中国药典与美英药典微生物限度比较.ppt

中国药典与美英药典微生物限中国药典与美英药典微生物限度检查法的比较度检查法的比较 苏德模苏德模1.收载的检查项目收载的检查项目  CPCPBPBPUSPUSP需气菌需气菌+ ++ ++ +真菌真菌+ ++ ++ +大肠埃希菌大肠埃希菌+ ++ ++ +沙门菌沙门菌+ ++ ++ +铜绿色假单胞菌铜绿色假单胞菌+ ++ ++ +金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌+ ++ ++ +梭菌梭菌+ ++ +  大肠菌群大肠菌群+ ++ ++ +肠杆菌科及其他某些革兰阴性杆菌肠杆菌科及其他某些革兰阴性杆菌  + +肠道菌、肠杆菌肠道菌、肠杆菌科科支原体支原体  + +  分枝杆菌分枝杆菌  + +  病毒的其他因子病毒的其他因子  + +  活螨活螨+ +    2.检验量检验量  CP  取取10g或或10ml供试品供试品          BP、、USP  10g或或10ml供试品数份供试品数份  CPBPUSP一般制剂一般制剂0.9%的的 氯氯 化化钠钠 溶溶 液液 pH7.0无无菌菌氯氯化化钠钠-蛋白胨缓冲液蛋白胨缓冲液乳糖肉汤乳糖肉汤pH7.0氯氯化化钠钠-蛋蛋白胨缓冲液白胨缓冲液其他合适培养基其他合适培养基pH7.2磷磷酸酸盐盐缓缓冲冲液液, 大大豆豆酪酪蛋蛋白白消消化化培培养养基基, 乳乳糖糖液液体培养基体培养基非非 水水 溶溶 性性的的 制制 剂剂（（ 膏膏 剂剂 、、油剂）油剂）司司盘盘80、、单单硬硬脂酸甘油酯、脂酸甘油酯、吐温吐温-80十十四四烷烷酸酸异异丙丙酯酯5克克吐吐温温-20或或吐吐温温-80十四烷酸异丙酯十四烷酸异丙酯吐温吐温-20其他助溶剂其他助溶剂其他其他不不溶溶于于水水的的膜膜剂剂肠溶胶囊制备肠溶胶囊制备供供试试液液最最终终pH调调至至7.0气雾剂制备法气雾剂制备法样样品品加加稀稀释释剂剂至至培培养养基基时时间间不不超超过过1hr3.供试液制备供试液制备  4.制剂抑菌作用的确定（阳性对照试验）制剂抑菌作用的确定（阳性对照试验）      * 0.4%l卵磷脂，卵磷脂，4.0%吐温吐温  CPBPUSP控控制制菌菌阳阳性性菌加量菌加量10~102个个102个个105~106个个需需气气菌菌及及真真菌计数菌计数50~100回收率大小于回收率大小于70%判断是否判断是否有抑菌作用有抑菌作用25~200个个金金葡葡、、白白念念、、枯枯草草、、大大肠肠菌菌在在有有无无制制剂剂存存在在下下生生长长的的稀稀释释级级差差别别大大小判断是否有抑菌作用小判断是否有抑菌作用根据控制菌阳根据控制菌阳性菌生长的结性菌生长的结果判断果判断 抑抑菌菌作作用用处处理方法理方法   中和法中和法+++*稀释法稀释法+++薄膜过滤法薄膜过滤法+++离心沉淀法离心沉淀法+  5.需气菌和真菌计数需气菌和真菌计数 CPBPUSP 方法方法    平皿法平皿法           ++（浇碟、涂（浇碟、涂抹）抹）+ 试管法试管法 +          +薄膜过滤法薄膜过滤法          ++ 培养基培养基营养琼脂营养琼脂大大豆豆酪酪蛋蛋白白消化琼脂消化琼脂大大豆豆酪酪蛋蛋白白消化琼脂消化琼脂   玫瑰红钠琼脂玫瑰红钠琼脂含含抗抗生生素素的的沙沙氏葡萄糖琼脂氏葡萄糖琼脂沙沙氏氏葡葡萄萄糖糖琼脂琼脂5.需气菌和真菌计数需气菌和真菌计数(续续)稀稀释释级级的的选选择择3个连续稀释级个连续稀释级1个个2个个培养温度培养温度30~35℃23~28℃30~35℃20~25℃30~35℃20~25℃培培养养时时间间（天）（天）   需气菌需气菌2(5~7)52~3真菌真菌3(5~7)55~7计数结果计数结果   需气菌需气菌真菌真菌一般一般30~30030~100不不生生长长按按〈〈10个个/1g或或ml报告报告 〈〈300〈〈10030~300不不生生长长按按〈〈10个个/1g或或ml报告报告结果报告结果报告     1g或或ml1g或或ml1g或或ml6.