2022年-动物实验基本操作.docx

动物实验基本操作一〔固定、性别判定、标识〕【实验目的 】在做动物试验时，为确保给药、实验顺利进行，防止被动物咬伤、准确区分动物性别、 准确标识动物， 要学会用正确方法捉拿实验动物、握标识动物的方法掌握区分动物性别的方法以及掌【实验对象 】SD大鼠， KM小鼠，雌雄各半，体重 180-250g 实验器材和药品 】器材：鼠笼、大小鼠固定器、方木板、美式图钉、细绳、防护手套药品：苦味酸80%~90%酒精饱和溶液、20%乌拉坦【实验步骤 】一、小鼠的捉拿1、徒手固定 ：用右手提起尾巴中部，放在鼠笼盖或其他粗糙面上向后上方轻拉，此时，小鼠前肢紧紧抓住粗糙外表 左手拇指和食指迅速捏住小鼠颈背部皮肤， 再置小鼠于左手心，并以左手掌心和中指夹住小鼠背部皮肤， 无名指压住小鼠尾根部， 将其固定于手中 右手可行注射或其它操作2、固定器固定 ：尾静脉注射或给药时， 将小鼠放进固定器中或者大小和重量适当的容器 〔如烧杯〕，只露出尾巴，该类容器能够压住尾部，防止其活动勿固定过紧造成窒息死亡进行腹腔手术或心脏采血时， 先准备一个 15-20cm 的方木板， 边缘钉入五颗钉子 将小鼠四肢分别用 20-30cm 的线绳捆绑， 线的另一头分别绑在方木板的钉子上， 并且在头部上颚切齿牵引一根线绳，也固定在钉子上，到达完全固定。

二、大鼠的捉拿 4-5 周内的大鼠，方法同小鼠周龄较大的，则： 1、首先戴好防护手套 2、用右手拇指和食指抓住大鼠尾巴中部将大鼠提起，放在大鼠饲养盒的面罩上 3、左手顺势按、卡在大鼠躯干背部，稍加压力向头颈部滑行4、以左手拇指和食指捏住大鼠两耳后部的头颈皮肤，其余三指和手掌握住大鼠背部皮肤，完成抓取保定三、性别判定 小鼠、大鼠性别判定〔1〕幼鼠 外生殖器与肛门间隔短的是♀，外生殖器与肛门间隔长的是♂〔2〕成年动物可直接肉眼识别，雄性有膨起的阴囊和阴茎，雌性动物有阴道口四、动物的标记 苦味酸 80%~90%酒精饱和溶液〔黄色〕 ，标出属于自己的编号 小鼠的短期标记法：【注意事项 】1、实验人员要有精神准备：掌握方法，胆大心细，做好防护2、动物兴奋的时候不要抓取，待其安静下来3、根据受试动物的给药部位或采血方法的不同，事先选择徒手固定还是固定器固定4、固定时把握好力度，过分用力会使小鼠颈椎脱臼或窒息死亡，假设用力过轻头部能反转 过来咬伤实验者的手思考题】1. 在固定实验动物时如何才能快、准、稳？动物实验基本操作二〔给药途径、采血〕【实验目的 】在做动物试验时，为确保给药、采血实验顺利进行，要掌握根据不同的情况进 行动物给药以及采血的正确方法。

实验对象 】SD大鼠〔 180-250g 〕，KM小鼠〔 18-22g 〕，雌雄各半实验器材和药品】, 灌胃针，注射器〔1ml,5ml 〕、器材：鼠笼、大小鼠固定器、方木板、长钉、细绳、防护手套棉球，剪毛剪、手术剪、手术刀、采血管、弯头镊子药品：生理盐水、75％酒精棉球，一次性采血管，一次性EP管【实验步骤 】一、给药途径 1、大、小鼠的灌胃法用左手固定鼠， 右手持灌胃器 ( 安好灌胃针并已吸好药物) ，将灌胃针从鼠的嘴角插入口腔，压迫鼠的头部，使口腔和食管成一直线，轻轻转动针头刺激鼠的吞咽，将灌胃针沿咽后壁慢慢插入食管，如果动物挣扎厉害，退出灌胃针，待动物安静下来，重新插入灌胃针前端到达膈肌水平， 即可慢慢推灌药液，如很通畅，则说明已进入胃内如不通畅，且动物挣扎厉害，须拔出重新操作2、皮下注射左手拇指和食指轻轻提起动物皮肤，右手持注射器，将注射针刺入皮下，假设针头容易摆动则证明针头已在皮下，推送药液， 缓慢拔出注射针，稍微用手指压片刻针刺部位，以防药物外漏3、肌肉注射 选用肌肉发达，无大血管经过的部位，如臀部或股部 〔肌肉注射比皮下和腹腔注射用得较少， 但当给动物注射不溶于水而混悬于油或其他溶剂中的药物时， 常采用肌肉注射〕4、腹腔注射 A 、左手抓取并固定好动物，将腹部朝上。

