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淀粉微生物检验操作规程淀粉微生物检验操作规程1 大肠菌群测定大肠菌群测定1.1 设备和材料设备和材料冰箱：2℃~5℃； 恒温培养箱：36℃+1℃恒温水浴锅：46℃+1℃； 天平：感量 0.1g灭菌锥形瓶：500ml； 灭菌玻璃珠：直径约 5mm灭菌平皿：直径 90mm； 灭菌试管：16 mm×160 mm载玻片、盖玻片； 灭菌牛皮袋、塑料袋无菌吸管：1 ml（具 0.01 ml 刻度） 、10 ml（具 0.1 ml 刻度）灭菌金属勺、刀等1.2 培养基和试剂培养基和试剂1.2.1 月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤1.2.2 煌绿乳糖胆盐肉汤1.2.3 结晶紫中性红胆盐琼脂1.2.4 无菌生理盐水：称取 8.5g 氯化钠溶于 1000ml 蒸馏水中，121℃高压灭菌15min1.2.51mol/l 氢氧化钠：称取 40g 氢氧化钠溶于 1000ml 蒸馏水中1.2.61ml 盐酸：移取浓盐酸 90ml，用蒸馏水稀释至 1000ml三、检验程序三、检验程序10 倍系列稀释36℃+1℃48h+2h产 气不 产 气四、操作步骤：四、操作步骤：1、以无菌操作称取检样 25g（ml） ，放入含 225ml 灭菌生理盐水的具玻璃塞锥形瓶中，振摇 30min，即为 1：10 稀释液。

2、样品匀液的 PH 值应在 6.5~7.5 之间,必要时分别用 1 氢氧化钠或 1 盐酸调节3、用 1 无菌吸管吸取 1：10 样品匀液 1，沿管壁缓缓注入 9 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌试管中（注意吸管洒端不要触及稀释液面） ，振摇试管或换用 1 支 1产气48h+2h不产气大肠菌群阴性大肠菌群阳性查 MPN 表报 告 结 果BGLB 肉汤25g（或 25ml）样品+225ml 稀释液，均质选择适宜三个连续稀释度的样品匀液，接 种 LST 肉汤管36℃+1℃无菌吸管反复吹打，使其混匀均匀，制成 1：100 的样品液4、根据对样品污染状况的估计，从制备样品匀液至样品接种完毕，全过程不得超过 15 分钟5、复发酵试验：用接种环从所有 48h+2h 内发酵产气的 LST 肉汤管中分别取培养物 1 环，移种于煌绿乳糖胆盐（BGLB）肉汤管中，36℃+1℃培养 48h+2h，观察产气情况，产气者，计为大肠菌群阳性管6、大肠菌群最可能数（MPN）表（见附录 B） ，报告每克（或毫升）样品中大肠菌群的 MPN 值 大肠菌群最可能数（大肠菌群最可能数（MPN）的检索表）的检索表阳性管数阳性管数95%可信限可信限阳性管数阳性管数95%可信限可信限0.10.010.001MPN 下限下限上限上限0.10.010.001MPN 下限下限上限上限0 0 0 0 0 0 1 1 1 1 1 1 1 1 2 2 2 2 2 20 0 1 1 2 3 0 0 0 1 1 2 2 3 0 0 0 1 1 10 1 0 1 0 0 0 1 2 0 1 0 1 0 0 1 2 0 1 2110 04.5 8.7 8.7 8.7 8.7 4.6 8.7 17 9 17 37 40 18 37 40 90 42 90 180 42042 94 94 94 94 94 110 180 180 200 420 420 420 420 430 1000 1000 2000 4100 -------注注 1：：本表采用 3 个稀释度[0.1g(或 0.1ml)、0.01g（或 0.01ml）和 0.001g（或0.001ml）]，每个稀释度接种 3 管。

注注 2：：表内所列检样量如该用[1g(或 1ml)、0.1g（或 0.1ml）和 0.01g（或 0.01ml）]时，表内数字应降低 10 倍；如改用[0.01g(或 0.01ml)、0.001g（或 0.001ml）和0.0001g（或 0.0001ml）]时，则表内数字相应增高 10 倍，其余类推2 霉菌测定霉菌测定2.1 设备和材料冰箱：0℃~4℃； 恒温培养箱：25℃+28℃显微镜：10×~100×； 架盘药物天平：0g~500g，精确至 0.5g灭菌锥形瓶：500ml； 灭菌玻璃珠：直径约 5mm灭菌平皿：直径 90mm； 灭菌试管：16 mm×160 mm载玻片、盖玻片； 灭菌牛皮袋、塑料袋； 灭菌金属勺、刀灭菌吸管：1 ml（具 0.01 ml 刻度） 、10 ml（具 0.1 ml 刻度）等2.2 培养基和试剂孟加拉红培养基：按 GB/T4789.28-2003 中 4.80 规定灭菌生理盐水2.3 检验程序25g 样 + 225ml 0.85%盐 水做成几个适当倍数的稀释液选择三个适宜的稀释度，各取 1ml 加入灭菌平皿内淀 粉每皿加入适量培养基（孟加拉红培养基）菌落计数报 告 2.4 操作步骤：1、以无菌操作称取检样 25g（ml） ，放入含 225ml 灭菌生理盐水的具玻璃塞锥形瓶中，振摇 30min，即为 1：10 稀释液。

2、用灭菌吸管吸取 1：10 稀释液 10ml，注入灭菌试管中，另用 1ml 灭菌吸管反复吹吸 50 次，使霉菌孢子充分散开3、取 1ml1：10 稀释液注入含 9ml 灭菌生理盐水的试管中，另换一支 1ml 灭菌吸管吹吸五次，此液为 1：100 稀释液4、按上述操作顺序做 10 倍递增稀释液，每稀释一次，换用一支 1ml 灭菌吸管，根据对样品污染情况的估计，选择三个合适的稀释度，分别在做 10 倍稀释的同时，吸取 1ml 稀释于灭菌平皿中，每个稀释度做两个平皿，然后将晾至 45℃左右的培养基注入平皿中，并转动平皿使之与样液混匀，待琼脂凝固后，倒置于25℃~28℃温箱中，3 天后开始观察，共培养 5 天5、计算方法：通常选择菌落数在 10~150 之间的平皿进行计数，同稀释度的两个平皿的菌落平均数乘以稀释倍数，即为每克（或毫升）检样中所含霉菌和酵母数6、报告：每克（或毫升）淀粉所含霉菌和酵母菌数以 cfu∕g(ml)表示。