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09重金属检查法检验操作规程GMP质量管理（9）文件编号：ZL/S0P/TZ/00901重金属检杳法检验操作规程文件名：重金属检査法检验操作规程文件编土制定人：日期： 年 月曰文件类于审核人：日期： 年 月曰版次:5批准人：日期： 年 月 日印 1生效日期：年 月 日颁发部i分发至：质量保证部、化验室1. 目的：规范重金属测定检验操作，保证检验的质量2. 适用范I韦I：适于木公司原辅料、成品的重金属测定检验3. 责任者：质量保证部经理、化验室主任、化验员4. 检验依据：《中国兽药典》2010年版一部附录5. 内容：5. 1原理《中国兽药典》（2010年版）小对于药物所含的重金属的定义是指在实验条件下，能与 硫代乙酰胺或硫化钠作用显色的金属杂质所谓“在实验条件下”是因供试品液的酸度对 金属离子与硫化氢的昱色有显著的影响《中国兽药典》（2010年版）规定25ml供试液中含醋酸盐缓冲液2ml,再加硫代乙酰 胺试液2nd,其pH值应为3. 5；在此弱酸性条件下能与硫代乙酰胺呈色的金属离子有银、 铅、汞、铜、镉、钮、呻、餅、锡、锌、钻、银等均能生成不溶性硫化物；在碱性溶液 中，如钮、镉、铜、钻、铁、汞、铅、锌等金属离子均能生成不溶性硫化物。

由于在药品 牛产中遇到铅的机会较多，而且铅易积蓄中毒，故检查以铅为代表，反应式如下：Pb2++S2 — 黑色5.2仪器与用具5.2.1纳氏比色管应注意选择各管Z间的平行性，玻璃色泽一致，内径、刻度第1页 共7页GMP质量管理（9）文件编号：ZL/S0P/TZ/00901标线高度一致比色管洗涤时避免划 伤内壁5.2.2过滤器见《中国兽药典》2000年版一部附录重金属检杳法第四法附图，而且有 纹丝扣并能密封的上、下二部分以及垫圈、滤膜和辅助滤板组成5. 2. 2.1过滤器上盖部分A的入口处应能与50ml注射器紧密联接，过滤器下部F的出 口处能套上一合适橡皮管A与F能通过螺纹密封5. 2. 2. 2垫圈应内径光滑，大小相同，以使斑点边缘圆整、淸楚、大小一致在滤器上 加上橡皮垫圈，既nJ使滤膜与滤板紧密结合，又口J避免在旋紧滤器接头时扭曲或损坏滤5. 2. 2. 3滤膜的直径为10mm,孔径为3.0um,使用前在水中浸泡24小时以上，可使色 斑均匀5. 2. 2. 4 50ml注射器，应能与滤器上盖入口处紧密联接5. 3试药和试液5. 3. 1标准铅溶液 称取硝酸铅0. 160g,置1000ml量瓶中,加硝酸5ml与水50ml溶解 后，用水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。

临用前，精密量取贮备液10ml,置100ml量瓶 中，加水稀释至刻度，摇匀，即得（每51相当于10ug的Pb） o配制和贮存用的玻璃容 器均不得含铅5. 3.2硫代乙酰胺试液、硫化钠试液、酷酸盐缓冲（pII3.5）与抗坏血酸等均按药典规 定5.3.3稀焦糖溶液取蔗糖或葡萄糖约5g,置磁堆圳中，在玻璃棒不断搅拌下，加热至 呈棕色糊状，放冷，用水溶解成约25ml,滤过，贮于滴瓶中备用临用时，根据供试液色 泽深浅，取适当量调节使用5. 4操作方法5. 4. 1第一法5. 4. 1. 1取25ml纳氏比色管两支，编号为甲、乙5. 4. 1. 2甲管中加标准铅溶液一定量与醋酸盐缓冲液（pII3・5） 2ml,加水或该药品正文 项下规定的溶剂稀释成25ml o5. 4.1.3乙管中加入按药品项下规定的方法制成的供试液25ml o5. 4. 1.4如供试液带颜色，可在甲管中滴加少量稀焦糖溶液或其它无干扰的冇色笫2 页共7页GMP质量管理（9）文件编号：ZL/S0P/TZ/00901溶液,使其色泽与乙管一致5. 4.1.5在甲、乙两管中分别加硫代乙酰胺试液2ml,摇匀，放置2分钟，同置门色衬 板上，口上向下透视，乙管中显出的颜色与甲管比较，不得更深。