B、右手持注射器将针头在下腹部腹白线稍左或偏右的位置，从下腹部朝头方向几乎平行的刺入皮下，进针 3-5mmC、再使针头与皮肤呈 45° 角斜穿过腹肌，当针尖穿过腹肌进入腹腔时，有落空感，然后固定针头，保持针尖不动，回抽，无回血，无肠液、尿液，便可缓缓推入药液5、静脉注射〔尾静脉注射〕 A 、大、小鼠尾静脉共有3 根 ( 左、中、右 ) ，一般常选用两侧的静脉注射前，先把动物固定在暴露尾部的鼠尾固定器内( 可用烧杯、铁丝罩或粗试管等物代替 ).B 、拔去尾部静脉走向的毛，用 75％酒精棉球反复擦拭鼠尾，以到达消毒、血管扩张及软化表皮角质的目的 C、尽量从静脉的远心端刺入血管， 回一下血，将药液缓慢注入D、注射完毕，用棉球压住针眼，拔去针头，继续压迫数分钟二、采血1、心脏采血 将动物仰卧固定在鼠板上，剪去胸前区部位的被毛，消毒在左侧第 3-4肋间， 用左手食指摸到心搏处， 右手持注射器选择心搏最强处穿刺当针穿刺入心脏时，血液由于心脏搏动的力量自动进入注射器 如不需保留动物存活时， 也可麻醉后切开动物胸膛，直接用注射器刺入心脏内采血，也可剪破心脏直接用注射器或吸管吸血2、摘眼球采血 用左手抓住动物颈部皮肤，并将动物轻压在实验台上，稍微侧卧，左手拇指尽量将动物眼周围皮肤往眼后压， 使动物眼球突出并充血， 用弯头镊子迅速摘除眼球， 眼眶内很快流出血液。

3、眶静脉丛〔窦〕采血 将动物麻醉，采用侧眼向上固定体位，用左手拇指和食指从背部较紧的握住大〔小〕鼠颈部取血时，左手拇指及食指轻轻压迫动物的颈部两侧，是头部静脉血液回流困难，眼球充分外突，眶静脉丛充血注意事项 】1、掌握方法，胆大心细，做好防护2、常用灌胃量：小鼠： 0.2 ～1ml, 大鼠 1～4ml 3、摘取眼球采血法一般可取约为小鼠体重 4-5%的血液量思考题】1. 如何熟练掌握大小鼠的给药途径和采血方法？动物实验基本操作三〔 安乐死 〕【实验目的 】在科学应用和教学实验中，因实验终结、研究所需提供血液或其他组织脏器、不适合繁殖或者是当动物的疼痛与窘迫程度超过预期等情况下，需要我们以人道的方式使动物死亡，使动物在最低程度的疼痛、恐惧， 并在最短的时间内失去知觉和痛觉实验对象 】KM小鼠，雌雄各半，体重 18-22g 实验器材和药品 】器材：鼠笼、大小鼠固定器、注射器〔头镊子、烧杯 100ml、方木板1ml〕、棉球，剪毛剪、手术剪、手术刀、采血管、弯药品：吸入性麻醉剂、注射型麻醉剂、 75％酒精棉球【实验步骤】1、 颈椎脱臼法用拇指和食指用力往下按住鼠头，另一只手抓住鼠尾〔鼠尾根部〕，用力往后上方一拉，使颈椎脱臼，造成脊髓与脑髓断离，动物立即死亡。

