异基因骨髓间质干细胞移植治疗系统性红斑狼疮.doc

异基因骨髓间质干细胞移植治疗红斑狼疮11例临床分析基金项目：国家自然科学基金（30772014）；教育部高等学校博士点专项基金项目（20050315001）；江苏省医学重点人才基金作者单位：210008 南京，南京大学医学院附属鼓楼医院风湿免疫科通信作者：孙凌云，Email: lingyunsun2001@【摘要】 目的 探讨异基因骨髓间质干细胞（MSC）移植治疗难治性系统性红斑狼疮（SLE）的疗效及安全性方法 血缘相关供者骨髓中分离培养MSC移植治疗11例SLE患者，移植前予环磷酰胺（CTX）0.8～1.8g，分2～3次静脉输注，输注后隔日予MSC移植，移植细胞数（1×106/kg体重）评价患者移植前后的临床表现和实验室检查的改变 结果 11例SLE患者病程1～15年，SLEDAI积分12.8±5.18例存在肾脏损害，表现为狼疮性肾炎，24h尿蛋白定量2045±935mg（517.5～3690mg），其中2例患者为肾功能不全（血肌肝分别为474和153umol/L，GFR 分别为65和45 ml/min），其中5例患者存在低蛋白血症（17.7～33g/L）；1例患者合并重度血小板减少和股骨头坏死；2例患者曾患神经精神狼疮。

异基因MSC移植治疗SLE后，所有患者无移植并发症患者SLEDAI积分降低为5.8±3.8（移植后1月，n=9，P<0.01），C3升高（移植前 0.50±0.12g/L，移植后1月0.75±0.10g/L，n=9）ANA和ds-DNA抗体滴度降低24h尿蛋白定量降低为981±559mg（移植后1月，n=8），移植后2月（2039±517mg vs. 1055±689mg，n=5），移植后6月（2577±883mg vs. 572±117mg，n=4）5例低蛋白血症患者血清白蛋白上升，移植后1月（移植前28.0±6.0 g/L vs. 32.3±6.6g/L，n=5，p＝0.021），移植后2月（移植前23.3.0±8.0 g/L vs. 30.0±8.3g/L，n=2，p<0.01），移植后4月（移植前23.3.0±8.0 g/L vs. 34.4±9.0g/L，n=2，p<0.01），移植后8月（移植前23.3.0±8.0 g/L vs. 36.4±8.6g/L，n=2，p<0.01）2例肾功能不全患者GFR轻读上升，其中1例移植后1月肌肝降低为389umol/L结论 异基因MSC移植治疗难治性SLE有效安全，有利于狼疮病情缓解。

MSC取材方便，扩增迅速，输注安全，经济异基因MSC移植治疗SLE的长期疗效评估需进一步随访关键词】骨髓间质干细胞； 移植； 红斑狼疮，系统性Clinical report on allogenic bone marrow derived mesenchymal stem cells transplantation for refractory systemic lupus erythematosusDepartment of Rheumatology & Immunology, the Affiliated Drum Tower Hospital of Nanjing University Medical School, Jiangsu 210008, China P.R.Corresponding author: SUN Ling-yun, Email: lingyunsun2001@Objective: To explore the clinical efficacy and safety of allogenic bone marrow derived mesenchymal stem cells transplantation (MSCT) in patients with severe and treatment-refractory systemic lupus erythematosus(SLE). Methods: Eleven patients with refractory SLE, nine female and two male aged 16~41(mean 25±7.6 years), were enrolled in the study and gave consent to the study which was approved by the Ethics Committee of the Affiliated Drum Tower Hospital of Nanjing University Medical School. The bone marrow of related healthy donors were aspirated and the mesenchymal stem cells(MSCs) were expanded in vitro. Each patients were given MSCs 1×106/kg body weight introvenously. Before MSCT, all patient were given cyclophosphamide(CTX) 400~1800mg divided by two to three times. The clinical manifestations and laboratory tests were compared before and after MSCT. Results: The eleven patients were followed up for one to thirteen months after MSCT. All patients have not developed transplantation related complications. The Systemic Lupus Erythematosus Disease Activity Index (SLEDAI) score decreased from 12.8±5.1 to 5.8±3.8 one month after MSCT(n=9, p<0.01). Urine protein concentration decreased from 1985.18±892.49 mg/24h to 962.20±525.99 mg/24h one month after MSCT (p<0.01, n=10). Five patients that were followed up for six months, the urine protein concentration decreased significantly (523.68±147.55 mg/24h vs. 2477.68±796.50mg/24h, n=5, p<0.01). Five patients with hypoproteinemia, the serum albumin increased gradually. One month after MSCT (28.0±6.0 g/L vs. 32.3±6.6g/L, n=5, p=0.021), two months after MSCT (23.3.0±8.0 g/L vs. 30.0±8.3g/L, n=2), four months after MSCT (23.3.0±8.0 g/L vs. 34.4±9.0g/L, n=2), eight months after MSCT (23.3.0±8.0 g/L vs. 36.4±8.6g/L, n=2). Complement C3 increased from 0.50±0.12 g/L to 0.75±0.10 g/L(n=9, p<0.01) one month after MSCT. The anti-nuclear antibody (ANA) and anti-dsDNA antibody titer decreased after MSCT. In two patients with chronic renal failure, the serum creatinine fell down mildly. Conclusion: Treating refractory SLE with allogenic MSCT is effective and safe. However, further observation is required to evaluate long term efficacy.Key words: bone marrow mesenchymal stem cells; transplantation; lupus erythematosus, systemic 系统性红斑狼疮（SLE）是多因素参与的特异性自身免疫病，通过大量自身抗体和免疫复合物造成组织损伤。

