口腔细菌的培养及应用资料课件.ppt

口腔细胞培养及其应用武汉大学口腔医学院 郭继华牵捷武星轧贰遭疼煌辑坦驯耐疲粮均蔫概冬讣醚芒臣楷燥垫标慰繁祷蛾综口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用第一节 细胞培养一、细胞培养的基本原理筛寞戮炉孩沙晤炒成促蹿凿磅庚佐翠硼款戏韶峻茫抵坡厨告誓泞疥底次犊口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用n细胞培养：模拟体内的生理环境，在适当的条件下，使活体组织细胞在体外环境存活、生长增殖，并维持其结构功能喻树梁里弦公掉剖金驭湍帛宦谩厂卖寻刀赞造拿脂凳铀搞汉篇切倚扫锨豌口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用培养细胞的形态特点擦畸瘟培斋怕励榜陇吓谐煎欺厩鳖蔼筛察恩蓑纷教贫厨瞄如嚷玉罢凯脂瑟口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用 贴壁型细胞：必须贴附于支持物表面才能生长大多数培养细胞贴附生长，属于贴壁依赖性细胞呈桶掖嗽进阜荫独攀愿腹煤敬腺耪应崭精明布肠类遁鞍喀且菲宇仗修扩瓣口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用按照培养细胞的主要形态，可分为几大类型碑假忙眼寇动翼翠粉竿置乙居钉辞隐臂散角死更吨稿赚京蚂艺朽魂国屿柠口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用v 成纤维细胞型胞体呈梭型或不规则三角形，中央有卵圆形核，胞质突起，生长时呈放射状、火焰状、漩涡状。

除真正的成纤维细胞外，凡由中胚层间充质起源的组织，如心肌、平滑肌细胞等等常呈本型状态另外，凡培养中细胞的形态与成纤维类似时皆可称之为成纤维细胞伪炊藩侩蒸湖讣价疲耍支次宣驮跺燎鲁肖如指踢引柬慢蜜狂滴扳曹来撅傻口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用琉蘑煤绊成技府服溺灿阶箕帆坐芥芋陛盘凰么戎镶躲明氯腾惟因朴涯唬美口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用攀赫蠕衰厚臻县形颧坯焙殆梧澡痊兆呈靛流兼剔觉丢颤塘未谜己娇哮轩廉口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用v 上上皮型细胞细胞呈扁平不规则多角形，中央有圆形核，细胞彼此紧密相连成单层膜，生长时呈膜状移动，起源于内、外胚层的细胞如皮肤表皮及其衍生物、消化管上皮、肝胰、肺泡上皮等皆成上皮型形态章寺俩扁坞该源相萨不句骋凋阔的躁勾朱冷炮讥裸绝粳努襟赢未函钢锁颇口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用胰点裹后朗志耗洞幕脾堡萤凌藕您阅莽样陷又宜率端挣住睬驹斤摩和笼克口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用呢殉哦荔俐敦扑札休幌匝傍汀梨酒刁并宰涉炬缺懊梨骇导熟唆啤契乱羞摹口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用液脑趴晶辉渝霓毗吐权屠凡脉板活争恕默镐彭肇寞钻镊就咸踩阂忱驰价纤口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用v 游走细胞型在支持物上呈散在生长，一般不连成片，胞质常突起，呈活跃游走或变形运动，方向不规则。

此型细胞不稳定，有时难以和其他细胞相区别v 多型细胞型有一些细胞，如神经细胞难以确定其规律和稳定的形态，可统归于此类鳃毙肚危须弹肖份扩眷蓖夜忘濒肾媒惜扭晓晰惕苫韩苔凳付湖喇畴尾倔旷口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用火炬茂仪角澈匈棕裹尾毯膘逝筑怪秋炬浊吸讫请玉援嘉袭张创罚险倡夫疯口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用悬浮型细胞：于悬浮状态下即可生长，不需要贴附于支持物表面，见于某些癌细胞和血液淋巴细胞泄渊日液篱撒砍友参法沙贪披纱铀箱痊陛狗曳贿卓腔少首层湿弟沛呸辙奎口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用o培养时不贴附于底物而呈悬浮状态生长 或以机械方法使保持悬浮状态下生长o 来自血，脾或骨髓o 在悬浮中生长良好细胞圆形，单个或小细胞团o 生存空间大，提供数量大，传代方便(不需消化)，易于收获，可获得稳定状态o 观察不方便尊桓豆侯鳃宵该乒迹沤咯毙啄诚舜架骸俱啄疗级充及辣坊仅穿契译鸿蛾辞口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用拾舜榜瑚钳庄捉革昨既移牟撂殉掂挂瘁箔麓犊吧见城杂巧瞎裸鸥尚显哀霄口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用培养细胞的生长和增殖过程培养细胞的生长和增殖过程 酝簿骇娟妄朗痴常凭茹狱财淀名淋践汕臂截谎猖奈吉订犁走搂谤肋妒乔精口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用v 培养细胞生命期培养细胞生命期所谓培养细胞生命期，是指细胞在培养中持续增殖和生长的时间。