大肠埃希菌大肠埃希菌 CPBPUSP方法方法MI法法I法法IMViC法法检检验验量量（（g或或ml））1110稀释剂稀释剂09%氯化钠溶氯化钠溶液液pH7.0氯化钠氯化钠-蛋白胨缓冲液蛋白胨缓冲液乳糖液体培养基乳糖液体培养基预增菌预增菌 大豆酪胨肉汤大豆酪胨肉汤35~37℃18~48h 增菌增菌BL增菌培养基增菌培养基35~37℃18~24h         M-I35~37℃5、、24h Mac 肉肉汤汤43~45℃18~24h乳糖液体培养基乳糖液体培养基35~37℃24~48h分离分离Mac.琼脂平板琼脂平板35~37℃18~72hMac、、EMB琼琼脂脂平平板板35~37℃24~48h生化试验生化试验MI及及IMViC++ 7.大肠菌群大肠菌群 CPBPUSP检检验验量量（（g或或ml））11 稀释剂稀释剂pH7.0无菌氯化钠无菌氯化钠-蛋蛋白胨缓冲液白胨缓冲液乳糖肉汤乳糖肉汤 预增菌预增菌 35~37℃2~5h 增菌增菌0.1g,0.01g0.001g BL培养基培养基35~37℃18~24h0.1g,0.01g,0.001g  乳乳糖肉汤培养基糖肉汤培养基35~37℃24~48h 分离分离EMB或或Mac.C琼脂平板琼脂平板35~37℃ 18~24hVRB.琼脂平板琼脂平板35~37℃ 18~24h 生化试验生化试验+- 8. 铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌  CPBPUSP检验量检验量1（（g或或ml））1（（g或或ml））10（（g或或ml））稀释剂稀释剂09%氯氯化化钠钠溶溶液液pH7.2磷磷酸酸盐盐缓缓冲液冲液pH7.0氯化钠氯化钠-蛋白胨缓冲液蛋白胨缓冲液大大豆豆酪酪蛋蛋白白消化培养基消化培养基增菌增菌胆胆盐盐乳乳糖糖增增菌菌培培养基养基35~37℃18~24h大豆酪蛋白消化培养基大豆酪蛋白消化培养基35~37℃18~48h大大豆豆酪酪蛋蛋白白消消化培养基化培养基35~37℃24~48h分离分离溴溴化化十十六六烷烷基基三三甲铵琼脂平板甲铵琼脂平板35~37℃18~24h Cetrimide琼脂，培养琼脂，培养18~72h大大豆豆酪酪蛋蛋白白消消化化培培养养基基41~43℃ 18~48h。

薄膜过滤薄膜过滤大大豆豆酪酪蛋蛋白白消消化化培培养养基基18~48h，，Cetrimide琼脂平板琼脂平板Cetrimide琼琼脂脂35~37℃72h生生化化试试验验5种种1种（种（42±1））3种种9.金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌 CPBPUSP检验量检验量1（（g或或ml））1（（g或或ml））10（（g或或ml））稀释剂稀释剂09%氯化钠溶液氯化钠溶液pH7.0氯化钠氯化钠-蛋白蛋白胨缓冲液胨缓冲液pH7.0氯氯化化钠钠-蛋蛋白白胨胨缓缓冲冲液液 大大豆豆酪酪蛋蛋白白消消化化培培养养基基 增菌增菌营营养养肉肉汤汤（（或或含含亚亚碲酸甲）培养基碲酸甲）培养基35~37℃18~24h大大豆豆酪酪蛋蛋白白消化培养基消化培养基35~37℃18~48h h大大豆豆酪酪蛋蛋白白消消化化培培养养基基35~37℃24~48h分离分离甘甘露露醇醇氯氯化化钠钠琼琼脂脂平平板板、、卵卵黄黄氯氯化化钠钠琼脂平板琼脂平板35~37℃24~48hBP琼脂平板琼脂平板35~37℃18~72hVJ(甘甘露露醇醇氯氯化化锂锂)琼琼脂脂、、MS(甘甘露露醇醇氯氯化化钠钠)琼琼脂脂、、BP琼琼脂脂平平板板35~37℃24~48h凝凝固固酶酶试试验验+凝固酶、凝固酶、DNA酶酶+10.