几种抗氧化剂含量的测定.docx

几种抗氧化剂含量的测定、 实验目的1. 掌握抗坏血酸（AsA）含量的测定二、实验原理抗坏血酸（AsA）测定的原理：（ 1） AsA 生理生化作用抗坏血酸是植物细胞重要的抗氧化剂，通过清除体内的自由基和活性氧（h2o2）等, 使机体免受氧化损伤2） AsA 含量的测定方法a、 2, 6-二氯靛酚滴定法b、 2, 4-二硝基苯肼分光光度法c、 荧光分光光度法d、 近红外分光光度法e、 电位滴定法f、 钼蓝比色法g、 2,2-联吡啶分光光度法（3） 二联吡啶法测定AsA含量的原理i: AsA+Fe3+ 还以・ Fe2+3 厂C, 60minii:卜于+十二比哎 红色黎合物iii:测定红色螯合物的吸光值A.35nm三、 实验材料和主要试剂实验材料：菠菜叶片实验试剂：5%TCA 溶液、150mmol/L NaH2PO4（PH7.4）溶液、10%TCA 溶液、44% H3PO4、 4% 2, 2-二联吡啶；3% FeCl3四、 实验步骤（一） AsA 含量的测定1、 标准曲线的制作配制浓度为1mmol/L的AsA标准母液，分别配制成0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、 0.7mmol/L的AsA标准液。

分别取0.2ml AsA标准液，分别加入0.2ml NaH2PO4（PH7.4） 溶液、0.2ml H2O，混匀，30s 后，分别加入 0.4ml 10% TCA 溶液、0.4ml H3PO4溶液、0.4ml2, 2-二联吡啶溶液，0.2ml 3%FeC13溶液，37°C，60min，测人厶彳厶丽以AsA浓度为横坐标，以 OD 值为纵坐标，制作标准曲线2、提取称2.5g菠菜叶片1份，将样品剪碎加入10ml 5% TCA,研磨，15000xg离心lOmin，上清 液定容至25ml3、测定分别取0.2ml上述制备的上清液和去离子水，分别加入0.2ml NaH2PO4 (PH7.4)溶液、0.2ml H2O，混匀，30s 后，分别加入 0.4ml 10% TCA 溶液、0.4ml H3PO4溶液、0.4ml 2, 2-二联吡 啶溶液，0.2ml 3%FeCl3溶液，37 °C, 60min,在 525nm下测定 OD 值根据标准曲线计算样品中AsA的含量五、实验结果AsA标准浓度对应OD值表AsA标准浓度00.10.20.30.40.50.60.7OD值00.1020.2390.3660.5010.6550.7820.9AsA含量标准曲线y = 1.3095x +—线性(系列1)0.0012+系列1R2 = 0.9808抗氧化剂含量(ug/gFW)=抗氧化剂浓度(ug/ml) *提取液体积(ml) /样品的重量(g)抗氧化剂浓度(ug/ml) = (3.214*17.613+0.0012) /1.3095=43.23ug/ml抗氧化剂含量(ug/gFW) 43.23*25ml/2.500g=432.3 (ug/gFW)六、分析和讨论1. 抗氧化剂由植物体合成，待植物被破坏易被氧化，在实验中需迅速操作，防止抗氧化剂 被氧化。

2. 还原型谷胱甘肽是植物细胞内另一种重要的抗氧化剂它含有活性的巯基，极易被氧化 GSH 可以预知不饱和脂肪酸生物膜组分及其他敏感部位的氧化分解，防止膜脂过氧化，从而保持细胞膜系统的完整性，延缓细胞的衰老和增强植物抗逆性3. 活性氧对许多生物功能分子有破坏作用，包括引起膜的过氧化作用其中，植物体中也 有防御系统，降低或消除活性氧对膜脂的攻击能力，即为抗氧化剂这些抗氧化剂是天 然的非酶自由基清除剂。