5. 4.1.6如在甲管中滴加稀焦糖溶液仍不能使颜色一致时，可取该药品项下规左的2倍 量的供试品和试液，加水或该约品项下规定的溶剂稀释成30ml；将溶液分成甲乙二等份， 甲管中加入硫代乙酰胺试液2ml,摇匀，放置2分钟，经滤膜（孔径3 m）滤过，然后甲 管中加入标准铅溶液一定量，加水或该药品项下规定的溶剂使成25ml,再在乙管中加硫代 乙酰胺试液2ml,甲管中加水2ml,照上述方法检查，即得；5. 4.1.7供试品如含铁盐影响重金属检查时，可取该药品项下方法制成的供试液，加抗 坏血酸0.5〜l.Og,并在对照液中加入相同量的抗坏血酸，再照上方法检查，即得；5. 4. 1. 8配制供试品溶液时，如使用的盐酸超过1. 0ml （或与盐酸1. 0ml相当的稀盐 酸），氨试液超过2nd,或加入其他试剂进行处理者，除另令规定外，对照液中应取同样 同量的试剂置瓷皿中蒸十后，加酷酸盐缓冲液（pII3.5） 2ml与水15nd溶解后，移置甲管 中，加标准铅溶液一定量，再加水稀释成25ml o5. 4.2第二法5. 4. 2. 1除另有规定外 取在500〜600C灼烧的炽灼残渣项下遗留的残渣，加硝酸 0.5ml蒸干,至氧化氮蒸气除尽后,放冷，加盐酸加1,置水浴上蒸干后加水15ml,滴加 氨试液至对酚瞅指示液显中性，再加醋酸盐缓冲液（pH3.5） 2ml,微热溶解后，移至乙管 中，加水稀释成25ml o5. 4. 2. 2如不取炽灼残渣项下遗留的残渣，则可取供试品一定量，缓缓炽灼至完全炭 化，放冷，加硫酸0.5〜1.0ml,使恰湿润，用低温加热至硫酸除尽后，加硝酸0. 5ml,蒸 干，使恰湿润，用低温加热至硫酸除尽，加硝酸0. 5ml,蒸干，至氧化氮蒸气除尽后，放 冷,在500〜600C炽灼使完全灰化,再按（4. 2. 1） “,,放冷，加盐酸加1,,,,”起，至加水 稀释成25ml o5. 4. 2. 3取配制供试溶液的试剂，置瓷血中蒸干后，加酷酸盐缓冲液（pII3.5） 2ml与水 15ml微热溶解后，移至甲管中，加标准铅溶液一•定量，加水稀释成25ml。

5. 4. 2. 4按（4.1.5）方法检查第3页共7页GMP质量管理（9）文件编号：ZL/S0P/TZ/009015. 4. 3第三法5. 4. 3. 1取25ml纳氏比色管两支,编号为甲、乙5. 4. 3. 2除另有规定外，取供试品适量，加氢氧化钠试液5nd与水20ml溶解后，置乙 比色管中5. 4. 3. 3取一•定量的标准铅溶液，与（4.3.2）同样处理，置甲管中5. 4. 3. 4于甲、乙两管中各加硫化钠试液5滴，摇匀5. 4. 3. 5甲、乙管同置白色衬板上，自上向下透视，乙管中所显的颜色与甲管比较，不 得更深5.4.4第四法5. 4. 4. 1标准铅斑的制备精密量取标准铅溶液一定量，置小烧杯中，加水或该药品项 下的溶剂稀释成10ml,加入醋酸盐缓冲液（pH3.5） 2迅与硫代乙酰胺试液1.0ml,摇匀， 放置10分钟用50ml注射器转移至过滤器中进行压滤（滤速约为每分钟51）,滤毕，取 下滤膜，放在滤纸上干燥，即得5. 4. 4. 2检查法 照该药品项下规定制成的供试液10ml,照例（4.4.1）标准铅斑的制 备，自“加入酷酸盐缓冲液（pH3・5） 2ml”起，依法操作，将生成的色斑与标准铅斑比 较，不得史深。