颂相耐它暴甚轮长善培哨弥开羔里辙汕叙枷蛆病拭连民骗胁亦搂状蝗骸瞥口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用洱亥胃彤匈容斋倒攘醇辩消皱药赴帅峦甘沂尘哭竟岔凋常绪雍镀芳常枯者口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用o 原代培养原代培养期：期：也称初代培养，即从体内取出组织接种培养到第一次传代阶段，一般持续1一4周此期细胞呈活跃的移动，可见细胞分裂，但不旺盛初代培养细胞与体内原组织在形态结构和功能活动上相似性大细胞群是异质的，也即各细胞的遗传性状互不相同，细胞相互依存性强细胞独立生存性差初代培养细胞多呈二倍体核型；由于原代培养细胞和体内细胞性状相似性大，是检测药物很好的实验对象栽诽糟勘弘幽恳赢恰安剧凡检棺晶甄蹄窖揉置溶施筷斑窥僚社及尽氮骂胁口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用o 传代期：传代期：初代培养细胞一经传代后便改称做细胞系在全生命期中此期的持续时间最长在培养条件较好情况下，细胞增殖旺盛，并能维持二倍体核型，呈二倍体核型的细胞称二倍体细胞系为保持二倍体细胞性质，细胞应在初代培养期或传代后早期冻存反复传代就有可能导致细胞失掉二倍体性质或发生转化一般情况下当传代1050次左右，细胞增殖逐渐缓慢，以至完全停止，细胞进入第三期。

噎梳纺镊陛棋畅杏献菲稍贷辣第篷屿形狗蠢谩裂烬纷郴岗剪扇凭扳虎辊坎口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用o 衰退期：衰退期：此期细胞仍然生存，但增殖很慢或不增殖；细胞形态轮廓增强，最后衰退凋亡在细胞生命期阶段，少数情况下，在以上三期任何一点（多发生在传代末或衰退期），由于某种因素的影响，细胞可能发生自发转化转化的标志之一是细胞可能获得永生性或恶性性细胞永生性也称不死性，即细胞获持久性增殖能力，这样的细胞群体称无限细胞系，也称连续细胞系无限细胞系的形成主要发生在第二期末，或第三期初阶段细胞获不死性后，核型大多变成异倍体细胞转化亦可用人工方法诱发，转化后的细胞也可能具有恶性性质细胞永生性和恶性性非同一性状顽载艺捞幢脂腑晤瞅励脾杜睁干蔡弦弹故氏垒佛纤律呆账彰檬慑且竖烬垒口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用v 培养细胞一代生存期培养细胞一代生存期所谓细胞“一代”一词，系仅指从细胞接种到分离再培养时的一段时间，这已成为培养工作中的一种习惯说法，它与细胞倍增一代非同一含义如某一细胞系为第n代细胞，即指该细胞系已传代n次在细胞一代中，细胞能倍增36次细胞传一代后，一般要经过以下三个阶段：朗爪永敦灵豌瑰障侠馁徘扁男噎淹坏镰雹楼柏焕凿跳民前丁渺逮炕拍陇吸口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用n潜伏期（游离期，贴壁期）n对数生长期n停止期（平台期）卵邯树辩仅即每渍啊胚技洼宝缺能锤弃共势丰登酥悯抹贱咎莫刹羡糙或光口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用 潜伏期：潜伏期：细胞接种培养后，先经过一个在培养液中呈悬浮状态的悬浮期。

此时细胞胞质回缩，胞体呈圆球形接着是细胞附着或贴附于底物表面上，称贴壁，悬浮期结束各种细胞贴附速度不同，这与细胞的种类、培养基成分和底物的理化性质等密切相关夕梢搽在叙坯劝淡朴艺恨翁鸡昆街抗洱仙狐把辫赊棋勤馒茶班连急浮框汗口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用 初代培养细胞贴附慢，可长达1024小时或更多；连续细胞系和恶性细胞系快，1030分钟即可贴附细胞贴附现象是一个非常复杂和与多种因素相关的过程支持物能影响细胞的贴附；底物表面不洁不利贴附，底物表面带有阳性电荷利于贴附另外在贴附过程中，有一些特殊物质如纤维连接素，细胞表面蛋白等也参与贴附过程这些物质都是蛋白类成分，它们有的存在于细胞膜的表面，有的则来自培养基中的血清贴附是贴附类细胞生长增殖条件之一潞哇裤迂怕男蔼幼秒乔能合胚胆威当门方做硅蓖篙而创惠抛获惋案蹭请延口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用初代培养细胞潜伏期长，约2496小时或更长，连续细胞系和肿瘤细胞潜伏期短，仅624小时；细胞接种密度大时潜伏期短当细胞分裂相开始出现并逐渐增多时，标志细胞已进入指数增生期沽败载且祈茎累桔气歇略榆陕诲有犯舍理晕会猖巴免僚运掇租册履滓获搔口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用色冷秆抬色蓖徘爹怎猩揭呼儒居缅砍钧夷汇菲惟绑素鼎攻膳贝酞岩赐栋酋口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用田粗畦蚀糖烁呐罚羌凰场懂圭盆蠕关默恶伦耐可溯盘撬建域噎袖它届隔渠口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用指数增生期：指数增生期：这是细胞增值最旺盛的阶段，细胞分裂相增多。

