马铃薯茎段愈伤组织诱导及再生.doc

学士学位毕业设计（论文）马铃薯茎段愈伤组织诱导及再生学生姓名：郭永丰指导教师：姜丽丽所在学院：农学院专 业：农 学学 号：20094011302中国·大庆2013 年 5 黑龙江八一农垦大学毕业设计（论文） 马铃薯茎段愈伤组织诱导及再生 学生：郭永丰 指导老师：姜丽丽 摘要：马铃薯茎段愈伤组织的诱导和再生试验于2012在农学院马铃薯实验室进行以克新13号、早大白两个品种的马铃薯茎段为材料，研究愈伤组织的诱导及植株再生试验试剂：MS培养基为基本培养基，可调节的植物激素有6-BA和2,4-D选择苗龄合适的马铃薯无菌试管苗，切成0.5厘米长，不带腋芽茎段，接种于含不同浓度细胞分裂素6-BA和生长素2,4-D的愈伤组织诱导培养基，进行诱导培养愈伤组织每2周继代1次选择生长良好的愈伤组织，接种苗在含有不同浓度6-BA，NAA和GA的培养基中进行茎段愈伤组织分化培养结果表明：克新13号的最佳愈伤组织诱导培养基为MS+2mg/L 6-BA +2 mg/L 2,4-D；早大白的最佳愈伤组织诱导培养基为MS+1 mg/L 6-BA+2mg/L 2,4-D。

在上述最佳诱导培养基中培养，俩种愈伤组织诱导率分别为62.22%和60.37%，在上述最佳分化培养基中培养，所得的分化率分别为53.81%和57.42%，早大白的分化率高于克新13号的分化率关键词：马铃薯；愈伤诱导；再生33 Potato Stem Section Callus Induction and Regeneration Student :Guo Yongfeng Supervising: Jiang lili Abstract: Potato stem section callus induction and regeneration of this test in 2012 in agronomy courtyard potato laboratory. To g new 13, the early two potato stem section as materials, all kinds of callus induction and regeneration. Test using reagents: MS medium as the basic medium, the movement of the adjustable plant hormones have 6 - BA, 2, 4-d. Select age of seedling and d potato sterile tube seedlings, cut into 0.5 cm long, don't take lateral bud stem section, vaccination to contain different concentration cytokinins 6 - BA and auxin 2, 4-d of callus induction medium, induction training. Callus every 2 weeks successive transfer 1 time. Select growth good callus, vaccination to contain different degrees of cytokinins 6 - BA and NAA and callus induction of GA3 in medium culture. The results showed that: g new number 13 optimum callus induction medium for MS + 1 mg/L 6 - BA + 2 mg/L 2, 4-d; The early for MS + 2 mg/L 6 - BA + 2 mg/L 2, 4-d. With the above optimum induction medium culture, all kinds of callus induction rate were 62.22% and 60.37% respectively g new, with the optimum induction medium culture, all kinds of differentiation rate were53.81% and 57.42% respectively.Key words: Potato; Callus induction; regeneration目 录摘要 IABSTRACT II前 言 IV1 材料与方法 11.1 材料 11.2 试验设计 11.2.1 基础苗培养 11.2.2 培养基配制 11.2.2.1 MS培养基 11.2.2.2 茎段愈伤组织诱导培养基 11.2.2.3 茎段愈伤组织分化培养基 21.2.3茎段愈伤组织诱导 21.2.4 愈伤组织分化 22 结果与分析 32.1 不同激素配比对马铃薯愈伤组织诱导率的影响 32.2 不同激素配比对愈伤组织分化率的影响 42.3 不同基因型对茎段外植体再生的影响 53 讨论 64 结论 6参考文献 7致 谢 9前 言现代科学指出，植物的生长发育，器官的建成，形状的表现都受激素所调控并且马铃薯品种繁多[4]，MS培养基不能满足所有试管苗生长的需要，而要保证马铃薯组培苗的外植体成活率，需要有尽可能多的须根和腋芽数以吸收养分和进行光合作用[5]，因此选择合适的生长调节剂及其浓度以尽可能多的生成须根和腋芽，就成为保证组培苗的外植体成活率和栽植产量的关键[6]。