5. 4. 4. 3若供试溶液有颜色或浑浊，应对换辅助滤板与滤脱的位置，进行预滤，如滤般 有污染，应换滤膜再滤，直至滤膜不再染色；反转辅助滤膜的位置，然后取滤液10ml,照 4.4.1）标准铅斑制备,“加入醋酸盐缓冲液（P1I3.5） 2nd”起，依法操作，所得供试液 的铅斑-与标准铅斑比较，不得更深5. 5注意事项5.5.1在弱酸条件下测定时，应严格控制溶液的酸碱度，因为pH值3. 03.5,硫化物沉 淀比较完全，酸度太大或太小都使颜色显色浅，从而结呆不正确5.5.2本法以10吒〜20 H gPb / 35ml所产生的浑浊度为最佳H视比色范围5. 5. 3在酸性溶液中检查巫金属，以硫代乙酰胺试液作为显色剂，如用硫化钠试液，容 易分解析出硫，引起浑浊而影响比色在碱性溶液中，则用硫化钠试剂作为显色剂5. 5.4检查新产品重金属时，除有标准管和供试管外，宜应配有一个监测管（加第4 页共7页GMP质量管理（9）文件编号：ZL/S0P/TZ/00901适量的标准溶液及供试品）三管依 法同样操作，供试管显色不得深于标准管，则可能供试品经有机破坏后再依法检查5. 5.5标准铅溶液取量问题应注意重金属的含量以Pb计算为20ug （即相当于标准铅溶 液2nd ）时，加硫代乙酰胺试液后所显的黄褐色最适用于冃视法观察，如小于10ug,则 显色太浅，于30ug时则显色太深，均不利于观察与区别，故于检查时，如取样量标准液 均未指明时，则常以加1计算和试验。

5.6供试品在未加硫乙酰胺以前带色，可用稀焦糖液，将标准溶液调整，使两考颜色一 致，而后加硫代乙酰胺；若滴加稀焦糖溶液，仍不能使颜色一致时，可加其他対测定无干 扰的试液，如加常用的指示液调色如按上述方法仍不能使供试品管与标准管颜色一致时，可取该药品上规定的二倍量的供 试品试液，加水溶解后，分成两等份，在一份小加硫代乙酰胺试液，用滤膜（孔径3 m） 滤除金属硫化物沉淀后，加入规定量的标准铅溶液作为对照溶液，再与另一份供试溶液按 药典规定方法处理比较或者将供试品作有机破坏，除去颜色，再作重金属检杳5.7微量高铁离了的存在，能在弱酸溶液中氧化硫化氢溶液而析出硫，产生浑浊而影响 巫金属的比色，因此必须除去；药典中利用加入抗坏血酸或盐酸轻胺使微量高铁还原成亚 铁离子，因亚铁不T•扰检查5.8若药物木身是重金属的盐（如铁盐、础盐、怫盐、锌盐、铜盐等），在检查这些药 物中其他垂金属的含量时，必须先将药物加以处理以除去口身离子的干扰，然后再进行测 定5.9约品木身生成不溶性硫化物，影响重金属的检查，对加入掩蔽剂以避免干扰如检 查硫酸锌或葡萄糖酸钏钠中的重金属，在碱性溶液中加入獄化钾或在中性溶液中加入酒石 酸，使与锌离子或僦离子生成稳定的络合物，再依次检查铅盐。

5.10含有Pb2+的中性或弱酸性溶液，经滤纸过滤时，因滤纸能吸附Pb2+而造成Pb2+的 大量损失，故一般不应过滤必要时可加对酚猷呈微碱性的饱和醋酸钱溶液，温热后用直 径较小的定量滤纸滤过5.11具有芳坏或杂环的有机药物，如需先行炽灼破坏，则按《药典》（2010年版 二部附录操作，使与有机物分了结介的重金属游离，但应注意炽灼的温度不能高第5页 共7页GMP质量管理（9）文件编号：ZL/S0P/TZ/00901于600C,以免重金属损失，温度适 宜5.12为了消除盐酸或其他试剂可能夹杂重金属，故在配制供试品溶液时，如使用盐酸 屆过lml （或与盐酸1ml和当的稀盐酸）使用氨试液超过2nd,以及用硫酸与硝酸进行冇 机破坏，或加入其他试剂进行处理者，除另有规定外，对照溶液应取同样量试药在堆堀或 瓷血中蒸于后，依法检查5.13为使有机物分解破坏完全，炽灼残渣需加硝酸加热处理，故必须蒸干除去氧化 氮，否则，亚硝酸可氧化硫化氮析出硫，影响比色检查蒸干后残渣加盐酸处理，使重金 属盐成为盐酸盐，置水浴上蒸干，去除残留盐酸，再加蒸馆水溶解，以氨试液调至对酚豔 指示液显中性，依法检查，使供试品液的pH值仍为3. 5左右，某些供试品（如安乃近、 对氨基水杨酸等）在炽灼时能腐蚀瓷堆堀而带入较多的重金属，影响检查结果的准确性， 应改用石英垃甥或硬质玻璃蒸发皿、钳琳甥。

5. 14标准铅液应在临用前，精密量取铅贮备液新鲜配制，使用不得超过一周，以防止 铅的水解而造成误差，否则贮。