蛋白质印迹缓冲液和母液.doc

精品文档】如有侵权，请联系网站删除，仅供学习与交流蛋白质印迹缓冲液和母液.....精品文档......蛋白质印迹缓冲液和母液RIPA 缓冲液RIPA 缓冲液含有离子去垢剂脱氧胆酸钠作为活性成分，特别适用于破坏核膜提取细胞核内物质RIPA 缓冲液产生的背景低，但可使激酶变性它还能破坏蛋白质与蛋白质的相互作用，因此可能会给免疫沉淀分析和pull-down实验带来一些问题50 mM Tris HCl，pH 8.0150 mM NaCl​1% NP-40​0.5% 脱氧胆酸钠​0.1% SDS​10% 脱氧胆酸钠母液（5 g 脱氧胆酸钠溶于 50 mL 溶液中）避光保存NP-40 缓冲液20 mM Tris HCl，pH 8.0137 mM NaCl10% 甘油1% NP-402 mM EDTA细胞骨架结合蛋白提取缓冲液10 mM Tris，pH 7.4100 mM NaCl1 mM EDTA1 mM EGTA1 mM NaF​20 mM Na4P2O72 mM Na3VO41% Triton X-10010% 甘油0.1% SDS0.5% 脱氧胆酸盐可溶蛋白缓冲液20 mM Tris-HCl，pH 7.51 mM EGTA（Ca2+​ 螯合剂）制备原钒酸钠所有流程必须在通风橱中进行。

1.       用双蒸水制备 100 mM 原钒酸钠溶液2.       用 HCl 将 pH 调节至 9.03.       煮沸至无色4.       冷却至室温5.       再次将 pH 调节至 9.06.       再次煮沸至无色7.       重复以上循环，直到煮沸并冷却溶液之后的 pH 保持 9.08.       用水补至初始体积9.       分装之后保存于 -20 ℃10.   如果样品变黄，丢弃样品避免煮沸期间体积变化过大，可用盖子稍微盖住容器上方，减少蒸发TBS 10×（浓缩 Tris 缓冲盐溶液）1 L 溶液：24 g Tris 碱（式量：121.1 g）88 g NaCl（式量：58.4 g）溶于 900 mL 蒸馏水中用 12 N HCl 将 pH 调节至 7.6加入蒸馏水至终体积为 1 L要制备 1× 溶液，将 1 份 10× 溶液与 9 份蒸馏水混合，并再次将 pH 调节至 7.61× 溶液的最终摩尔浓度为 20 mM Tris 和 150 mM NaClTris 缓冲液的替代配方同时含有 Tris 碱和 Tris-HCl这可避免大量使用具有潜在危险性的盐酸来中和单独的 Tris 碱。

TBS 10× 替代配方（浓缩 Tris 缓冲盐溶液）1 L 溶液：24 g Tris-HCl（式量：157.6 g）5.6 g Tris 碱（式量：121.1 g）88 g NaCl（式量：58.4 g）溶于 900 mL 蒸馏水中1.       在室温下将溶液 pH 调节至约 7.6如果溶液过碱，用浓 HCl 将 pH 调节至 7.6；如果溶液过酸，用浓 NaOH 将 pH 调节至 7.62.       加入蒸馏水至终体积为 1 L3.       要制备 1× 溶液，将 1 份 10× 溶液与 9 份蒸馏水混合，并再次将 pH 调节至 7.64.       1× 溶液的最终摩尔浓度为 20 mM Tris 和 150 mM NaClTBST（Tris 缓冲盐溶液，0.1% Tween 20）1 L 溶液：100 mL TBS 10×900 mL 蒸馏水1 mL Tween 20中强膜再生液15 g 甘氨酸1 g SDS10 mL Tween 201.       用超纯水将体积调节至 800 mL2.       将 pH 调节至 2.23.       加蒸馏水至 1 L。

高强膜再生液需要在通风橱中进行100 mL 溶液：20 mL SDS 10%12.5 mL Tris HCl，pH 6.8，0.5 M67.5 mL 蒸馏水在通风橱中加入 0.8 mL β-巯基乙醇细胞核分离实验方案试剂缓冲液 A10 mM HEPES​1.5 mM MgCl210 mM KCl0.5 DTT​0.05% NP-40（或 0.05% Igepal 或 Tergitol），pH 7.9要制备 250 mL 缓冲液 A 的母液：HEPES：1 M = 238.3 g/L，因此 10 mM = 0.59 g/250 mLMgCl2：1 M = 203.3 g/L，因此 1.5 mM = 0.076 g/250 mLKCl：1 M = 74.5 g/L，因此 10 mM = 0.187 g/250 mLDTT：1 M = 154.2 g/L，因此 0.5 mM = 0.019 g/250 mLNP-40： 0.05%细胞核分离实验方案试剂缓冲液 B5 mM HEPES1.5 mM MgCl2​0.2 mM EDTA0.5 mM DTT26% 甘油 (v/v)，pH 7.9要制备 250 mL 缓冲液 B 的母液：HEPES：1 M = 238.3 g/L，因此 5 mM = 0.295 g/250 mLMgCl2：1 M = 203.3 g/L，因此 1.5 mM = 0.076 g/250 mLEDTA：1 M = 372.2 g/L，因此 0.2 mM = 0.0186 g/250 mLDTT：1 M = 154.2 g/L，因此 0.5 mM = 0.019 g/250 mL​26% 甘油 (v/v) = 65 mLTBS 0.025% Triton X-1001 L 溶液：250 µL Triton X-1001 L TBS，pH 7.6–7.81.6% H2O2（过氧化氢）的 TBS 溶液400 mL 溶液：6.4 mL H2O2 (GPR = 30% w/w)393.6 mL TBS，pH 7.6–7.8一抗的 TBS 溶液（含 1% BSA）以使用稀释度为 1:10 的一抗为例。

1 mL 溶液：​100 µL 一抗10 mg BSA900 µL TBS，pH 7.6–7.8生物素化二抗的 TBS 溶液（含 1% BSA）以使用稀释度为 1:200 的生物素化二抗为例1 mL 溶液：5 µL 生物素化二抗995 µL TBS，pH 7.6–7.8ABC（抗生物素-生物素复合物）的 TBS 溶液以每种组分的使用稀释度为 1:100 的 ABC 为例1 mL 溶液：10 µL 链霉亲和素​10 µL HRP（或 AP）-生物素980 µL TBS，pH 7.6–7.8碳酸氢盐/碳酸盐包被缓冲液 (100 mM)3.03 g Na2CO36.0 g NaHCO​3（1 L 蒸馏水），pH 9.6​PBS：1.16 g Na2HPO40.1 g KCl​0.1 g K3PO4​4 g NaCl（500 mL 蒸馏水），pH 7.4。