灰树花抗肿瘤.docx

灰树花多糖的抗肿瘤作用和免疫调节作用摘要：灰树花是一种大型真菌，从灰树花提取的物质特备是多糖类具有很强的增 强免疫的功能本文简要介绍了灰树花多糖的特点，重点介绍了最近研究灰树花 多糖或者灰树花提取物的抗肿瘤活性的各种方法及其结论关键词：灰树花；多糖；提取；肿瘤；免疫概述灰树花(Grifola frondosa)是担子菌亚门，隔担子菌亚纲，非褶菌目，多孔菌属中 的一种大型真菌，又名贝叶多孔菌、栗子蘑、佛菌以及重菇等，日本称之为舞蘑， 主要分布在亚热带至温带森林中，外观灰白色，其子实体中富含氨基酸、多糖以 及微量元素等在内的多种营养成份日本学者通过对灰树花发酵液成份的研究发 现：其中的灰树花多糖是主要的生物活性成份［1］大量的药理药效的研究证明， 灰树花多糖具有显著的抗肿瘤、降血糖、抗肝炎、抗HIV病毒以及改善疫系统 功能等功效⑵，因此，目前已被开发成多种保健品，其中包括我国的保力生胶囊 和维吉尔胶囊、日本MAIEXT以及美国的Grifron系列产品灰树花多糖是一种生长在亚热带至温带的食药兼用真菌，在我国主要分布于 河北、吉林、广西、四川和福建等地其性味甘平有益气健脾补虚扶正的功效 近年来，灰树花的保健功能及药用价值已受到人们的重视已证明灰树花多糖是灰 树花中主要的活性成分。

一、灰树花多糖的理化性质及构效关系子实体纯化后的灰树花多糖是一种生物大分子，不同原料来源以及通过不同 的提取工艺得到的多糖分子量有较大的差异，汪维云等［3］的研究表明胞内多糖的 分子量大于胞外多糖，有活性的灰树花多糖的相对分子质量一般大于45000，而 小于10000的灰树花多糖则没有生物活性，okazaki等［4］证明灰树花多糖诱导 TNF- a的作用与多糖的子量及分支度有关，高分子量低分支度的多糖可以诱 TNF-a表达上调灰树花多糖的主要单糖组成为D-葡萄糖，此外，还可能含有 少量D-木糖、D-甘露糖、D-岩藻糖、L-阿拉伯糖、龙胆二糖、半乳糖等具有 生物活性的灰树花多糖的基本结构为带有B -(1^6)侧链的B -(1—3)- D-葡聚糖， 分支度约为33%灰树花多糖的药理活性与组分中基本结构的含量有关，Suzuki等［5］认为灰树 花多糖的特殊结构可能有利于宿主免疫系统的识别，通过旷淀粉酶将粗多糖中旷 a-(1—4)-聚糖部分去除后其药理活性没有发生明显改变；ohno等［6］将3(1—3)- 葡聚糖、3-(1—6)-葡聚糖和a-(1—4)分别注射到植入S180肿瘤的老鼠体内，发 现3 -(1—3)聚糖具有抗肿瘤活性，而3 -(1—6)-葡聚糖和a -(1—4)葡聚糖则无抗 肿瘤作用；但是3-(1—6)-葡聚糖可以增强3-(1—3)-葡聚糖的抗肿瘤活性，而a -(1—4)一葡聚糖则对3 - (1—3)-葡聚糖的药理作用起反向调节作用；灰树花许 多生物学活性均与其分支数目的多少有关，Adachi等［7］发现灰树花多糖的分支结 构是宿主补体系统识别的位点，可能为灰树花多糖免疫活性的结构基础，另外有 报道［8］认为一定范围内的高分子量灰树花多糖也是激发宿主多重免疫反应所必 需的，以上研究结果证明灰树花多糖的基本结构对于其药理活性具有重要的意 义。

灰树花多糖的空间结构对其药理活性则没有太大的影响，而其他如茯苓多糖、 香菇多糖等真菌多糖在经脲、胍等变性剂处理后，生物活性将随着空间构像的改 变而发生变化［9］灰树花多糖的两种空间结果(天然型和螺旋型)则均具有较高的 生物活性二、灰树花多糖的抗肿瘤作用早在1986年，ohno等［10］就发现从液体培养的灰树花菌LE）具有抑瘤作用， 在丝体中提取的灰树花多糖具有抑瘤作用，再植入S180实体肿瘤后9天内对小 鼠进行腹腔给药，给药剂量为100〜200pg/鼠，每天5次，抑瘤率超过99%, 通过静脉给药或直接将灰树花多糖注射到肿瘤部位同样有效，而口服灰树花多糖 则没有明显的抑瘤效果；研究同时发现，灰树花多糖对S180腹水型肿瘤没有明 显的抑瘤效果，体外用灰树花多糖预处理S180也没有明显的效果；类似的抗肿 瘤效应在对MethA纤维肉瘤以及MM46肿瘤的研究中也得以证实，不同的是对 这些肿瘤的抑制作用与给药的剂量、给药途径以及给药时间有关Nono［11 ］等证 明通过腹腔给药后，灰树花多糖须经2天以上的时间才能发挥药效，在这两天时 间里，腹膜渗透细胞（PEC）增加，其内IL-1以及酸性磷酸酶表达上调。

