玉足海参酸性粘多糖的抗凝血作用_张佩文.pdf

C九玄儿eseJour托 a艺ofP瓦armaeolog夕a九dTox宝oe乙09,1 9 8 8May;2(2)玉足海参酸性粘多糖的抗凝血作用张佩 文骆苏芳钟春宁王强基兴(第一军医大学药理 教研室,广州5 101 32 )提要家兔v i或体外实验 均证明玉足海参酸性粘多搪(H L一P)抗凝血作用显著,效应强度与浓度成正相关HL一P在休外明显延 长T T,K PTT,P T的最低浓度为2 8,12,210林g/m l,延长K p TT的效价与肝素相 同兔耳静脉i、Hr一P0.65或Z mg/k g后1 0mn i,T T,K PT T明显延长抗凝效应可为硫酸鱼精蛋白所纠正关铺词玉足海参,酸 性粘多糖,抗凝血作用,凝血酶 时间,白陶土部分凝血活酶时 间,凝血活酶时间李,气玉 足海参(月020比环r￡a乙eue osp订ota)有毒,无食用价值,广东省药研所将其 开发为药用取干燥体壁经碱法消化,钾盐及季按 盐分级,由离心后的清液中获含岩藻糖(L一fu co se)的酸性粘多糖(aeidmueopo一ys aeeha-r id e,HL一P ),经 电 泳,凝胶过滤 及超离心分析鉴定均证明为 单一成份,纯度99.5%。

并初步报告有抑制 肿瘤及延 长牛凝血酶时 间等活性,`〕李春燕 等 曾对 小鼠 单次v i观察lwkLDS22 2mg/kg,95%可信限207一23 6mg/kg(待发表资料)本文对HL一P抗 兔血 凝作用 及其 量效关系做进一步观察,与 肝素对照 并进行纠正实验物化学制药厂产,l% 硫酸鱼精蛋 白注射浓,上海生物化学制药 厂产,批号84 11 11 2;注射用尿激酶1 00 00 U/瓶,上海生物化学制 药 厂产,批号8 40 3 16凝血实验试 剂 系华山医院检验科产品,按说明冻干凝 血酶2 5U/瓶加蒸馏水sml溶解,每次测试 需o.Zml冻 干凝血 活酶,每瓶 加1 0mMCaCI:2ml,在3 7C o水浴温热1 0mn i溶解,每次测 试需0.2ml;白陶土部分凝血活酶冻干品,每瓶加15ml蒸馏水成 悬液,每次测 试需0.1ml心脏取血,与3.8% 拘椽酸钠 溶液以9 :1混合,3 0 0 0P rm离心 1 0mn i取上层血浆测凝血活性杂 种 舍家兔,体重1.9土 0.5 kg,本校动物室供 应才材料玉足海参酸性粘多糖(HL一P)由广东省药 物研究所提供,生理盐水(N) s溶解供 v i,蒸馏水配制成不同浓 度的药液;肝素注射液5 0mg/ml(1mg=12 5U),苏州食品公 司生1987年5月25日收稿1 95 7年s月21日修回.广东省药物研究所方法凝血实验应用BSF一1型血 液纤 维仪(上海医用分析仪 器厂产)测定凝血 酶时 间(T T),白陶土部分凝 血 活酶 时 间(KP TT),凝 血活酶时间(PT)。

按常规〔“ 〕将酶试剂加入待测血浆 中(测T T用0.2ml血 浆,测KP-TT,PT各用0.1ml血浆),血凝时可从同步数字显示器读 出凝血 时间每一结果为两次测定 的 均值,最长观察时 间3005,超过3 0 05者记为30 0+s,仍以3005进行统计体内实验分三组,用 药组于兔耳静脉内注入HL一P0.6 5或Zmg/kg,对 照 组v i等量NS 0.5ml /kg,纠正组于v iHL一P后立即v i硫 酸鱼 精 蛋 白2.6mg/kg,给药 后间隔10,4 0,240min抽血检测T T,KpTT和中国药理学与毒理学杂志198 8年5月;2(2)99PTo体外实验将HL一P按10:8递 减的剂量配好系 列浓度,实验用 药液容积均为4 0林1,与血浆作用 3 05后进行TT,KPTT,P T测定以蒸馏水 4 0时 为对照,与各浓度HL一P的 凝血时间做显著性检验按以上数据 制作量效 曲线,再与肝 素 的 量效 曲线对比,求出HL一P的效价纠正实验事先用1% 硫酸鱼精蛋白40协l(终浓度8 3 3协g/ml)与血浆作 用2 0mn i,再 加入 足以使TT显著延 长 的HL一P(终浓度21 0协g/ml ),以肝素4 0协l(终浓度8.3 3协g/ml)为阳性对照。

结体内抗凝血作用果家兔v i或Zmg/kg后不同 时 间 测 定TTPT结果见表1HL一PO65KP T T,犷从表1可见0.6 5mg/kg组iv1 0min后T T,KPTT显著延长,4 0mn i后作用消失,剂 量 增大 为Zmg/kg时,ivl o,4 omin后T T,KP T T均显著延长,至2 4 0min时恢复以上剂量对PT无影响硫 酸鱼精蛋白纠正HL一PO.“mg/kgv i的结果 见表2Tab].Innue ne eofHL一Po nTT,K PT TandPTofrab b itPla smaTesttimeafterGrouP 冬iv(min)TT(s)KPT T(s)P T(s)NSHL一P(0.6 5mg/kg)H L一P(2mg/kg)10402401040104 024 02 8士828士102 5士246士1 3.26士4300士0二2 70土70二3 1士72 9士73 2士534士752士1 0二41土1095士32二92士2 7二34士89.8土16士2.11 0510.7士1.013.4士631 09士0.91159.6士10反土sD,n=4一5,.P<0.05,”P<0.01,eompar edw1thN S(e6ntr ol).Tab2.Cor re etionofHL一Pantie o agulatio nbyProtamin esula ftel ’nvivo,卜Dr ug(mg/k g)TesttimeT T(s)KP T T(s)H- l一PO。

