯蓣皂貳的工艺流程，并说明提取、分离原理3) 使用石油醚作提取溶剂时，操作中应注意哪些事项？。