植物组织中叶绿素含量测定.doc

真诚为您提供优质参考资料，若有不当之处，请指正植物组织中叶绿素含量测定（无机及分析化学实验II-设计性实验）一、 实验目的1．设计用分光光度计测定植物组织中的叶绿素2. 学习利用文献资料设计研究方案3. 掌握分光光度计测定植物组织中的叶绿素的原理与方法二、 原理：叶绿素广泛存在于果蔬等绿色植物组织中，并在植物细胞中与蛋白质结合成叶绿体当植物细胞死亡后，叶绿素即游离出来，游离叶绿素很不稳定，对光、热较敏感；在酸性条件下，叶绿素生成绿褐色的脱镁叶绿素，在稀碱液中可水解成鲜绿色的叶绿酸盐以及叶绿醇和甲醇高等植物中叶绿素有两种，均易溶于乙醇、乙醚、酒精和氯仿叶绿素a 叶绿素b 叶绿素a、b在长波方面最大吸收峰分别位于663nm和645nm，且两吸收曲线相交于652nm处叶绿素a、b的比吸收系数K为已知，可在663nm和645nm测定试样吸光度（两组份混合试样测定，双波长法），根据Lambert－Beer定律，列出浓度c与吸光度A之间的关系式：A663＝82.04ca＋9.27cb …………………………………（1）A645＝16.75ca＋45.6cb…………………………………（2）（1）、（2）式中的A663、A645为叶绿素溶液在波长663nm和645nm时的吸光度度。

ca、cb为叶绿素a、b的浓度，单位为g/L82.04、9.27为叶绿素a、b在波长663nm时的比吸收系数16.75、45.6为叶绿素a、b在波长645nm时的比吸收系数解方程式（1）（2），则得经验公式：ca=12.7 A663-2.69 A645 …………………………………（3）cb=22.9 A645-4.68 A663…………………………………（4）cT=（ca + cb ）=20.2 A645+8.02 A663…… ……………（5） 此时，cT为总叶绿素浓度，ca、cb为叶绿素a、b的浓度，单位为mg/L ，利用上面（3）（4）（5）式，即可以计算a、b总叶绿素的浓度仪器：分光光度计、电子天平、棕色容量瓶（如使用白玻容量瓶，可用报纸遮光）、小漏斗、滤纸试剂：95%乙醇三、 实验步骤1、试材的采集采集新鲜植株叶片（或含叶绿素的其他组织），夹于双层报纸中，风干（不能置于太阳光下晒）将风干材料处理成细小颗粒，装入封口塑料袋，避光保存2、待测液的制备（1）叶绿素的浸提 精密称定风干后的样品（约0.1g）于20mL 95%乙醇中，在室温浸提36-48h2）叶绿素浸提液定容提取液过滤到50mL棕色容量瓶（如使用白玻容量瓶，可用报纸遮光），用95%乙醇定容至50mL，摇匀，置于暗处备用待测。

3、测量吸光度取1cm的比色皿，注入上述叶绿素酒精溶液，用95%乙醇为参比液，1cm的比色皿为吸收池，分别在663nm和645nm波长测吸光度，每一波长读三次数，取平均值带入公式计算如吸光度大于0.8，按倍数准确稀释（稀释倍数为n ），尽量使吸光度的测量值在0.2-0.8范围内4、结果计算 用测得的吸光度 A663、 A645，代入（3）式计算溶液中叶绿素a的含量；代入（4）式中计算得到叶绿素b的含量，代入（5）式计算得到叶绿素总含量 计算植株中叶绿素含量时，需要考虑稀释因子 数据记录及处理：表1波长A1A2A3A平均值663nmA663(平均值)=645nmA645(平均值)=表2cacbcTwT17周星期一、星期二（全天开放）采集新鲜树叶并把样品带到实验室来领塑料密封的试管，然后称量0.1g新鲜样品用研钵磨碎，并用少量酒精洗涤并转移到塑料密封试管，稀释到50mL的刻度，带回家避光保存，并于星期三，星期四（全天开放）带到实验室测定吸光度，并计算浓度含量，交实验报告批改后登记成绩。