Kodama 等［12］对22〜57岁瘤患者服用灰树花多糖后的疗效进行了调查，发现有58.3%肝 癌患者、68.8%乳腺癌患者以及62.5%肺癌患者在使用灰树花多糖后症状明显减 轻，但只有10%〜20%的胃癌患者、白血病患者以及脑瘤患者的症状减轻，此 结果暗示了灰树花多糖对不同肿瘤的活性不同Borchers等［5］认为这是因为各种 类型的肿瘤对多糖的细胞反应不同，而表达出不同的细胞因子，产生不同生物效 应Adachi等［13］的研究表明灰树花多糖抗肿瘤的作用机制可能与促进巨噬细胞 分泌细胞因子（如：IL-6、IL-1以及TNF-a等）有关这些细胞因子的产生与内毒素 的形成有内在的联系，因此认为灰树花多糖是一类新的巨噬细胞激活剂；Ohno［14］ 等发现100〜200mg/小鼠的灰树花多糖可以明显提高脂多糖（LPS）诱导的血清 TNF-a水平，还可以加膜结合的TNF-a水平，该研究还表明灰树花促进TNF- a表达与多糖的分子量和分支度有关；［15］Ishibashi等通过究证明灰树花多糖在体 外可以刺激巨噬细胞产生TNF，该项研究同时表明多糖中的水不溶性大分子多 糖是刺激巨噬细胞产生TNF的主要成分，但是Beijer等的研究显示吸入灰树花 多糖后将会降低PBMC中TNF-任水平。

武汉华中农业大学食品科技系的李小定、吴谋成、荣建华等［16止匕较了灰树 花多糖粗品PGF与纯品PGF-1的抗肿瘤作用及对荷瘤小鼠免疫功能的影响采 用的方法是用S180移植瘤模型观察与的抗肿瘤效果并进行免疫学指标测定结 果灰树花多糖粗品与纯品与有抑制肿瘤生长的作用并能显著增强荷瘤小鼠脾指 数、巨噬细胞吞噬功能、二硝基氟苯（DNFB）所致的迟发型超敏反应（DTH）、 淋巴细胞转化能力、脾细胞抗体生成能力和血清IgM溶血素的含量的粗品抑瘤 效果优于纯品，结论是灰树花多糖粗品与纯品具有抑瘤和免疫调节作用［16］具 体方法是取接种4d的种鼠腹水癌细胞，用生理盐水制成细胞数为1 X 106个/mL胞 悬液,以每鼠0.2mL接种于小鼠右腋皮下,24h后随机分组2每组8只，同时开始 每日灌胃给药0.2mL,对照组用等量生理盐水灌胃2连续9d,第10d眼眶取血后 处死小鼠，摘取瘤块、胸腺、脾，从眼眶取血后处死小鼠摘取瘤块胸腺、脾， 分别计算肿瘤抑制率、胸腺指数（mg胸腺重/g体重），脾指数（mg脾重/g体 重）巨噬细胞吞噬试验：按腹腔巨噬细胞吞噬CRBC的方法测定迟发型超敏 反应（DTH）:用药第5d,小鼠腹部去毛用二硝基氟苯（DNFB）丙酮麻油溶液在 去毛处均匀涂抹致敏（每鼠25pL），24h后同法加强致敏一次。

致敏第4 d用10pL 溶液均匀涂抹右耳进行攻击，对照组同样涂耳但未致敏，第2d处死小鼠剪下 左右双耳用打孔器在双耳相应部位各打一直径8mm的耳片，称重，以小鼠左右 耳片重量之差为肿胀度T淋巴细胞转化试验：MTT法脾细胞抗体生成的测定: 小鼠灌胃5d后，腹腔注射0.2 mL 20%的绵羊红细胞（SRBC）,第10d取脾脏，常规 制备脾细胞悬液，以pH 7.0的磷酸缓冲液配成细胞浓度为5X109个/L，试管中依 次加入脾细胞悬液，0.4%SRBC和1:10的豚鼠血清各1m L,37°C水浴1h后离心， 取上清液413nm处比色血清IgG、IgM溶血素HC含量的测定：取小鼠血清 10pL,分 2管，按文献操作，540nm处比色，分别计算IgG和IgM溶血素HC含 量上述实验表明灰树花多糖粗品与纯品均有抑制s180肉瘤生长的作用，同时能 提高荷瘤小鼠免疫器官的重量恢复荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞的活性显著增强荷瘤 小鼠淋巴细胞增殖能力且能促进ConA诱导的荷瘤小鼠淋巴细胞增殖反应和脾 抗体形成能力，明显增强(DTH)显著提高荷瘤小鼠血清溶血素含量PGF 对S180肉瘤的抑制作用略优于PGF-1,这是由于PGF中可能存在比PGF-1更具抑 瘤活性的多糖，且各种活性多糖也可能具有协同作用，作为广谱性的免疫调节促 进剂真菌多糖具有多种生物活性，其中一些已作为癌症的辅助治疗剂，或抗病毒 药应用于临床并成为寻找新药的重要资源，灰树花多糖表现出较强的抗肿瘤作 用及免疫增强活性。

