淀粉酶的专一性和温度、pH、激活剂.docx

实验九淀粉酶的专一性和温度、pH、激活剂及抑制剂对酶活性的影响实验类型：验证型目的和要求1. 通过本实验观察、验证酶的专一性和温度、pH、激动剂及抑制剂对酶活性的影响2. 熟悉淀粉及其酶解产物的特殊显色方法；电热恒温水浴的使用3. 了解唾液淀粉酶的收集与预处理原理酶具有高度专一性，一种酶只能催化一种或一类底物发生反应，如淀粉酶只能水解淀 粉，不能水解蔗糖当淀粉被淀粉酶彻底水解为还原性麦芽糖和葡萄糖时，能使班氏试剂 的Cu2+还原成Cui+，生成砖红色CuO沉淀淀粉酶的活性受温度、pH、激动剂及抑制剂、2酶浓度以及作用时间等多种因素影响，因而水解淀粉生成一系列分子大小不同的糊精不 同程度的水解糊精可与碘反应生成紫色、棕色或红色络合物通过上述特征性反应，并以 蔗糖等作对照，便可观察、验证淀粉酶是否具有专一性以及它的催化活性是否受到影响操作方法一、 唾液淀粉酶的收集与处理1. 制备唾液实验者先将痰咳尽，用自来水漱口，以清除口腔内食物残渣，再在口腔内含蒸馏水约15ml， 并作咀嚼咕漱运动，3分钟后吐入垫有两层经润湿处理的脱脂纱布的漏斗内，过滤于小烧杯 中备用，为与下面稀释唾液相区别，此称制备唾液。

2. 煮沸唾液取上述唾液约2ml，盛入1中号试管中，置沸水浴煮沸5分钟备用3. 稀释唾液调整唾液淀粉酶活性，使之在pH6.8、37°C和既无激动剂又无抑制剂条件下，作用5min，水 解淀粉至红色糊精为宜具体做法是取12凹白瓷反应板一块，按下列步骤操作：① 第1排每凹各加1滴制备唾液，12、13、14凹分别加生理盐水1、2、3滴，用滴管采用抽 吸法，由稀到浓（14一12）小心混匀各凹，易使溅入相邻凹中每混匀一凹便取其1滴放入 同列的2排凹中，剩余稀释唾液应全部放回原凹中② 在盛有不同稀释度唾液的第2排各凹中，均加入4滴缓冲液（pH6.8），2滴1%的淀粉液 和2滴蒸馏水，用①混匀法充分混匀，置37C下5min③ 在第2排各凹中加I液一滴，混匀，观察比较各凹颜色，以浅棕-红色对应的稀释倍数， 用生理盐水稀释3ml制备唾液备用二、 唾液淀粉酶的专一性以及温度、pH、激活剂和抑制剂对唾液淀粉酶活性影响的观察（一）取试管3支编号，按下表1操作表1唾液淀粉酶专一性的实验观察试剂试管pH6.8缓冲 液1%淀粉溶 液1 %蔗糖溶液制备唾液煮沸唾液120滴10滴—5滴—220滴10滴——5滴320滴—10滴5滴—将上述各管混匀后，置37r水浴中保温10分钟，然后每管加入班氏试剂20滴，再放入 沸水浴中煮沸约15分钟，观察各管颜色反应，并说明原因。

二）温度影响酶促反应的实验观察1. 取试管3支编号，按下表2操作：表2温度影响酶促反应的实验观察管号试剂1231.pH6.8缓冲液20滴20滴20滴2.1%淀粉溶液10滴10滴10滴3.预热5min37C水浴沸水浴冰浴4.直接加入稀释唾 液，立即混匀、计时5滴5滴5滴5.保温10min 37°C水浴 沸水浴 冰浴2.将一、二管移入冰水浴中，待各管温度一致后速向各管加入碘液1滴，混匀后观察各管颜色的区别， 并说明温度对酶促反应的影响四、pH影响酶促反应的实验观察1. 取试管3支编号，按下表3操作：表3 pH影响酶促反应的实验观察pH4.0缓冲液pH6.8缓冲pH8.0缓冲1 %淀粉溶 稀释唾液液液液试管120滴——10滴5滴试管2—20滴—10滴5滴试管3——20滴10滴5滴2. 将上述各管混匀后，置37C水浴中保温10分钟，然后每管加入碘液1滴，混匀后观察 各管颜色的区别，并说明pH对酶促反应的影响五、激动剂和抑制剂影响酶活性的实验观察1. 取试管4支编号，按下操作:表4激动剂和抑制剂影响酶活性的实验观察pH 6.8缓冲液1 %淀粉 溶液蒸馏水0.9 %NaCl1%CuSO1%Na SO稀释唾液120滴10滴10滴—4—2 4—5滴220滴10滴—10滴——5滴320滴10滴——10滴—5滴420滴10滴———10滴5滴2. 将上述各管放入37^水浴中保温10分钟怎么减肚子，然后每管加入碘液1滴，混匀 后观各管颜色的区别，并说明激动剂和抑制剂对酶促反应的影响。

注意事项1. 反应试管应清洗干净，不同酶液、试剂及其滴管不能交叉混用；2. 使用混合唾液，或通过预试选出合适的唾液稀释度，效果更为显著试剂和器材一、 器材1. 滴管、烧杯、试管(架)及试管夹2. 恒温水浴箱与水浴锅3. 脱脂棉、漏斗及纱布4. 白瓷反应盘二、 试剂1.1 %淀粉 称取淀粉1g，岳阳家政加少量水调成糊状，加入煮沸的0.3%NaCl溶液至 100m12.1%蔗糖溶液3. 班氏试剂A液：取柠檬酸钠173 g，无水碳酸钠100 g，加水600ml，加热溶解，冷 却后稀释至850ml； B液：取结晶硫酸铜(CUS04 - 5H2O) 17.3 g溶于100ml预热的蒸馏水中， 冷却后加水至150ml将A液缓慢倒入B液中混匀置试剂瓶备用4. 碘液：称取碘4g、碘化钾6g溶于l000ml蒸馏水中，置棕色瓶内贮存备用5. 各种pH缓冲液⑴pH6.8缓冲液:取0.2mol/LNa2HPO4溶液772ml, 0.1mol/L怎么减肚子柠檬酸溶液228ml 混合即成 2 4⑵ pH4.0 缓冲液：取 0.2mol/LNa HPO 溶液 385.5ml, 0.1mol/L 柠檬酸溶液 614.5ml 混2 4合即成。

⑶pH8.0缓冲液:取0.2mol/LNa2HPO4溶液972ml，0.1mol/L柠檬酸溶液28ml混合即成6.0.9% NaCl 溶液7.1%CuSO4 溶液8.1%Na2SO4 溶液思考题1. 简述温度、pH、激动剂及抑制剂排毒养颜胶囊、酶浓度等因素影响对淀粉酶活性的影 响2. 简述淀粉酶活性测定的原理及注意事项。