
HPLC法测定法在不同产地药材陈皮中橙皮苷含量测量中的运用.doc
7页HPLC法测定法在不同产地药材陈皮中橙皮苷含量测量中的运用摘要:目的:运用HPLC法测定法对不同产地药材 陈皮中橙皮苷含量进行测量方法:应用Discovery C18色 谱柱,使用的流动相为甲醇、冰醋酸、水,彼此之间的比例 为35: 5: 60,通过检测最适宜的波长为283nm,最适宜的 流速应该是1. Oml/min结果:橙皮苷处于21. 43-2143 U g/ml 之间时,拥有比较好的线性关系,平均回收率也非常高,迖 到了 98. 78%,结果表明,药材陈皮产地不同,橙皮苷含量也 有一定的区别结论:运用PLC法来对不同产地药材陈皮中 橙皮苷含量测量具有非常突出的优势,简单快捷,具有非常 好的准确性,而且重复性也非常好,值得推广应用关键词:HPLC法;陈皮;橙皮苷;运用我国多地都有种植陈皮,比如福建、广东等地陈皮是 一味中草药,主要功能有理气健脾、燥湿化痰等,主要用来 治疗食少吐泻、胸闷等疾病陈皮中最重要的成分就是橙皮 苷很多研究者应用紫外分光光度法对陈皮中的橙皮苷进行 检测,效果不佳,尤其表现在专属性差有报道称,运用HPLC 法测定陈皮中橙皮苷含量测量具有非常好的效果为此本文 采用HPLC法,对来自于6种不同产地的陈皮中的橙皮苷进 行测定。
1仪器与试药1.1仪器美国,Discovery, C18 色谱柱(4. 6mmX250mm,5 u m), 美国Water717,高效液相色谱仪器,紫外检测器为, SPD-lOAvp,美国梅特勒-托利多,AL204,分析天平(精确 度,O.OOOlg),郑州宏朗DZKW-D-6,型电热恒温水浴锅,济 宁万和,Model, C9860A,超声波清洗脱气机器,河北, DZF-6021,型真空干燥箱1.2试剂:甲醇溶液为色谱纯,冰醋酸为分析纯,水为 三蒸水1.3试药:橙皮苷对照组(购于中国药品生物制品检定 所,批号:130825-200921),6,批不同产地陈皮药材均购 于各地方的药材公司,经我当地药品检验所鉴定均为正品2方法与结果2. 1色谱条件应用Discovery C18色谱柱,将甲醇:冰醋酸:水=35: 5: 60,作为流动相,检测波长确定为283nm,流速确定为 1.0mL/min,色谱柱温度确定为25上(3,进样量确定为20ML2.2溶液制备2.2.1制备对照品溶液运用天平称取5mg橙皮苷,该 对照品必须要经过P205,再通过室温减压,而后再进行干燥 24h才可使用,将对照品放入到25 uL容量瓶中,而后添加甲醇溶液,待到指定刻度后,摇晃均匀,静置一段时间后, 即得到对照品溶液。
选择应用精密仪器称取对照品溶液,共 5pL,而后将流动相溶液放入到25 uL容量瓶中,摇晃均匀, 静置一段时间后,过0.22pm滤膜,而后将其放到冰箱中, 冰箱温度为-20C,储备起来以待日后应用2.2.2制备供试品溶液将来自于福建、广东、四川、 广西、浙江、湖南等六地的药材陈皮分别放入到粉碎机中, 待到粉碎结束后,再将其放入到电热恒温干燥箱中,箱中温 度要迗到55C,干燥时间为6h应用相关仪器精密称取各 个产地陈皮粉碎品各2g,而后加入160 pL石油醚溶液,使 用超声仪器超声45min,将所有的石油醚过滤出来待到药 渣挥干后,再加入到不同容量的甲醇溶液中,分别为60uL、 60uL、40 uL,再进行超声提取,共3次,每次45min完 成过滤后,研究者需要将过滤液合并,待到甲醇溶液达到指 定要求的200 UL时,摇晃均匀,应用微孔滤膜进行过滤, 最后得到了供试品溶液,将其放到冰箱中备用,冰箱温度调 到-20Co2.3系统适应性研究2.3. 1研究者需要根据制备供试品溶液的步骤进行制 备阴性对照液制备2.3.2系统适应性依据上述要求的色谱条件,研究将 上述三种溶液进行精确提取,每个溶液各20uL。
