GMP—分析方法验证.ppt

cGMP系列—分析方法验证 （Analytical Method Validation) 伍蔚萍 2010.10.10主 要 内 容一. 法规对分析方法验证的要求 二. 分析方法验证定义和目的 三. 分析方法分类 四. 标准分析方法验证/确认 五. 分析方法验证类别和验证内容 六. 常见典型的验证参数/项目 七. 分析方法验证的程序 八. 方法再验证 九. 分析方法验证方案内容 十. 参考文献一. 法规对分析方法验证的要求（一）中国法规【注：以下摘自《2009GMP征求意见稿》】第七章 确认和验证第一百四十八条 企业的厂房、设施、设备和检验仪器应经过确认和验证，应采用经过验证的生产工艺、操作规程和检验方法进行生产、操作和检验，并保持持续的验证状态一. 法规对分析方法验证的要求（一）中国法规第十章：质量控制与质量保证第二百三十六条： 检验2.符合下列情形之一的，应对检验方法进性验证：A. 采用新的检验方法；B. 检验方法需要变更的；C. 采用《中华人民共和国药典》未收载的方法；D. 法规规定的其他需要验证的检验方法；3.对不需要进行验证的检验方法，企业应进行方法 确认，以确保检验数据准确、可靠。

一. 法规对分析方法验证的要求（二）欧盟GMP的额外要求12.82 应在分析仪器/设备完成确认后，再着手 分析方法的验证12.83 对已验证分析方法的任何修改均应有完 整的记录，这类记录应包括修改的理由和充分 的数据，以证实经修改的方法与规定的方法同 样准确、可靠一. 法规对分析方法验证的要求（三）ICH指南关于分析方法验证部分内容见ICH Q2 A 、Q2B, 这次培训主要也是根据ICH这个指南为依据， 具体内容见后面章节四）其他法规文献v《中国药典05版》附录ⅪⅩ A 药品质量标准分析方 法验证指导原则vUSP Validation of compendial method二.分析方法验证定义和目的v定义：是指确保某分析方法得出的结果可以持续地 准确反映所测产品特性的书面证明v目的：是为了证明该分析方法与其预期目的的相适 应ICH）通俗来说，验证目的是判断采用的分析方法是否科 学、合理，是否能有效控制药品的内在质量三.分析方法分类v标准分析方法：指法定分析方法，包括各国 现行药典或其他公认的标准参考资料中的方 法v非标准分析方法：新建立的分析方法或修改 了的标准分析方法都属于非标准分析方法。

四. 标准分析方法验证/确认v标准分析方法一般不需要验证方法的准确性和 可靠性，但在实际使用条件下方法的适应性v两个要求：实验室必须满足标准方法规定性能 指标；标准分析方法验证的数据必须充分满足 实验室测定要求v对标准方法进行评价，以确定需要进行验证的 程度四. 标准分析方法验证/确认v对标准分析方法验证有三种选择： A.不需要验证：用户的仪器、人员、试剂和环境条件 证明可以满足方法规定的分析要求，则只需规定和 执行系统适应性试验即可[注：具体要求可参见 USP Verification of compendial procedures 药典 分析方法确认 ] 方法无须再验证 B.部分验证：一些临界项目如杂质检查的定量限和检 测限； C.完全验证：化合物类型（晶型）、辅料、仪器类型 、存放地点和环境条件与药典标准有差异，则需要 做全验证注：具体要求可参见USP Validation of compendial procedures 药典分析方法验证 ）四. 标准分析方法验证/确认vUSP Verification of Compendial Procedures 药典分析方法确认 v目的：提供对药典分析方法确认的信息，这些方法 是第一次执行，使用适当的人员、设备、试剂，来 生成可接受的结果。