迄今为止，尽管新型免疫抑制剂如霉酚酸酯、来氟米特和生物制剂对SLE有一定的疗效，但糖皮质激素和细胞毒药物环磷酰胺(CTX)仍是治疗SLE最有效的方法，但仍有20%-30%患者无效造血干细胞移植（HSCT）治疗SLE是近年来开展的又一疗法，临床取得一定效果，但也存在许多问题，如自体HSCT高复发和异体HSCT的预处理风险及移植物抗宿主病（GVHD）等，难以作为常规治疗骨髓间质干细胞（MSCs）是骨髓内造血干细胞（HSCs）之外的另一类干细胞，是骨髓微环境的重要组成部分随着对MSC认识的不断深入，还发现MSC具有低/无免疫原性和免疫调节功能，可通过T、B淋巴细胞及树突状细胞（DC）等免疫细胞发挥免疫抑制作用目前研究表明SLE骨髓间MSCs存在缺陷，且参与疾病的发生[1]，因此我们尝试用异基因MSC移植治疗SLE并对其机制进行了初步研究我们在用异基因骨髓MSCs移植治疗狼疮鼠（MRL/lpr）有效的基础上，已对11例重症难治性系统性红斑狼疮采用异基因骨髓MSC移植治疗，总结如下1 资料和方法1.1 病例资料11例SLE患者于2007年3月至2008年4月于我院行异基因骨髓间质干细胞移植，均符合美国风湿病学院（ACR）1997年修订的SLE分类标准，其中女性9例，男性2例，平均年龄25岁（16～41岁）。

所有患者均为积极药物治疗仍反复发作者11例SLE患者病程1～15年，狼疮活动积分（SLEDAI）11.7±5.1其中10例存在肾脏损害，表现为狼疮性肾炎，24h尿蛋白定量1989±842mg（518～3690mg），其中2例患者为肾功能不全（血肌肝分别为474和153umol/L，GFR 分别为65和45 ml/min），其中5例患者存在低蛋白血症（17.7～33g/L）；1例患者合并重度血小板减少和股骨头坏死；2例患者曾患神经精神狼疮具体临床和实验室资料见表1本研究遵循程序符合本单位负责人体试验委员会所制定的伦理学标准，并得到该委员会的批准，取得所有患者的知情同意1.2 方法1.2.1 异基因骨髓MSCs采集、分离、扩增和培养：移植前取相关供者骨髓30～45ml，肝素抗凝，生理盐水稀释至2倍所取骨髓量，缓慢加入预先加有等体积的淋巴细胞分离液（Ficoll，1.077）分离液面上，2000转离心30分钟，收集中间层细胞，洗涤后以5×106细胞/ml接种于25cm2培养瓶中，每瓶含5ml 低糖DMEM完全培养液（含10%胎牛血清），置37℃、5 %CO2、饱和湿度CO2培养箱培养24～48h后换液，去掉非贴壁细胞，以后每3d以低糖DMEM完全培养液换液1次。

培养至贴壁细胞90％融合时，用0.25％胰蛋白酶消化，按1。