沙门菌沙门菌 CPBPUSP检验量检验量1（（g或或ml））10（（g或或ml））10（（g或或ml））稀释剂稀释剂09%氯化钠溶液、氯化钠溶液、pH7.0氯化钠蛋白氯化钠蛋白胨缓冲液胨缓冲液pH7.0氯化钠蛋白氯化钠蛋白胨缓冲液胨缓冲液 乳糖液体培养基乳糖液体培养基增菌增菌营养肉汤培养基营养肉汤培养基35~37℃18~24h大豆酪胨肉汤大豆酪胨肉汤35~37℃18~24h乳糖液体培养基乳糖液体培养基35~37℃培养培养二二次次增增菌菌TTB培养基培养基35~37℃18~24h四硫酸盐肉汤培养基四硫酸盐肉汤培养基41~43℃18~24hSC、、TTB液体培养基液体培养基35~37℃12~24h分离分离EMB、、 Mac.C、、DHL、、SS琼琼脂脂平平板板35~37℃18~24hDC、、XLD、、BG.琼琼脂平板脂平板35~37℃18~72hBG、、 XLD、、 BS琼琼脂平板脂平板35~37℃24~48h生生化化试试验验+++11梭菌梭菌 CPBPUSP检检 验验 量量 （（ g或或ml））11010 稀释剂稀释剂09%无菌氯化钠溶无菌氯化钠溶液液pH7.0无菌氯化钠无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液蛋白胨缓冲液乳糖肉汤乳糖肉汤 加热处理加热处理1份份80℃10min另另1份不加热份不加热1份份80℃10min另另1份不加热份不加热 增菌增菌100ml 0.1%葡萄糖葡萄糖庖肉培养基庖肉培养基35~37℃72~96h100ml梭梭菌菌增增菌菌培培养养基基35~37℃厌氧厌氧48h 分离分离含含庆庆大大霉霉素素哥哥伦伦比比亚琼脂平板亚琼脂平板35~37℃48~72h含含和和不不含含庆庆大大霉霉素素哥哥伦比亚琼脂平板伦比亚琼脂平板35~37℃48h 过过氧氧化化氢氢酶酶试试验验++ 12.结果判断及复试结果判断及复试       CP        BP      USP控制菌控制菌一次检出为准一次检出为准一一次次检检出出为为准准不不符符合合标标准准规规定定，，取取大大于于25g的的样样品品复试复试需气菌和需气菌和真菌真菌第第一一次次试试验验结结果果超超过过规规定定的的标标准准，，重重新新抽抽样样复复试试两两次次，，三三次次结结果果平平均值报告均值报告测测定定结结果果在在规规定定的的限限度度标标准准5倍倍以以内内均为合格均为合格    同上同上    微生物限度标准微生物限度标准    1.收载方式收载方式 CPBPUSP各论项下各论项下+++制剂通则制剂通则++ 专论专论+++2. 制剂通则中规定微生物限度的剂型制剂通则中规定微生物限度的剂型          CP          BP         USP注射液注射液1、植入剂、植入剂1、、酊酊剂剂、、栓栓剂剂、、软软乳乳糊糊剂剂2、、眼眼用用剂剂2、、糖糖浆浆、、气气粉粉喷喷雾雾2膜膜、、口口服服液液混混悬悬乳乳剂剂、、散散剂剂2、、滴滴耳耳2、、滴滴鼻鼻、、洗洗冲冲灌灌肠肠剂剂2、、搽搽涂涂摸摸剂剂、、凝胶剂、贴剂凝胶剂、贴剂无无微微生生物物限限度度：：片片、、胶胶囊囊、、丸、颗粒丸、颗粒中药中药除除膏膏药药、、橡橡胶胶膏膏剂剂、、巴巴布布膏剂外药典均有规定膏剂外药典均有规定胶囊剂、口胶剂、颗粒剂、胶囊剂、口胶剂、颗粒剂、搽剂、泡腾剂搽剂、泡腾剂1、灌洗剂、灌洗剂1、、滴滴鼻鼻剂剂2、、口口服服液液、、口口服服散散剂剂、、注注射射液液1、、直直肠肠制制剂剂、、棒棒剂剂1、、片片剂剂、、药药用用棉棉条条、、局局部部用用散散剂剂2、、局局部部用用半半固固体体制制剂剂2、、透透皮皮贴贴剂剂、、阴阴道道制制剂剂、、眼眼科科制制剂剂1、、耳耳科科制制剂剂2 43个个品品种种（（38个个原原料料、、5个个制剂）制剂）注注射射剂剂、、眼眼膏膏剂剂         263个个品品种种（（原原料料96个个、、制剂制剂167个）个） 1.要求无菌；要求无菌；   2.无菌和微生物限度标准均有要求。

无菌和微生物限度标准均有要求                    谢谢 谢谢!。