而不是为了对已经成功确立的 实验室规程/方法进行追溯操作v说明：（1）药典分析方法的使用者无须在初次使用药典方 法时对方法进行验证，但方法在实际使用条件下的 系统适应性的数据应当以文件形式记录2）一些常规的药典测试方法无须确认:如干燥失重 、炽灼残渣、酸度、pH测定等四. 标准分析方法验证/确认vUSP Verification of Compendial Procedures 药典分析方法确认v说明： （3）本规程不适用于微生物测试方法 （4）如果药典方法确认不成功，并且USP员工 的协助也未能解决问题，则可推断此方法或许 并不适合在此实验室进行该供试品检测因此 须当按照药典要求重新开发替代方法进行验证 四. 标准分析方法验证/确认vUSP Verification of Compendial Procedures 药典分析方法确认 v不同方法类型的确认要求（仅列出部分测试方 法） （1）鉴别试验：专属性或许需要做（对IR、 UV);专属性须做（HPLC) （2）纯度测试：有关物质测试：专属性、LOQ 精密度须做 （3）含量测试：专属性和精密度须做，准确度 或许需要做五.分析验证的类别和验证内容（一） ICH Q2对验证分析方法分类及对应 验证项目列表v 列出以下常见的四种类型：类别Ⅰ：鉴别试验 类别Ⅱ：杂质的定量试验类别Ⅲ：杂质控制的限度试验类别Ⅳ：原料药或制剂中活性成分以及制剂中选定组分的定量试验五. 验证的方法类型与验证内容（一）ICH 方法类别及验证内容项目 类别I类别Ⅱ类别Ⅲ 类别Ⅳ鉴别杂质定量杂质限度含量/效价/溶出度准确度 -+-+ 精密度重复性-+-+中间精密度- + ①- + ①专属性 ②++++检测限- - ③+- 定量限-+-- 线性-+-+ 范围-+-+五. 验证的方法类型与验证内容v注意事项： （1） “-”表示 该项目通常不需要评价“+”表示该项目通常需评价 （2）①假如已评价重现性，可不需再评价中间精密度② 缺乏专属性的分析方法，应由其他分析方法来作补充 。

③有些情况下需要 （3）表中没有列出耐用性（Robustness),但在分析方法研究 的适当阶段或特殊要求是应予以考虑进行验证 （4）效价表达1：指某一物质引起生物反应的功效单位,可用理化方法检测,也可用生物检测方法测定表达2：生物制品活性（数量）高低的标志，通常采用生物学方法测定 五. 验证的方法类型与验证内容（二）USP对验证方法的分类及对应的验证项目 列表v方法分类：类别Ⅰ：原料药或制剂中活性成分以及制剂中选定组分的定量试验类别Ⅱ：对制剂或药品中杂质或降解杂质进行测定的方法，包括杂质的定量测定和限度测定类别Ⅲ：对一些特定性能如溶出度、药物释放度测测定方法类别Ⅳ：鉴别试验五. 验证的方法类型与验证内容(二）USP方法类别及验证内容项目类别Ⅰ 类别Ⅱ类别Ⅲ 类别Ⅳ含量测试杂质定量杂质限度特性测试 鉴别 准确度 YesYesMaybeMaybeNo精密度 YesYesNoYesNo专属性 YesYesYesMaybeYesLOD NoNoYesMaybeNoLOQ NoYesNoMaybeNo线性 YesYesNoMaybeNo范围 YesYesMaybeMaybeNo六. 常见典型的验证参数/项目（一）专属性（Specificity)v定义：是指在其他成分（如杂质、降解产物 、辅料等）可能存在的情况下，采用的方法 能准确测定出被测物的特性，能反映该分析 方法在有共存物时对供试物准确而不受干扰 的测定能力。

