浅谈高效液相色谱法测定淫黄胶囊中淫羊藿苷的含量.doc

浅谈高效液相色谱法测定淫黄胶囊中淫羊藿苷的含量【摘要】 目的 建立淫黄胶囊中淫羊藿苷的含量测定方法方法 采用高效液相色谱法色谱柱为 Zorbax SB-C18 (250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相为乙腈-水(25︰75,V/V),流速1.0 mL/min;检测波长270 nm结果 淫羊藿苷的进样量与其峰面积积分值在0.099 84～0.599 04 μg 范围内有良好的线性关系(r=0.999 8),平均加样回收率为97.77%,RSD=1.77%(n=6)结论 本法简便可行,准确可靠,可用于淫黄胶囊中淫羊藿苷的含量测定关键词】 淫羊藿苷;淫黄胶囊;高效液相色谱法Abstract：Objective To establish an HPLC method for determination of the content of icariin in Yinhuang Capsules. Methods The HPLC assay was performed on a Zorbax SB-C18 column (250 mm×4.6 mm, 5 μm) with the mobile phase of acetonitrile-aquous (25︰75, V/V) at a flow rate of 1.0 mL/min, and the detective wavelength was 270 nm. Results A good linearity of icariin was obtained in the range of 0.099 84～0.599 04 μg (r=0.999 8). The average recovery was 97.77% and RSD was 1.77% (n=6). Conclusion The method is simple, feasible, accurate and reliable. It can be applied to the determination of icariin in Yinhuang Capsules.Key words：icariin;Yinhuang Capsules;HPLC淫黄胶囊是由淫羊藿、黄芪组成的中药复方制剂,具有补气健肾之功,主要用于治疗肾病综合征。

该制剂中主要药味淫羊藿主要含有黄酮类、多糖,其中黄酮类成分淫羊藿苷为淫羊藿的主要特征性有效成分为了有效控制该制剂的质量,本实验建立了以高效液相色谱法测定制剂中淫羊藿苷含量的方法1 仪器与试药Agilent 1100高效液相色谱系统(自动脱气机、VWD 检测器,美国产)淫羊藿苷对照品(中国药品生物制品检定所提供,批号0737-200111,供含量测定用);淫黄胶囊(本院中药药剂实验室研制,批号20050509、20050523、20050606)乙腈为色谱纯(美国Tedia 公司);水为注射用水;其余试剂均为分析纯2 方法与结果2.1 色谱条件色谱柱：Zorbax SB-C18 (250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相：乙腈-水(25︰75,V/V);流速：1.0 mL/min;检测波长：270 nm理论塔板数按淫羊藿苷计算不低于2 5002.2 检测波长的确定取淫羊藿苷对照品适量,用50%乙醇溶解、稀释成浓度约为1 mg/mL 的溶液,以50%乙醇为空白,在400～200 nm 波长范围内扫描,结果淫羊藿苷在270 nm 波长处有最大吸收2.3 标准曲线的制备精密称取淫羊藿苷对照品10.40 mg,置50 mL 量瓶中,加50%乙醇溶解并稀释至刻度,摇匀,得浓度为208.0 μg/mL 的对照品储备液。

分别从中精密吸取0.6、1.2、1.8、2.4、3.0、3.6 mL置于25 mL 量瓶中,加50%乙醇稀释至刻度,摇匀,得系列浓度的对照品溶液分别精密吸取各浓度对照品溶液20 μL,注入液相色谱仪,按上述色谱条件测定峰面积以淫羊藿苷进样量为横坐标,以峰面积积分值为纵坐标,进行线性回归,得回归方程为：Y=-5.953+2 107.944X,r=0.999 8结果表明,淫羊藿苷进样量在0.099 84～0.599 04 μg 范围内与其峰面积积分值有良好的线性关系2.4 供试品溶液的制备取淫黄胶囊10粒内容物,研细,取细粉约0.2 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入50%乙醇20 mL,称定重量,超声处理(功率200 W,频率59 kHz)45 min,放置,冷至室温,称定重量,用50%乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过,精密量取续滤液4 mL 置水浴上蒸干,加水10 mL 溶解,以乙酸乙酯萃取3次,每次10 mL,合并乙酸乙酯萃取液,减压回收溶剂至干,残渣加50%乙醇溶解并定容至25 mL 量瓶中,摇匀,即得供试品溶液2.5 阴性干扰试验按处方制法制备缺淫羊藿的阴性对照样品,按供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液。

分别吸取淫羊藿苷对照品溶液(14.976 μg/mL)、供试品溶液、阴性对照溶液各20 μL,注入液相色谱仪,按上述色谱条件测定,记录色谱图(见图1)结果表明,在淫羊藿苷色谱峰位置处阴性无干扰2.6 精密度试验精密吸取淫羊藿苷对照品溶液(14.976 μg/mL)20 μL,注入液相色谱仪,重复进样5次结果峰面积积分值 RSD=1.03%,表明精密度良好2.7 稳定性试验取同一份供试品溶液(批号20050509),分别于0、2、4、6、8 h 时进样20 μL,按上述色谱条件测定,峰面积积分值RSD=1.39%结果表明,供试品溶液中淫羊藿苷至少在8 h 内稳定性良好2.8 重复性试验取同一批淫黄胶囊(批号20050509)5份,分别按“2.4”项下方法制备供试品溶液,进样20 μL,按上述色谱条件测定,计算淫羊藿苷含量,结果 RSD=2.92%2.9 加样回收率试验取已测定含量的淫黄胶囊(批号20050509)内容物,研细,称取6份,各约0.1 g,精密称定,分别精密加入淫羊藿苷对照品储备液(208.0 μg/mL)5 mL,按“2.4”项下方法制备供试品溶液,依法测定,计算回收率结果见表1。

表1 加样回收率试验结果(略)2.10 样品测定取淫黄胶囊样品3批,按“2.4”项下方法制备供试品溶液,进样20 μL,按上述色谱条件测定,采用外标法计算淫羊藿苷含量,结果见表2结合《中华人民共和国药典》标准规定淫羊藿药材中淫羊藿苷含量不低于0.5%[1],暂定本品每1 g 含淫羊藿苷不低于8 mg表2 淫羊藿苷含量测定结果(略)3 讨论在供试品溶液制备中,曾分别比较了不同提取方式(回流法提取、超声法提取)及其不同提取时间(15、30、45、60 min)对淫黄胶囊样品中淫羊藿苷的提取效率,结果两种方式提取的效果基本一致文中所选用的超声法提取操作简便,超声45 min 可将样品所含的淫羊藿苷提取完全因该超声提取法同时提取出较多杂质,本试验根据淫羊藿苷的溶解性质[2],再将提取液以乙酸乙酯提取、纯化,结果能使供试品溶液中杂质大大减少,在保证被测成分提取完全的同时,减少了样品对色谱柱的污染对于流动相,将《中华人民共和国药典》[1]中淫羊藿药材含量测定项中的流动相调整为乙腈-水(25︰75,V/V),即可得到满意的色谱分离效果本试验所建立的供试品溶液制备方法简便、易行,含量测定方法准确、可靠,可用作淫黄胶囊中淫羊藿苷的含量测定方法。

参考文献】[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京：化学工业出版社,2000.268.[2] 杨 云,冯卫生.中药化学成分提取分离手册[M].北京.中国中医药出版社,1998.329.。