茎盟、闽三弟、减珍娣等［17］ (1997)研究了灰树花多糖的抗肿瘤作用及对 巨噬细胞、自然杀伤细胞的影响试验采用水提取灰树花子实体得粗多糖，探索 该多糖的抗肿瘤作用及对巨噬细胞、自然杀伤细胞的影响，以环磷酰胺和云芝多 糖为阳性对照经小鼠体内二个肿瘤模型，各二种接种方法，口服多糖进行抗肿 瘤试验初步结果表明，灰树花多糖对小鼠Lewis肺癌和Colon癌的足趾接种型 及腋皮下接种型均显示显著的抑瘤效果足趾接种，对Lewis肺癌的抑制率为 67.83%〜72.44 %，对Colon癌的抑制率为50.68 %〜56.03 % ；腋皮下接种， 对Lewis肺癌的抑制率为 45.36 %〜46.71 %，而对 Colon癌的抑制率为 37.31%〜40.47%在同一种接种情况下，二次重复的抑瘤率差异不大，与空 白对照相比达到极显著水平(p<0.01)两种接种方法结果差异较大，其主要原因 是足趾接种的癌细胞量只是腋皮下接种量的四分之一免疫试验结果表明.灰树 花多糖能明显增加腹腔巨噬细胞的吞噬百分数和吞噬指数，对荷Lewis肺癌小鼠 的NK细胞活性有明显的激活作用多糖的不同组份和结构、不同接种量对不同 的瘤谱和免疫细胞影响很大.需进一步研究。

据日本学者N. Ohno、K-Kato等［18］报道，灰树花多糖的抑瘤活性主要与一 种葡聚糖有关.此葡聚糖以3-1，6-葡聚糖为主链.每相隔三个单糖分子在第六 位碳上有1，3-糖苷键连接的侧链而且碱性提取的灰树花多糖抗肿瘤活性较强， 推测灰树花多糖的构象可能同抗肿瘤活性有一定关系，另据I-Suzuki等［19］报 道，从液体培养的灰树花菌丝体中分离到一种多糖LELFD.通过小鼠腹腔注射发 现能增加腹腔巨噬细胞的裂解酶(酸性磷酸酶)活性.推测可能通过激活选择性补 体途径而增强巨噬细胞吞噬功能从灰树花子实体中提取的多糖的作用途径与 LELFD有许多相似之处项哨等［2］研究发现灰树花多糖口服给药对于流行性感冒毒(PR8 / 34株)和I 型单纯疱疹病毒(分别代表RNA病和DNA病毒)感染的小鼠有较好的保护作用， 且促进病毒诱生干扰素，因此推测其机制是通过增强小鼠机体免疫而发挥作用； 而对于使机体免疫功能丧失从而促使并发卡他性肺炎和卡波奇恶性肿瘤的HIV 病毒，灰树花多糖具有抑制HIV病毒以及改善AIDS病相应症状的能力据日 本药学会第113次年会［21 ］报道，将灰树花中的硫酸葡聚糖加入受HIV病毒感染 的辅助T淋巴细胞的试管中，可观察到HIV病毒的活性受到明显的抑制。

Ohno等［22］还研究了无抗肿瘤活性的多糖对灰树花多糖抗肿瘤活性的影响， 发现3-1，6-葡聚糖(Islandicin)可提高其活性，而a -1，4-葡聚糖(Starch)可降 低其活性Nanba等的研究结果表明灰树花多糖是所有研究过的真菌多糖中抗肿 瘤活性最强的，经与其它真菌多糖的对比实验发现，灰树花多糖对肿瘤的抑制率 为86.3%，而相同剂量下香菇多糖、双孢蘑菇多糖、金针菇多糖、糙皮侧耳多 糖的抑制率分别为77.0%、71.3%、61.7%和62.7%用20%灰树花粉末的饲 料喂养MM46(胸腺癌)肿瘤小鼠一个月，肿瘤被完全抑制的小鼠占40%，另外 的60%与对照组相比肿瘤抑制率。