2、放血法 麻醉动物后，将动物股、颈动脉、静脉全切断，血液立即喷出用一块湿纱布不断擦去股动脉切周围处的血液和血凝块， 同时不断的用自来水冲洗流血， 使股动脉切口处保持畅通，动物 3～5 分钟内即可致死3、药物致死法A、药物吸入 药物吸入是将有毒气体或挥发性麻醉剂，被动物经呼吸道吸入体内而致死，将 KM小鼠放入含有乙醚的密封烧杯中， 3-5 分钟后可死亡B、药物注射 将药物〔腹腔注射硫酸镁〕通过注射的方式注入动物体内，使动物死亡【注意事项】1、实验人员要有精神准备：掌握方法，胆大心细，做好防护、克服心理紧张等因素【思考题】1. 安乐死的意义是什么？实验二 家兔的气管及动脉插管实验目的1. 学习捉拿家兔的正确方法和固定2. 掌握常用手术器械的正确使用方法3. 学 习 动 物 实 验 的 基 本操 作 技 术 ， 包 括 麻 醉 、切 口 与 止 血 、 气 管 插 管术 、 颈 动 脉插管术实验对象健康家兔, 雌雄均可, 体重 2.0 ～ 2.5Kg 实验内容1. 家兔的捉拿、麻醉与固定2. 颈总动脉、神经等的别离技术3. 气管插管4. 动脉插管器材与药品 器材：兔手术台、哺乳类动物手术器械一套、三通、动脉夹、动脉插管、气管插管、纱布、棉线、注射器、绑腿带、污物杯。

20%氨基甲酸乙酯溶液( 乌拉坦，4-5ml/kg体重，麻醉用) 步骤和方法一、家兔的捉拿与称重1、家兔的捉拿： 右手抓住家兔颈背部皮肤，轻轻将家兔提起，迅速以左手托住其臀部，使家兔体重主要落左掌心上，以免损伤动物颈部注意点：家 兔一 般不咬 人，但 脚爪 锐利， 在挣 扎易抓 伤捕 捉者， 所以 捕捉时 要特 别注意其四肢2、家兔的称重： 将家兔放在婴儿秤上，待家兔安静的时候观察体重并记录注意点：(1) 调零 (2) 切勿使劲按压称面二、家兔的麻醉1、麻醉药的注射如图 1：助 手 的 一 侧 上 肢 弯 曲 与同 侧 的 躯 干 夹 住 家 兔 的后 半 部 位 ， 同 时 该 侧 的手 托 住 家 兔的 腹 部 ， 另 一 只 向 上 抓住 家 兔 的 颈 背 部 ， 充 分暴 露 耳 背 外 缘 耳 缘 静 脉 实 验 者 的左 食 指 、 中 指 轻 夹 耳 根部 使 静 脉 充 盈 ， 从 远 心端 以 30 ℃ 角 度 进 针 刺 入静 脉 后 顺 血管平行方向深入 1cm，左手拇指、食指在刺入部位将针头与兔耳固定，即可注入麻醉药2、麻醉效果判定：可以通过观察动物呼吸平稳深慢、角膜反射迟钝或消失、肢体 肌肉松弛、皮肤夹捏反射消失四方面来判定是否到达理想的麻醉效果三、家兔的气管与动脉插管 1、仰卧固定： 头部用一根粗棉线拉住兔的两只门齿后栓在兔板的铁柱或固定于钩上 。

两 前 肢 平 直 放 在 胸腰 部 两 侧 , 用 粗 棉 绳 的一 端 缚 扎 腕 关 节 以 上 部位 , 缚 绳 从 背 后 左 右 交 叉 穿 过 , 压 在 对 侧 前 肢 的 前 臂 上 , 再 紧 扎 于 兔 板 两 侧 的 木 钩 上 , 两 后 肢 左右分开 , 缚绳扎踝关节以上部位 图 22、气管插管操作要点, 另一端分别固定于兔板后两侧的木钩上，如下列1）用手术刀时，先用手或器械使两侧组织牵拉紧张情况下，以刀刃作垂直的轻巧 的切开，不要作刮削的动作2）气管插管术操作要点〔〕 ：①颈部正中切开皮肤，钝性别离暴露气管、穿线备用②于气管中段第三或第四软骨环上向头端作一纵向倒“ T” 形切口③将气管导管由切口向胸部方向插入气管腔内④在气管软骨环之间进行结扎，并将棉线 固定于插管分叉处3、动脉插管操作要点 ①于气管一侧小心别离颈总动脉约 3cm 穿两线备用②远心端结扎、近心端用动脉夹夹紧③用眼科剪与血管呈45℃的角度从远心端开始在向心一侧剪开管壁的1/3 ④插管前导管和压力换能器的肝素化⑤插管后结扎固定注意事项1、麻醉动物时, 注射速度先快后慢, 边注射边观察动物麻醉指征。

如麻醉过浅, 动物挣扎时可适量追加麻醉药, 切忌麻醉过深引起家兔死亡2、手术过程。