血液基因组DNA提取标准操作规程.doc

1 目的：规范血液基因组DNA提取的操作2 适用范围：血液基因组DNA提取3 职责：技术员4 内容/程序：4.1 仪器及耗材4.1.1 1.5ml、2ml灭菌离心管4.1.2 1ml、200ul灭菌枪头4.1.3 KarrotenTM Mini Column柱4.1.4 手动移液器4.1.5 金属浴4.1.6 高速离心机4.2 试剂4.2.1 Buffer KB平衡液、Buffer KBL14.2.2 Buffer KW4.2.3 70% 乙醇4.2.4 KE4.3 提取前准备4.3.1 详细阅读该SOP熟悉各步骤，并准备好所有的试剂盒组分及温浴条件4.3.2 KBL1在低温时可能产生混浊或沉淀，在37-65℃温浴片刻即可4.3.3 Buffer KW第一次使用前请按瓶上标签加入50ml70%乙醇，每次使用后，请立即拧紧盖子4.4 操作步骤4.4.1 取一KarrotenTM Mini Column柱装在一个2ml收集管上（已备）加入300ulBuffer KB平衡液至柱子内，室温13000rpm离心1min，使平衡液完全流过柱子弃收集管中的滤液，将空柱套回收集管内；注意：柱子不平衡，将导致DNA产率的减少。

4.4.2 按200ul全血（适合各种抗凝剂，EDTA较好）加入1000ulKBL1的比例加入KBL1，混匀，静置3min如果样品是血清等无细胞体液应按比例增加体积 注意：1）.静止时间超过3min不影响DNA抽提2）.取样最佳体积因物种不同有所差异人血以100-300ul为最佳，小鼠以50-100ul为最佳且当全血体积小于200ul时，KBL1体积不能小于1000ul4.4.3 将混合液转移至已平衡的吸附柱内，室温13000rpm离心30s，使裂解液完全流过柱子保留柱，弃去收集管中的过滤液，将柱重新放入收集管；注意：如混合液体积过大，可分数次上柱，每次上样量不要超过700ul4.4.4 加入700ul Buffer KW，室温13000rpm离心30s，弃去收集管中的过滤液，保留柱注意：Buffer KW在首次使用之前必须加入50ml70%乙醇，并置于室温下保存4.4.5 （可选）重复用700ul70%乙醇（室温）洗涤柱子，室温12000rpm离心1min4.4.6 弃收集管中的滤液，将空柱套回2ml收集管内室温下最高转速或13000rpm离心2min以甩干柱子基质；残余的液体注意：此步骤不可省，否则将导致乙醇残留于DNA中，影响后续反应4.4.7 把柱子装在一个新的1.5ml离心管上，加入50ul的KE（可用灭菌的TE10mM Tris-HCl,pH8.0或纯水代替，纯水可预先用NaOH调pH值至8.0），65℃放置5-10min。

13000rpm离心1min以洗脱DNA注意：小心加KE到柱中吸附膜的中间部位，并确保液体将膜全部覆盖4.4.8 DNA可保存于4℃，若长时间保存，可冻存于-20℃。