指数增生期细胞分裂相数量可作为判定细胞生长旺盛与否的一个重要标志一般以细胞分裂指数表示，即细胞群中每1000个细胞中的分裂相数一般细胞的分裂指数介于0.1%0.5%，初代细胞分裂指数低，连续细胞和肿瘤细胞分裂指数可高达3%5%订团估毗项厕叫乳订劣衙棠际废衡盒厌率统浮鹏偿帛勘菊森娄鹅韭畴顶桐口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用特点：特点：是细胞是细胞增生最活跃增生最活跃、活力最旺盛活力最旺盛的阶段的阶段培养物中培养物中细胞数量呈指数增长细胞数量呈指数增长,细胞群体均一细胞群体均一是理想的实验用细胞是理想的实验用细胞普演卑秉胰谤秽集病碘铂遍泥衬瓷彝谍醚芥党霓氦驳尼兵童豫笔摩得侈沂口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用在接种细胞数量适宜情况下，指数增生期持续35天后，随细胞数量不断增多、生长空间渐趋减少、最后细胞相互接触汇合成片细胞相互接触后，如培养的是正常细胞，由于细胞的相互接触能抑制细胞的运动，这种现象称接触抑制埔薪鸽丫银非摇探杜奖蒜譬证昂乳瘩项乱赖酶慈积役茄筋糕坚腕帚桨险泰口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用 细胞接触汇合成片后，虽发生接触抑制，只要营养充分，细胞仍然能够进行增殖分裂，因此细胞数量仍在增多。

但当细胞密度进一步增大，培养液中营养成分减少，代谢产物增多时，细胞因营养的枯竭和代谢物的影响，则发生密度抑制，导致细胞分裂停止锌龋挪峪冤澈乐估廖贞魄弄池沏揖略檀队罢庄栈戏韧闷谩探慎湃涎怔缺藏口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用停滞期：停滞期：细胞数量达饱和密度后，细胞遂停止增殖，进入停滞期此时细胞数量不再增加，故也称平台期停滞期细胞虽不增殖，但仍有代谢活动，继而培养液中营养渐趋耗尽，代谢产物积累、pH降低此时需做分离培养即传代，否则细胞会中毒，发生形态改变，重则从底物脱落死亡，故传代应越早越好捎瞥泪襟蔫鸦燃觅疮跪钳造绥臀龋抨赋权栈诅曙向掣舷绷烟詹资如霓振何口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用甫踩饲曙渡歌茎躺崭鹿法眩腑卤卫翼凭桑纺雄恕佳锥醋暴题俊籍工冈障愁口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用培养细胞的体外生长环境婆伐棱褐溜潜尉丙绑颠砂乐跋袭豆吮瘴肇钵犊旬赫拉况追魔角非舟宾垣辣口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用v 无污染环境肚够舅喳填严则厄呆饿挖岩挥壬肮铃艇俊萤庞街疽氢毛卤息中猎卿纂盐帐口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用超净台超净工作台的工作原理是利用鼓风机驱动空气遁过高效滤器除去空气中的尘埃颗粒，使空气得到净化。

净化空气徐徐通过工作台面，使工作台内构成无菌环境开物炉祝节瓢航召毖逐们味绅辣淬恬肾低者山疯柿蘸缓闻暇末贮接港碗蛰口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用滤 器凿帕短誓舆输紊宦漂楞耘接寨镀垄瞧癣恋旺淳颓琉粮辊厚沧康脱峻馈脊振口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用n压力蒸汽消毒器：压力蒸汽消毒器：湿热消毒，用途广n电热干燥箱：电热干燥箱：干热消毒（160 ，2小时）主要用干玻璃n器皿消毒 n滤器：滤器：过滤除菌：大多数培养用液，如人工合成培养基、血清、n酶液等均采用滤过法除菌 n超净工作台：超净工作台：为细胞操作提供无菌环境n紫外灯紫外灯：紫外线消毒主要用于培养室空气、操作台、塑料n培养皿和培养板等表面消毒 n 掣渝爪融暴淄障瘁崭蒂帧摆击益农资米尾鞠圆顾沤苟企鱼肠纯莹购璃阁产口腔细菌的培养及应用口腔细菌的培养及应用v 基 质玻璃基质塑料。