65Beforeiv1 9士510minafterivHL一P0.65+ProtamineBeforeiv46士13#.21士5sul fateZ610minafteriv2 6士326士1252士10…33士836士9夭士sD,n=4,.P<0.05,二P<0.0 1,eomPar edwithbefor eivdrug(s),.P(0.0 5,c omParedwithHL一pgr ouPwhichhadbeentreatedWithProtamines u至fate,100Ch玄neseJour九a不ofP瓦ar爪aeologya托dTox玄oe7ogy9188May,2(2)从表2可见,未加用 硫酸鱼精蛋 白组HL一P有延长TT,KPTT的作用,加用硫酸鱼精蛋白组二者均 不延长提示HL一P延长T T,K P T T的作用为硫酸鱼精蛋 白所纠正体外抗凝血作用T T,K P T T,P T延长与HL一P浓度的关系 见 图1与蒸馏水组对比,显著延长TT的最低浓度为2 8件g/ml,延长T T长达3005以上的浓度为170林g/ml在1 4与1 7件g/ml剂量范围内二者 相关显著,r=0.987 4,b=260。

显著 延 长KPTT的最低浓度为12协g/ml,延长KP T T超过3 005的浓度为64 0卜g/ml在12~640协g/ml范围内二者相关显 著,札关系数r=0.9409,b二1 23显著延长PT的最 低浓度为2 2 0卜g/ml,当浓度增加超过47 8mg/ml时,虽然测 试皿内可见纤维蛋 白形成,但因数量少以致不能停止旋磁片的转动,记时数字显示不终止,故此剂员、范围的结果未绘于 图上当药物浓度增大至28.5mg/ml,再无纤维蛋白可见,观察3 005以上仍不凝血肝素与HL一P量效曲线 的比较见 图2实验所用肝素 最低终浓度7件g/ml,最高41 0件g/ml,显著延 长K PT T的最低浓度为1 2协 g/ml,与HL一P用 量 相同,延长3 0 05以上的 浓度为4 10协g/ml,较HL一P的 用量略小,提示HL一P低效应部分 的效价与肝素相似,高效应部分效价略低于肝素在1 2一10 8卜 g/ml范围内与KP T T延 长 相关非常显著,r=0.973 4,b=5.8 8冲矛(sàuoù 妇门助uoloJQ -Conto r】 01`L 一“.一.-.一一-`-一`-一-` 一一-一123Dos e(109产g/ml)佘加。

咬u ù倒门灿uolo,d“.,??钾 Colll一0101 1全一代`一令一十一士一去·123’ —HL一 Pdo se(109产g/ml)Fig1.Re!ationshiPbetwe endoseofHL一Pandpro long at ionofTT,K P T TandPT.天士SD,n=3一4,.P(0.0 5,二P

说明体外法HL一P延 长T T的作用亦可为 硫 酸鱼精蛋白所纠正中国药理学与毒理学杂志1988年5月;2(2)011讨论本文中HL一P明显延长家兔TT,K P TT,P T的结果进一步证明 了它有较强的抗 凝活性,当用于抗肿瘤等治疗时应予注意由于 它的抗凝效应与剂量明显相关,加之抗凝效应可为硫酸鱼精蛋白所纠正,可认 为该 药有 一定安全性其抗凝活性强,小量 即可有效,故具有作为新抗 凝剂用 于血管外科及治疗血栓性疾病 的药 理 基础如以凝血时 间 长达3005为1 00%效应,则肝素 延 长KP T T的pD:值为1.1 8,HL一P的pD:为0.67,其 效能 与 肝素相 似,效价与肝素等同或略低文中v iHL一P0.6 5与Zmg/kg后K PTT延长,PT均未延长,体外法延长P T所需HL一P的浓 度 较用 于延 长K PT T的量要大得多,可以认为HL一P对内源凝血 系统的影响远远大于对外源性凝 血系统的影响2 J [,本品药源充足,是一个值得开发的药物参考文献樊绘曾、陈菊娣、吕培宏等.玉足海参酸性多糖的研究药学 学报1 98 3,18:20 3张经国.凝血作用的促进和抑制实验法。

见`徐叔云、卞如滚、陈修主编.药理实验方法 学:第1版,北京,人民卫生出版社,195 2:554~5 56参Antieoagulativeef fe ctofHOlothUriaIeu co sPilotaacidmucoPolys accha rideZHANGPei一we n,LUOSu一a fng,ZHON GCh un一ning,WANGQiang一i(DP etP ham ra c口e lg y,几犷`t五J il i tay rGuangzho u5 10132)A BST R ACTT heantie o agulativ ea cti-vityofHL一Pinrab bitwa sobs e r v edI ’nvit roal ldinvivo.Itwa sdemonstratedthatthea ntic oag ulativeee f fetofHL一Pwa sPromin ent.Thea ctiv ePote n cywasPo sitivelye orr elatedtodruge o ne。