2芸香苷的提取、精制、水解和鉴定.doc

实验名称实验二 芸香苜的提取、精制、水解和鉴定实验班级08药本1、2班实验课吋间2010.5.11> 14、18、21课时数10分组12实验目的：1. 学握碱-酸法提取黄酮类化合物的原理及操作2. 掌握黄酮苜的水解方法3. 掌握黄酮甘的鉴定方法实验原理：1. 芸香甘分子中具有酚疑基，显弱酸性，在碱水中成盐增大溶解能力，用碱水 为溶剂煮沸提取，提取液加酸酸化后乂成为游离的芸香甘而析出并利用芸香甘 对冷水和热水的溶解度相差悬殊的特性进行精制2. 黄酮甘可通过酸水解得到甘元和糖，并可通过薄层色谱法进行检识0HOW0HO-GIc-RhaOHORutinose注：芸香甘(芦丁，rutin)： C27H:i0016 - 3H20,淡黄色针状结晶，mpl74C〜178C, 无水物为188C〜190C溶解度：冷水中1 : 8000,热水中1 : 200,冷乙 醇中1 : 300,热乙醇中1 : 30,冷毗喘中1 : 12,微溶于丙酮、乙酸乙酯， 不溶于苯、氯仿、石油醸等溶剂桝皮素(quercetin)： C^HwO； • 2H20,黄色结品，mp313C〜314C,无水物为 316Co溶解度：冷乙醇中1 : 20,沸乙醇中1 : 23,可溶于甲醇、乙酸乙酯、 毗陀、丙酮等溶剂，不溶于水、乙瞇、苯、氯仿、石油瞇。

实验试药与器材：试约：槐花米、0.4%硼砂水溶液、石灰乳、蒸憾水、浓盐酸、2%硫酸、乙醇、1% 氢氧化钠溶液、1%盐酸溶液、10% 酚溶液、浓硫酸、镁粉、1%醋酸 镁卬醇溶液、正丁醇、醋酸器材：电炉、漏斗、紫外分析仪、锥形瓶、量筒、烧杯、层析筒、试管实验内容与方法：一、 芸香甘的提取取槐花米20g （研碎），置于1000ml圆底烧瓶中，加0.4%硼砂水溶液200ml, 在搅拌下加右灰乳调PH8,加热微沸30分钟，静置几分钟倾出上清液，用棉花 过滤,药渣同上重复一次合并滤液用6N盐酸调PH2〜3,放置冰箱中析晶（一 夜以上），待全部结晶析岀，抽滤，得粗芸香甘（滤饼用水洗3〜4次），放置空气 中自然干燥得粗品，称重、计算捉取率二、 芸香甘的精制取2g加蒸馄水400ml,加热煮沸溶解，趁热抽滤，滤液放置过夜，析品， 抽滤，得精制芸香试三、 芸香苜的水解取精制芸香貳lg,置250ml圆底烧瓶中,加2%H2SO4溶液80ml,加热冋流 30分钟至1小时，开始加热10分钟为澄清液，逐渐析岀黄色小针状结晶，即为 楣皮素放冷抽滤得结品，滤液保留作为糖的检查，沉淀物用蒸傭水洗至中性， 抽干水份，晾干称重，得粗制懈皮素。

必要时可用稀乙醇重结晶四、 芸香琶的检识反应1. 成盐反应 取芸香试10mg左右，置试管中加蒸憾水2ml,振摇，观察试 管有无变化，滴加1%氢氧化钠溶液数滴，振摇使芸香试全部溶解成为黄色澄 明溶液，然后再滴加1%盐酸溶液数滴至成酸性反应，溶液则由澄明转为混浊状 态（若当时不岀现混浊时可放置片刻或放置冰箱中冷冻一定时间后再观察）2. 呈色反应取芸香苴•和桝皮素约10mg,各用5ml乙醇溶解，制成样品溶液，按下列方法 进行试验，比较甘元和甘的反应情况1） Molish反应 取样品溶液lml,加10% a -蔡酚乙醇溶液1ml,振摇后斜 置试管，沿管壁滴加0.5ml浓硫酸，静置，观察并记录液面交界处颜色变化2） 盐酸镁粉反应 芸香试与懈皮素溶液分别置于试管中，加入金属镁粉少许，浓盐酸2〜3滴，观察并记录颜色变化3） 醋酸镁纸片反应 取两张滤纸条，分別滴两滴芸香背、榊皮素的乙醇溶液，然后各加1%醋酸镁甲醇溶液两滴，于紫外灯下观察荧光变化，记录现彖五、芸香甘及蒯皮素的纸层析鉴定层析材料：层析滤纸点 样:（1）提取的芸香昔乙醇溶液（2）提取的蒯皮素乙醇溶液展开剂：正丁醇：醋酸：水（4： 1 ：5）上层溶液显色：（1）先在可见光下观察斑点颜色，然后在紫外灯下观察斑点颜色（2）喷洒1%三氯化铝乙醇试剂后再观察斑点的变化实验注意事项：1. 提取过程中，加入硼砂的目的是为了保护芸香甘分了中邻二酚轻基，以减少 其氧化，并使其不与钙离子结合（钙盐络合物不溶于水），使芸香甘不受损失， 提高产率。

2. 实验中应严格控制碱提取、酸沉淀的PH值加入石灰乳即可以达到碱性溶解 捉取的目的，述可以除去槐花米中的多糖类、粘液质等，但碱性不宜过高（PH 不超过10）,因为在强碱性条件下煮沸，时间稍长就可促使芸香甘水解破坏，降 低产率；酸化时PH不可过低，否则会使芸香甘形成样盐而降低产率3. 水解时应随时加水，避免蒸干思考题：1. 苜类水解冇几种催化方法？2. 甘类水解的难易程度受到哪些因素的影响？。