保健食品增强免疫力的评价方法.doc

保健食品增强免疫力的评价方法一、实验内容：1. 细胞免疫2. 体液免疫3. 非特异性免疫功能4. NK 细胞活性二、评价指标1. 体重和免疫脏器重量的测定：称量实验动物在实验的初，中，终期的体重，测量胸腺和脾脏重量，评价受试动物的一般情况，脏器/体重比，包括胸腺/体重比，脾脏/体重比2. 细胞免疫功能测定：1) 小鼠脾淋巴细胞转化实验2) 迟发性超敏反应（DTH）3. 体液免疫功能1) 抗体生成细胞检测2) 血清溶血素测定4. 单核/巨噬细胞功能测定1) 小鼠廓清实验2) 小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验5. NK 细胞活性测定三、动物选择1. 正常或免疫功能低下的模型动物进行实验2. 一般选择小鼠，品系不限，推荐使用近郊系动物，性别为单一性，6-8W，体重 18-22g3. 动物数量每组 10-15 只，清洁级以上四、实验剂量1. 至少设 3 个剂量组，另设空白对照组，也可加阳性对照组2. 尽可能找出最低有效剂量3. 3 个剂量中，有 1 个剂量应相当于人体推荐摄入量（折算为每公斤体重的剂量）的 10 倍4. 最高剂量不得高于人体推荐摄入量的 30 倍5. 剂量必须在毒理学评价的安全剂量范围内五、实验时间一般 30 天六、结果判定1.细胞免疫功能小鼠脾淋巴细胞转化实验和 DTH 反应实验结果均为阳性，或其中一个实验的两个剂量组结果阳性，则可判定样品具有增强细胞免疫作用2.体液免疫功能抗体生成细胞实验和血清溶血素测定如结果均为阳性，或其中一个实验的 2 个剂量组结果阳性，可判定具有增强体液免疫作用。

3.单核/巨噬细胞功能实验小鼠碳廓清实验和小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验结果均为阳性，或其中一个实验的两个剂量组结果阳性，可判定具有增强非特异性免疫作用4. NK 细胞活性一个以上剂量组结果阳性，可判定具有增强 NK 细胞活性作用5. 在 1-4 项实验中，若有 2 个功能检测呈阳性（其中 1，2，3 应在以上单项功能判定的基础上） ，可判定该样品具有增强免疫作用6. 对 1-4 任何一项实验，具有抑制作用，可判定该样品具有免疫抑制效应七、实验方法1. 细胞免疫小鼠脾淋巴细胞转化——MTT 或放射性核素掺入法DTH 反应—— 耳肿胀法或足足石增厚法2. 体液免疫抗体生成细胞实验——Jerne 改良玻片法）血清溶血素实验——血凝法和半数溶血值 HD50 法测定3. 非特异性免疫小鼠碳廓清实验小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验——滴片法或半体内法5. NK 细胞活性乳酸脱氢酶测定（LDH）法和放射性核素 3H-TdR八、法规要求将来可能增加的评价1. 血液学检查项目细胞分化抗原分类检测细胞分类计数指标2. 淋巴细胞转化增殖实验的改进增加新方法：5-溴脱氧尿苷掺入标记检测细胞增殖动力学指标抗增殖细胞核抗原单抗或 PCNA 免疫组化染色CFSE 标记细胞检测细胞增殖能力B 淋巴细胞对有丝分裂原的反应性（LPS 诱导）和混合淋巴细胞反应评价3. 单核/巨噬细胞吞噬功能实验增加新方法：单核/巨噬细胞计数单核/巨噬细胞吞噬荧光微球的能力单核/巨噬细胞吞噬 FITC 标记的细菌的功能单核/巨噬细胞吞噬凋亡细胞的功能单核/巨噬细胞呼吸爆发、趋化作用及细胞溶解活性，细胞因子释放活性氧和活性氮等的定量检测。

4. NK 细胞活性测定增加新方法：微细胞毒性方法4h51Cr 释放测定法。