免疫SOP：梅毒作业指导书.doc

66文件编号：LAB－OP－MY020第 页，共 页 版本：A/0生效日期：2008-02-01XXXXXX 医院检验科免疫室分析项目作业指导书 Elecsys E 170/e 601/e 411梅毒螺旋体抗体检测试剂盒(Syphilis)1. 分析原理采用双抗体夹心法原理，整个过程18分钟完成1) 第1步：10l标本、生物素化的梅毒螺旋体特异性重组抗原和梅毒螺旋体特异性重组抗原的钌（Ru）标记的复合物仪器孵育，形成夹心复合物2) 第2步：加入链霉亲和素包被的微粒，让上述形成的复合物通过生物素与链霉亲和素间的反应结合到微粒上3) 第3步：反应混和液吸到测量池中，微粒通过磁铁吸附到电极上，未结合的物质被清洗液洗去，电极加电压后产生化学发光，通过光电倍增管进行测定通过检测仪的定标曲线得到最后的检测结果，定标曲线是通过2点定标和试剂条形码上获得的主曲线生成的2. 标本要求血清：采用标准试管或者分离胶的真空管收集血浆：EDTA-K2,EDTA-K3或枸橼酸钠抗凝,CPDA(柠檬酸-磷酸葡萄糖嘌呤)以及含有分离胶的肝素锂抗凝血浆标本在2－8度可稳定14天，-20度可稳定6个月,25度可以保存5天。

标本可冻融5次有沉淀的标本使用前需离心加热灭活的标本可使用标本和质控品禁用叠氮钠防腐标本、定标液和质控品在测定前应预温到室温3. 试剂、校准品、质控品和其他所需材料采用罗氏原装配套试剂试剂：M： 链霉亲和素包被的微粒（透明瓶盖），1瓶，6.5ml粒子浓度0.72mg/ml，生物素结合能力： 470ng生物素/mg粒子含防腐剂R1：生物素化的梅毒螺旋体特异性重组抗原(大肠杆菌)（灰盖），1瓶，9ml;生物素化的TP特异性重组抗原(大肠杆菌),0.7mg/l;MESb),磷酸缓冲液50mmol/L，pH6.5含防腐剂R2：Ru(bpy)32+标记的梅毒螺旋体特异性重组抗原(大肠杆菌)(黑盖），1瓶，9ml: Ru(bpy)32+标记的梅毒螺旋体特异性重组抗原(大肠杆菌),0.7mg/l;磷酸缓冲液50mmol/l，pH 6.5含防腐剂b)MES=2-吗林代乙烷磺酸校准品：（试剂盒自带）梅毒螺旋体抗体定标液1 阴性定标液（白盖），2瓶(冻干品)，，1.0ml/瓶人血清, 含防腐剂;人血清,对抗梅毒无反应性梅毒螺旋体抗体定标液2 阳性定标液（黑盖），2瓶(冻干品)，1.0ml/瓶人血清, 含防腐剂;人血清,对抗梅毒无反应性质控品： Elecsys Syphilis质控品1和2 （PreciControl Syphilis）货号06923364190其他所需材料：常规实验设备Elecsys E 170/E 411Elecsys 系统清洗液（SysClean）,货号11298500316 Elecsys E 170分析仪所需材料:Elecsys 系统缓冲液 （ProCell M）,货号04880340190Elecsys 检测池洗液（CleanCell M）,货号04880293190Elecsys PC/CC杯,货号03023141001Elecsys 清洗液（ProbeWash M），货号03005712190Elecsys 反应杯/加针头/废物袋（CUP/TIP），货号12102137001Elecsys 系统清洗适配器（SysClean Adapter M），货号03027651001 Elecsys E 411分析仪所需材料:Elecsys 系统缓冲液（ProCell），货号11662988122 Elecsys 测量池清洗液（CleanCell），货号11662970122 Elecsys 系统清洗液（SysWash），货号11930346122 Elecsys 适配器 （Adapter for SysClean），货号11933159001 Elecsys 反应杯（CUP），货号11706802001 Elecsys 加样头（TIP），货号117067990014. 仪器和校准使用仪器：罗氏公司生产Elecsys 2010/E 170/e601/e 411全自动电化学发光免疫自动分析仪仪器校准：每批试剂必须用新鲜试剂和校准一次。

另外，以下情况需要再次校准： 校准过期:批校准稳定28天，盒校准7天根据要求进行标定：如质控结果超出范围时；更换某些试剂时，根据规定进行多次标定5. 操作步骤参见仪器标准操作规程6. 质量控制用质控品1和质控品2，至少每24小时或每一次校准后测定一次质控间隔期应适用于各实验室的具体要求检测值应落在确定的范围内，如出现质控值落在范围以外，应采取校正措施7. 计算方法分析仪根据Call和Ca12的测量值自动计算cutoff值样本的结果以有反应性和无反应性以及COI值(样本信号值/临界值)表示.8. 参考范围结果解释Elecsys梅毒螺旋体抗体检测中,样本的COI值<1.00的样本表示对Elecsys梅毒测定无反应性.此类标本被视为梅毒特异性抗体阴性,无需进一步测定.Elecsys梅毒螺旋体抗体检测中,样本的COI值>1.00的样本表示对Elecsys梅毒测定有反应性.所有初步反应样本应一式两份,采用Elecsys梅毒螺旋体抗体检测重新检测.若两次检测均发现样本的COI值<1.00 ,样本将被视为梅毒特异性抗体阴性.在任一次重测中样本的COI值>1.00的初步反应样本被视为重复反应性;必须用推荐的确认流程对重复反应性的样本加以验证.9.分析性能精密度：根据CLSI（美国临床和实验室标准协会）的协议（EP5-A2），采用Elecsys试剂、人血清和质控品确定精密度：每天2次重复检测，共21天(n_84)。