供试品中 橙皮苷与相邻杂质分离度〉1. 5,阴性对照溶液与橙皮苷对照 品相同保留时间处未见色谱峰,认为不干扰实验测定结果 理论塔板数按照橙皮苷峰计算不低于,30002.4线性关系考察按照对照品溶液,精密吸取对照品,溶,液,l.Oul、2. 0 y 1、4. 0 u 1、6. 0 1、8. 0 u 1、lO.Oul、12. 0 u K14. Oub 16. Oub 20. Oul,进样量为,20. Oul,不足, 20ul,体积均采用流动相溶液进行补充,分别注入高效液 相色谱仪器中,按照色谱条件进行测定,记录峰面积,以峰 面积作为纵坐标(Y),橙皮苷进样浓度作为横坐标(X),绘 制线性关系方程,得线性回归方程为: Y=1.8069X106X+l. 8056X104, (r, =0. 9996),,橙,皮, 苷,在21.43〜2143ug/ul,范围内呈良好的线性关系(这 个应该没办法加入到论文中解释,根据方程可以得到一条直 线,根据论文研究的需要进行橙皮苷浓度的选择,也可以选 择其他浓度范围,只要是满足线性关系方程即可)2.5精密度实验精密量取橙皮苷对照品溶液20u 1,连续进样,5次, 按照线性关系方程计算峰面积,RSD=O. 39%,表明仪器的精 密度良好。
2.6稳定性实验精密量取供试品溶液20 P 1,在色谱条件下,在,Oh、 lh、2h、4h、6h、8h、12h,内各进样,1,次测定峰面积, 峰面积,RSD二1.18%,表明供试品溶液在,12h,内稳定性较 好2.7重复性实验精密称取同一产地陈皮药材粗粉,5,份,按照供试品 溶液的配置方法制备供品溶液,按照色谱条件下进行含量测 定,橙皮苷的平均含量为4. 28%,RSD=2. 15%,表明测定方法 的重复性较好2.8加样回收率实验精密量取,l.Oul、l.Oul、1.5ul、1.5ul、2.0ul、 2.0p1,橙皮苷对照品溶液(含量约为,5. 237mg/ul),置 于,10ul,容量瓶中,取,6,份已知含量的供试品溶液加 入不同浓度容量瓶中溶解,采用甲醇溶液稀释至刻度,分别 取,20.0 Pl,注入高效液相色谱仪器中,按照色谱条件测 定橙皮苷峰面积,计算平均回收率为98. 7%3讨论3.1选择适宜的流动相研究过程中,研究者选择应用 了甲醇、冰醋酸、水,各自比例分别为45: 5: 50; 35: 5: 60,再选择一种甲醇、0.2%三氟乙酸溶液,比例为65: 35 研究者从这三种流动相中选择最适宜的一种作为本试验的 流动相。
其中甲醇:冰醋酸:水=45: 5: 50,甲醇:0.2%三 氟乙酸溶液等于65: 35,这两种流动相样品分离效果不佳,而甲醇:冰醋酸:水=35: 5: 60能够将样品中的橙皮苷进行 很好的分离,所以研究者选择此种流动相3.2很多文献报道都采用甲醇溶液作为提取溶剂来提 取橙皮苷,而橙皮苷在溶液中提取含量却非常低,为此,研 究者选择其他提取溶剂,即石油醚溶液实验表明此种提取 溶剂与甲醇溶液与相比,提取效果都要好,与此同时选择应 用超声仪器进行超声提取此次研究中选取了 6个产地的陈皮,通过HPLC法测定 发现,广东产地的陈皮中橙皮苷含量最高,达到了 5. 84%,为广西产地的橙皮苷含量最低,为3.92%各个产地的药物 陈皮橙皮苷含量都不相同,差异性明显研究发现,HPLC法 测量不同产地药材陈皮中的橙皮苷效果非常好,而且具有一 定的专属性,整体操作步骤也比较简单参考文献[1] 苏家辉,林炳国,吴声振,张春盛.高效液相色谱法 测定中药陈皮中橙皮苷的含量[J].中医临床研究,2014(12).[2] 周威,郁颖佳,谢美芬,李晓雯,李嫣,段更利.微 波辅助萃取-高效液相色谱法测定陈皮中橙皮苷含量[J].医 药导报,2011 (5).[3] 张成川,赵颖飞,戚杏珠.高效液相色谱法测定乐清 地产陈皮中橙皮苷的含量[J].海峡药学,2010 (11).[4] 孙冬梅,毕晓黎,胥爱丽,庄玉坚.高效液相色谱法测定不同产地陈皮中辛弗林的含量[J].今日药学,2009(8).。












