植物细胞骨架观察ppt课件.ppt

;;油镜的番茄表皮细胞的胞间连丝;实验五 植物细胞骨架显示与察看;问题§1、什么叫细胞骨架？§2、广义的细胞骨架指什么？§3、狭义的细胞骨架又指什么？§4、20-25nm_______;6-7nm___________§ 8-11nm______;一、目的与要求§1、了解植物细胞骨架制片方法和其成分显示的原理§2、掌握考马斯亮蓝R250染色方法§3、察看细胞骨架在细胞中的分布情况;二、原理§ 细胞骨架指细胞质中纵横交错的纤维网络构造可分为微管、微丝和中间纤维，它对细胞形状维持、细胞生长、运动、分裂、分化和物质的运输等起着重要的作用当细胞用适当浓度的Triton-X-100处置时，可将质膜中和细胞内蛋白质溶解，而骨架系统的蛋白质不被破坏，经固定和考马斯亮蓝R250染色后，可使骨架蛋白着色而被显示三、资料、器材与试剂§1、资料§新颖洋葱鳞茎的内表皮2、器材§滴管、载玻片、盖玻片、镊子、剪刀、10mL小烧杯、显微镜、恒温水浴锅等§3、试剂§1〕M－缓冲液 ：§咪唑〔pH6.7〕50mM、MgCl 2 0.5mM、KCl 50mM、EGTA[乙二醇双〔α－氨基乙基〕醚四乙酸] 1mM、§巯基乙醇或DTT〔二硫苏糖醇〕1mM、EDTA 0.1mM§§;§2〕磷酸缓冲液〔PBS〕 §3〕1%Triton-X-100〔用M－缓冲液配制 〕§4〕0.2%考马斯亮蓝R250 ：§考马斯亮蓝R250 0.2g、甲醇 46.5mL、冰醋酸7.0mL、蒸馏水 46.5mL§5)植物细胞固定液：§5ml 38%甲醛、 5ml冰醋酸、90ml 70%酒精和5ml甘油;四、实验步骤§1、取材：内表皮约0.5cm2，放在盛有PBS缓冲液的小烧杯中，浸泡处置10min。

§2、抽提：吸去PBS缓冲液，取2ml 1%Triton-100入小烧杯中，置于37℃恒温水浴锅中保温30min§3、冲洗：吸去1%Triton-§X-100，用M缓冲液轻洗三次，§每次5min　;§4、固定：加植物固定液2ml固定30min§5、冲洗：弃去固定液后，用PBS缓冲液清洗三次，每次1-2min§6、染色：吸去PBS，滴1滴0.2考马斯亮蓝R250染液染色5min§7、制片：倒去染液，用蒸馏水清洗三次，将标本平铺在载玻片上，再盖上盖玻片§8、察看;五五 、、实验结果果§ 绘出洋葱出洋葱鳞叶内表皮叶内表皮细胞内胞内细胞胞质骨架骨架的分布的分布图 ; 六、六、讨论§1．对实验结果的分析2．实验中的本卷须知和关键步骤§七、实验报告与值日§ ;。