实验一X染色质标本制备与观察ppt课件.ppt

实验一实验一    X染色质标本制备与观察染色质标本制备与观察 ¨[目的要求目的要求]¨（（1〕掌握〕掌握X染色染色质标质标本制本制备备方法及其原理方法及其原理¨（（2〕掌握〕掌握X染色染色质质的形的形态态特征及其特征及其临临床意床意义义[实验实验原理原理]¨一个个体不论其细胞中有几条一个个体不论其细胞中有几条X X染色体，均只染色体，均只有一条具有转录活性，其余的有一条具有转录活性，其余的X X染色体均失活染色体均失活形成异固缩的形成异固缩的X X染色质正常女性间期细胞核染色质正常女性间期细胞核中中X X染色质阳性率一般约为染色质阳性率一般约为1010％一％一3030％，有的％，有的可高达可高达5050％以上其出现率的高低与个体不同％以上其出现率的高低与个体不同生理状态、染色方法、染色技术以及生理状态、染色方法、染色技术以及X X染色体染色体在细胞核中的位置不同有关在男性间期细胞在细胞核中的位置不同有关在男性间期细胞核中则平均低于核中则平均低于1 1％一般检查％一般检查X X染色质确定性染色质确定性别时，观察别时，观察200200个细胞，个细胞，X X染色质出现染色质出现5 5％以上％以上者为女性。

如今，者为女性如今，X X染色质检查已广泛应用于染色质检查已广泛应用于临床，作为性别测定和性染色体数目异常的一临床，作为性别测定和性染色体数目异常的一种辅助诊断方法种辅助诊断方法[实验实验用品用品]¨(1)器材：器材：显微微镜、、载玻片、牙玻片、牙签¨ ¨ (2)试剂 ：：Giemsa染液、染液、0.2％甲苯胺％甲苯胺蓝染液染液 、、5mol/L  HCl溶液溶液 、、95％乙醇、％乙醇、pH 6.8 PBS ¨ (3)资料：人口腔黏膜上皮料：人口腔黏膜上皮细胞 [方法与步方法与步骤骤]¨（一） Giemsa染色法¨(1)取材制片：先让受检者用水漱口数次，然后用牙签钝头部刮取口腔下唇内侧面，弃去第一次刮到的细胞，在同一部位连刮几次，将刮取物均匀涂在干净的载玻片上晾干¨(2)固定：将带有标本的载玻片置入装有新配置的甲醇-冰醋酸固定液〔3：1〕的染色缸中固定10min后取出，空气干燥¨(3)水解：玻片标本置于5mol/L HCl中，室温水解20 min用新鲜蒸馏水冲洗四次，充分洗去残留的HCl¨(4)染色：置Giemsa染液中染色10min ，蒸馏水冲洗后晾干，酒精灯上过火脱水，以二甲苯透明(1-2min)，树胶封片。

（二〕甲苯胺蓝染色法 ¨(1)取材制片：先让受检者用水漱口数次，然后用牙签钝头部刮取口腔下唇内侧面，弃去第一次刮到的细胞，在同一部位连刮几次，将刮取物均匀涂在干净的载玻片上晾干¨(2)固定：用95%乙醇固定30分钟¨(3)水解：玻片标本置于5mol/L HCl中，室温水解20 min用新鲜蒸馏水冲洗四次，充分洗去残留的HCl¨(4)染色：0.2％甲苯胺蓝染液染色5—10min¨(5)镜检：自来水漂洗，空气干燥后油镜下观察 [观察与结果观察与结果] ¨高倍镜下可见许多染成蓝色的细胞核，高倍镜下可见许多染成蓝色的细胞核，细胞质不着色或不明显选择核较大，细胞质不着色或不明显选择核较大，染色清晰，轮廓完整，核质呈均匀细网染色清晰，轮廓完整，核质呈均匀细网状的细胞进行观察找到核膜内侧缘有状的细胞进行观察找到核膜内侧缘有蓝色浓染小体的细胞核后，换油镜进一蓝色浓染小体的细胞核后，换油镜进一步观察油镜下步观察油镜下X X染色质为蓝色平凸形、染色质为蓝色平凸形、三角形、扁平形的浓染小体三角形、扁平形的浓染小体 [本卷须知本卷须知]¨(1)取材前要漱口，以免口腔中的取材前要漱口，以免口腔中的杂质杂质影影响响观观察效果。

察效果¨  (2)HCl水解要充分，使水解要充分，使X染色染色质质易于易于显显现现¨  (3)临临床床检查时检查时要要选择选择形形态态好的好的细细胞胞观观察，察，计计算算100个个细细胞中胞中X染色染色质质出出现现的的频频率 [作作业业]¨书写实验报告，绘制书写实验报告，绘制X X染色质图染色质图 [思考题思考题] ¨1．．间间期核内出期核内出现现X染色染色质质有何生理意有何生理意义义?¨ 2．．X染色染色质检测质检测有何有何临临床用途床用途? 。