获得如下结果： 10.干扰因素检测结果不受黄疸(胆红素<1129 Ltmol/L或<66mg/dL)、溶血(血红蛋白<0.311 mmol/L或<0.500g/dL)、脂血（甘油三酯<22.8 mmol/L或<2000mg/dL）和生物素<246 nmol/L或<60 ng/mL的影响判断标准：回收率在初始值土15%之内COI值在0.00-1.0的样本的绝对误差在0.2COI.对于接受高剂量生物素治疗的患者（>5 mg/天），必须在末次生物素治疗8小时后采集样本类风湿因子低于1500 IU/mL时，检测结果不受影响按照ElecsysSyphilis检测方法使用说明分析样本时，未发现测定因高剂量产生高剂量钩状效应体外对16种常用药物进行试验未发现会影响检测结果少数病例中极高浓度的分析物特异性抗体、链霉亲合素或钌抗体会影响检测结果通过适宜性的实验设计可将影响因素降到最低 阴性测试结果不完全排除感染梅毒的可能性,梅毒感染极早期(血清转换期)阶段或者晚期的血清或者血浆样本又可能得到阴性结果11.临床意义 梅毒是由细胞内革兰氏阴性的螺旋体梅毒螺旋体(TP)苍白亚种导致的; 梅毒主要通过性传播,但也可以在怀孕或者分娩的时候通过母婴传播. 在梅毒的早期阶段,临床诊断是很困难的.在窗口期过后,利用暗视野或者荧光显微镜的血液检查会得到灵敏的结果,是目测检测更方便的替代方法.一般情况下,症状的一开始是身体侵入部位的无痛性的溃疡(一期梅毒);然后随着细菌的传播而出现全身的症状(二期梅毒).随后进入漫长的潜伏期(无症状期).最后,三期梅毒随之而来,其特征是出现皮肤肉芽肿性病变,神经梅毒和或心血管梅毒(可能致命). 对梅毒螺旋体的免疫反应是病变发展的主要原因.抗体反应不仅直接针对梅毒螺旋体特异性抗原(梅毒螺旋体抗体),还针对梅毒螺旋体非特异性抗原(非梅毒螺旋体抗体);例如,由微生物引起的细胞损伤而释放的抗原. 因此,在诊断梅毒的时候需要进行非梅毒螺旋体和梅毒螺旋体检测. 非梅毒螺旋体检查利用卵磷脂和胆固醇和纯化磷脂构成的抗原来检测抗心磷脂抗体,因为心磷脂存在于许多梅毒患者 的体内;梅毒螺旋体抗体检测抗梅毒螺旋体蛋白抗体.梅毒螺旋体抗体阳性表明之前曾暴露于梅毒 非梅毒螺旋体检查对于监控疾病进展和疗效监测很有帮助.这两种检查都是必要的辅助诊断的手段.12．参考文献1) Sea AC, White BL, Sparling PF. Novel Treponema pallidum serologictests: a paradigm shift in syphilis screening for the 21st century. ClinInfect Dis 2010:51(6);700-708.2) Da Ros CT, Schmitt Cda S. Global epidemiology of sexuallyCenters for Disease Control and Prevention. Sexually Transmitted3)Disease Surveillance 2009. Atlanta: U.S. Department of Health andHuman Services; 2010. Available fromwww.cdc.gov/std/stats09/surv2009-complete.pdf4)Jebbari H, Simms I, Conti S, et al. Variations in the epidemiology ofprimary, secondary and early latent syphilis, England and Wales: 1999to 2008. Sex Transm Infect 2011;87(3):191-198.5) Righarts AA, Simms I, Wallace L, et al. Syphilis surveillance andepidemiology in the United Kingdom. Euro Surveill 2004;9(12):21-25.6)World Health Organization. The global elimination of congenitalsyphilis: rationale and strategy for action,http://whqlibdoc.who.int/publications/2007/9789241595858_eng.pdf,2007.7)Schmid G. Economic and programmatic aspects of congenital syphilisprevention. Bull World Health Organ 2004;82(6):402-409.8) World Health Organization. Sexually transmitted diseases (STIs). Factsheet No 110,http://www.who.int/mediacentre/factsheets/fs110/en/index.html9) Hawkes S, Matin N, Broutet N, et al. Effectiveness of interventions toimprove screening for syphilis in pregnancy: a systematic review andme。