近年来,随着组织培养技术在马铃薯育种中的广泛应用，组培技术也日趋成熟成功的组织培养首先依赖于良好的植物受体系统的建立，受体系统的建立则主要依赖于植物组织培养再生环节[7-8]因此，建立优化的马铃薯组织培养再生系统,是遗传转化技术在马铃薯育种中应用的关键而马铃薯不同基因型之间诱导再生的条件存在较大的差异[9],因此需要对特定品种,特定材料进行再生系统的筛选，以确定有针对性的最佳培养基本试验以黑龙江省2个马铃薯主栽品种克新13号、早大白为试材，在组培实验室里模拟了外界自然生态环境，选择苗龄合适的马铃薯无菌试管苗，切成0.5厘米长，不带腋芽茎段，依次接种于含不同浓度的诱导培养基和分化培养基中进行诱导培养以及再生的试验，对马铃薯的最佳再生系统进行了筛选,同时对该环节中起主导作用的植物激素配比进行了研究，优化出了最佳激素配方, 以及优化了马铃薯主栽品种的离体培养再生技术体系，为马铃薯主栽品种的分子改良奠定基础 21 材料与方法1.1 材料供试材料为克新13号、早大白脱毒试管苗苗，以单芽茎段方式继代培养，由黑龙江八一农垦大学马铃薯研究室提供1.2 试验设计1.2.1 基础苗培养选取所需品种带有4-5个茎节的脱毒试管苗，在无菌条件下切成单节茎段，转接到盛有50ml经过高压灭菌的固体MS培养基的玻璃方瓶中进行培养。

培养温度为20～25℃，每天光照16h，光照强度2000Lx待试管苗长至单株约4～5个茎节时，在同样条件下进行扩繁，为试验提供足够的、来源一致的基础苗1.2.2 培养基配制1.2.2.1 MS培养基在MS母液中添加0.7%的琼脂和30g/L的蔗糖,pH值5.8配制好的培养基装入250ml 培养瓶内,瓶底直径80mm，每瓶50ml 封口,放入高压灭菌锅内常规灭菌,冷却后在培养室中预培养3-4d，无染菌现象的培养基留下备用1.2.2.2 茎段愈伤组织诱导培养基在MS培养基基础上添加不同浓度的6-BA和2,4-D，6-BA和2,4-D浓度配比见表1-1表1-1 茎段愈伤组织诱导培养基添加激素浓度配比培养基编号6-BA浓度（mg/L）2,4-D浓度（mg/L）10.5121132140.5251262270.538139231.2.2.3 茎段愈伤组织分化培养基在MS培养基基础上添加不同浓度的6-BA和NAA见表1-2表1-2 6-BA和NAA浓度配比培养基编号6-BA浓度（mg/L）NAA浓度（mg/L）10.5120.523114121.2.3 茎段愈伤组织诱导 在超净工作台上，取不带腋芽长0.5 cm左右的试管苗茎段接种于不同处理的培养基上，每个处理30个茎段，每个处理3次重复，置于自然光照培养室培养。

培养2周后统计愈伤组织诱导率，筛选出最优激素组合1.2.4 愈伤组织分化 待愈伤组织形成后分别转接到不同处理的分化培养基上诱导芽分化，统计芽分化率 分化率（%）=分化芽数/总外植体数×1002 结果与分析2.1 不同激素配比对马铃薯愈伤组织诱导率的影响试验结果显示，接种愈伤组织后4-5d，茎段两端切口处便明显膨大，7 d后可见到有愈伤组织出现，其后愈伤组织沿维管束向茎段中间生长，15 d左右愈伤组织即可长满茎段表面由表2-1和表2-2可知，试验所使用的9个激素组合均能诱导克新13号和早大白茎段产生愈伤组织，但诱导率差别很大，克新13号最高可达82.11%，最低仅28.89%；早大白愈伤组织诱导率最高77.17%，最低仅26.88克新13号在MS+2mg/L 6-BA+2mg/L 2，4-D处理中愈伤组织量最多，诱导率最高，且愈伤组织颜色为绿色，结构致密，表面呈颗粒状，而在其他配比的培养基上所形成的愈伤组织过于疏松，颜色较淡，长势较差，易生根或生长缓慢，数量较少，并有逐渐白化现象早大白在MS+ 1mg/L6-BA+ 2 mg/L2，4-D处理中愈伤组织量最多，诱导率最高，外植体所形成的愈伤组织才呈哑铃形，愈伤组织颜色为绿色，质地致密，中部和两端膨大均匀；而在其它培养基中形成愈伤时，多数出现整体或中部膨大变粗，两端褐化，有的有生根现象。

表2-1 6-BA和2,4-D组合对克新13号茎段愈伤组织诱导的影响编号6-BA（mg/L）2,4-D（mg/L）接种数愈伤数诱导率（%）愈伤状态10.51903134.44 鲜绿色，愈伤较大，结构疏松211893943.82 黄绿色愈伤，愈伤较大，疏松321932931.18 黄白色，愈伤较大，疏松40.52905257.78 黄白色愈伤，结构致密致密512876473.56 绿色愈伤大，表面有些颗粒状622957882.11 绿色愈伤较小，表面有颗粒状70.53875057.47 绿色愈伤小，致密813904550.00 黄绿色愈伤较大，较疏。