外泌体提取方法总结范文.docx

1、细胞培养上清：即在4°C下，首先300某g离心10min,吸取上清液，然后2000某g离心10min；吸取上清液后，10000某g高速 离心30min，吸取上清液；140000某g超速离心90min；除去上清液，所 获得的沉淀即为外泌体用PBS缓冲液洗涤沉淀并重悬后，140000某g 再次离心90min，100uLPBS缓冲液重悬沉淀，冻存于-80C备用2、将小鼠或人血收集在1.5mL管中，并使其在37C下凝结1小时而不进行抗凝此后，将其以2,000某g离心持续10分钟获得血 清接着将血清以3,000某g离心10分钟将上清液以无菌PBS以1：1 的比例稀释并离心再次以10,000某g保持30分钟，然后以200,000某g 进行2小时超速离心将颗粒在a中洗涤大量PBS，通过0.2-um注射器 过滤器过滤，并以 200,000 某 g 离心 1 小时，然后收集沉淀并重悬于 PBS 或 PBS 中用于后期功能或生化测定的培养基3、为了从体液（例如尿液，支气管肺泡灌洗液，血清，血浆，肿瘤腹水） 中纯化外泌体，只需通过常规方法收集液体即可血浆用紫色的管子， EDTA抗凝，血清的话不抗凝直接离心。

在4°C下在玻璃瓶中储存长达5 天，直至进行外泌体纯化基本方案1 中指出的所有预处理也适用于该方案材料液体（例如， 血浆：通过 Ficoll 离心与血细胞分离;淋巴，血清，尿液，细支气管灌洗 或肿瘤腹水）磷酸盐缓冲盐水（PBS;附录）2A）冷冻离心机50毫升聚丙 烯离心管0.22微米过滤装置（如Steritop，Millipore）超速离心机和 固定角度或摆动式转子（见表3.22.1）适用于超速离心机转子的聚合物 管或聚碳酸酯瓶（见表3.22） 0.1）注意：所有离心均应在4C下进行1. 用等体积的PBS稀释液体将稀释的液体转移到50毫升管中在 2,000某g,4°C下离心30分钟2. 将上清液转移到超速离心管或瓶中，没有颗粒污染（参见基本方案 1,步骤3注释）在12,000某g,4C下离心45分钟3. 小心地将上清液转移到超速离心管或瓶中（根据处理的液体体积, 可参见表3.22.1中的管）在110,000某g,4C下离心2小时4.将沉 淀重悬于1mlPBS中，并将其在其中一个管中汇集用PBS填充管以大量 稀释再悬浮液5. 通过0.22- um过滤器过滤悬浮液，并收集在新鲜的超速离心管或 瓶中。

6. 在110,000某g,4C下离心70分钟倒出上清液7. 将沉淀重悬于 1mlPBS 中,然后用 PBS 填充管在 110,000 某 g,4C 下离心 70 分钟倒出上清液8. 将沉淀重悬于50至200 U1PBS中在-80C下储存长达1年。