复方磺胺甲恶唑的含量测定.doc

高效液相色谱法测定复方磺胺甲噁唑片的含量［实验目的］1 掌握高效液相色谱法测定复方磺胺甲噁唑片的含量的基本原理 2 掌握高效液相色谱仪的操作及注意事项［实验原理］结构特点：苯环（紫外吸收） 、芳伯胺基（重氮化-偶合反应） 、磺酰胺基上 的活泼氢有一定酸性，可与碱成盐或与重金属离子反应分子式： C10H11N3O3S 分子质量：253.28本品为白色结晶性粉末熔点 167℃，易溶 于稀盐酸；氢氧化钠溶液或氨水，几乎不溶于水无臭，味微苦外标法是以 待测组分的纯品作为对照品，以供试品中待测组分的峰面积或峰高进行定量分 析，本实验采用峰面积进行定量分别精密量取一定量的对照品和供试品配制 成溶液，分别进相同的体积的对照品溶液和供试品溶液，在完全相同的色谱条 件下进行色谱分析，测定峰面积［实验仪器、试剂］仪器：75-4 型紫外可见分光光度计 (上海分析仪器厂 )，高效液相色谱仪 ， 色谱柱，超声波清洗仪， 紫外吸收检测器，无油隔膜真空泵， 抽滤装置， 电 子分析天枰，称量纸，研钵，容量瓶（100ml,50ml,25ml,10ml） ，漏斗，滤纸， 烧杯，玻璃棒，移液枪 试剂：复方磺胺甲噁唑片(山东新华制药股份有限公司 ,批号 0412073 )，甲氧 苄啶，磺胺甲噁唑，甲醇（色谱纯）,水（超纯水） ，乙腈(色谱纯)，三乙胺 (色谱纯)，醋酸溶液（1→100） ，［实验步骤］1.色谱条件与系统适用性试验：填充剂：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂流动相：水-乙腈-三乙胺（799∶200∶1） （用醋酸溶液（1→100）调节 pH 值至 5.9±0.1 ）检测波长：254nm流速：1.0mL/min进样量：20ul理论塔板数：按甲氧苄啶计算应不低于 2000，甲氧苄啶与磺胺甲噁唑峰之间的分离度应大于 5.0。

甲氧苄啶峰与磺胺甲噁唑峰的拖尾因子均不得过2.02.测定法 2-1 溶液的配制2-1-1 对照品储备液的配制：取磺胺甲噁唑 200mg，精密称定，置50ml 容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，备用2-1-2 对照品溶液的配制：精密量取上述储备液 2ml，置 50ml 容量瓶中，加流动相稀释至刻度，得浓度约为 0.16mg/ml 的磺胺甲噁唑对照品溶液2-1-3 供试品溶液的配制：取样品 10 片，精密称定，得其平均片重，粉碎，精密量取细粉适量（约相当于磺胺甲噁唑 0.16g） ，置 100ml 容量瓶中，加适量甲醇溶解并用甲醇稀释至刻度，摇匀，过滤，精密量取续滤液 5ml，置50ml 容量瓶中，用流动相稀释至刻度，得供试品溶液2-2 供试品的含量测定分别量取上述对照品溶液 20ul、供试品溶液 20ul 分别进样记录磺胺甲噁唑的峰面积，按外标法以峰面积计算其磺胺甲噁唑在复方磺胺甲噁唑中的含量［方法学验证］1 线性范围精密量取磺胺甲噁唑 12.5mg，置 25ml 的容量瓶中，加甲醇溶解并稀 释至刻度，摇匀分别精密量取上述溶液 0.5ml、1.5ml、2.5ml、3.5ml、4.5ml 于 5 个 10ml 容量瓶中加甲醇稀释至刻度。

分别进样 10ul按上述色谱条件测定 峰面积，以峰面积为纵坐标，磺胺甲噁唑的浓度为横坐标绘制标准曲线，计算 回归方程 2 精密度实验 量取上述供试品溶液 20ml，每次吸取 20ul，连续进样 6 次，测定峰 面积，求得磺胺甲噁唑峰面积 RSD 3 准确度试验取复方磺胺甲噁唑片 20 片，粉碎，精密量取已知含量的复方磺胺甲噁唑粉末 5 份（每份取的复方磺胺甲噁唑粉末的量约相当于含磺胺甲噁唑0.16g） ，再向每份中加入磺胺甲噁唑纯品 0.16mg，同置 100ml 容量瓶中，加适量甲醇溶解并用甲醇稀释至刻度，摇匀，过滤，精密量取续滤液 5ml，置 50ml容量瓶中，用流动相稀释至刻度，得其 5 份溶液每份进样 20ul，测定峰面积求得磺胺甲噁唑的平均回收率［实验结果］ 对照品供试品磺胺甲噁唑的浓度（C）磺胺甲噁唑的峰面积（A）C（对）/C（供）=A(对)/A（供）［注意事项及参考文献］1 .开机前先将流动相过滤和超声 2 过滤时有时会出现流动相漏液操作时，应先向滤瓶内倒入少量流动相，观 察是否漏液并开始过滤，若未漏液，再向滤瓶中添加流动相 3 超声时，瓶外液体的液面应高于瓶内流动相的液面，否则流动相内的气体可 能无法排出液体，气体仍然残留在流动相内，以致开机排气时无气泡排出。

4 开机排气结束后，应先将流动相流量调小，再关闭排气阀，否则会导致柱压 瞬间升高超过压力上限，致使泵停止工作 5 .反相高效液相色谱仪冲洗柱子时，应尽量避免使用纯水流动相冲洗柱子，因 为水极性强，会损害色谱柱（反相高效液相色谱仪的色谱柱 C18 是非极性的） ， 导致柱效下降6.冲洗色谱柱时，还可辅助以不同比例的混合流动相冲洗色谱柱，以冲出不同 极性的残留物质，但最后还是要用纯有机流动相冲洗色谱柱一段时间 7 在实验过程中会出现压力超过上限或压力偏高（在压力上限范围内有机流动 相和水流动相流速之和无法达到 1ml/min） ，有可能是柱内有残留物质未被冲出， 此时应用较大流速（≤1ml/min）的有机流动相充分冲洗色谱柱若条件允许， 也可采用梯度洗脱的方式冲洗色谱柱压力过高也有可能是滤头堵塞，此时可 将滤头取出放到有机溶剂中超声 8 若隔天或更长时间不使用液相色谱仪，应将两流动相瓶中均倒入纯的有机流 动相（因为水流动相长时间不用会滋生细菌，污染滤头和色谱柱，导致下次开 机使用时会出现鬼峰，基线不稳） 9 .进样时所进样品的体积应不小于色谱柱的最大容积，且进样时注射器里的气 泡一定要排出，不可将气泡打进色谱柱。

参考文献：《中华人民共和国药典》2010 年版。