六. 常见典型的验证参数/项目v专属性测定v鉴别反应：能与可能共存的物质或结构相似合物区分v含量测定和杂质检查 （1）色谱法和其他分离方法（查看两个最接近峰分离度来证明 其专属性）（2）可以获得杂质：对含量测定来说，专属性应提供被分析物 在杂质和或赋形剂存在时能被识别的证明实际操作中可以 在纯物质（原料或制剂）中加入一定量的杂质或辅料，与未 知杂质或辅料的样品测定结果相比较，以证明其含量测定结 果不受这些物质的影响对杂质检查来说，通过在原料药或制剂中加入一定量的杂质 ，证明各杂质能逐个分离，并也能与样品中其他组分分离六. 常见典型的验证参数/项目v专属性测定 （3）无法获得杂质：杂质或降解物的对照品无 法获得，专属性可以通过将一定量的杂质或降 解产物的样品测定结果与另一种成熟的方法测 定结果比较，如药典方法或经论证的其他方法 进行比较证实必要时，进行强力破坏性试验 对样品进行测定4）DAD峰纯度检查六. 常见典型的验证参数/项目（二） 准确度（Accuracy)v 定义：是指用该方法测定的结果与真实值或 参考值接近的程度注:（1）结果一般用回收率（%）表示2）准确度应在分析方法规定的范围内建立。

六. 常见典型的验证参数/项目v准确度测定（1）含量测定：对原料药来说， 可采用已知纯度的对照品或 样品进行测定；也可以采用将测定结果与另一种成熟的分析 方法的结果比较而得；也可由线性数据结果推算2）杂质定量测定：A.向原料药或制剂中加入已知量的杂质测定B.若无杂质工作对照品，可考虑与其他检测方法的测定结果 比较3）准确度可接受范围应根据方法类型、测定的浓度范围以及方法本身的要求来确定主成分含量：98~102%，杂质一般为80~120%之间 六. 常见典型的验证参数/项目（三）精密度（Precision)v定义：是指在规定的测试条件下，同一个均匀样品，经过多次取样测定所得一系列结果之间的接近程度v精密度一般用偏差、标准偏差（SD）或相对标准偏 差（RSD）来表示；v精密度可从重复性、中间精密度，重现性三个层次 考虑六. 常见典型的验证参数/项目3.1 重复性（Repeatability)定义：是在相同操作条件下，由一个分析人 员在较短时间间隔内连续测定所得结果的精 密度，也成为间隙测量精密度（Intra-assay precision)v 不同溶液制备六. 常见典型的验证参数/项目v重复性测定 （1）用100%的测试浓度至少6次测定结果进行评价。

（2）或3个不同浓度（如80%、100%、120%）/每个 浓度重复测定3次，即至少9次测定结果来评价 （3）重复性结果用 RSD来评价 （4）RSD范围应根据方法的类型、测定的浓度范围及 方法本身的要求来确定六. 常见典型的验证参数/项目3.2 中间精密度（Intermediate precision)v 定义：是指同一实验室内部条件改变，如不 同日期、不同分析人员或用不同仪器测定结 果的精密度v变动因素有：不同日期，不同分析人员、不 同设备六. 常见典型的验证参数/项目v中间精密度测定 （1）变动因素如不同日期、不同分析人员、不 同设备可以组合设计，不必逐个考虑每个因 素 （2）结果可采用SD或RSD来衡量结果之间的而差异（我部门一般采用）；也可采用t-检验和F-检验来对结果进行评价六. 常见典型的验证参数/项目3.3 重现性（Reproducibility)v定义：是指不同实验室之间测定结果的精密 度，也称实验室间精密度v当分析方法需要标准化时，如收载到药典中 的方法，则应考虑重现性六. 常见典型的验证参数/项目（四）检测限 （Limit of detection,LOD)v定义：是指在某一分析方法条件下，样品中被测物 能被检测出的最低量。

v说明： （1）检测限是一种限度试验的参数，用以表示测量 方法在所述条件下对样品中被分析物的最低检出量 ，但不需要准确定量，只需指出高于或低于该规定 浓度即可 （2）通常用检测限浓度除以样品浓度来表示结果 （%或ppm）六. 常见典型的验证参数/项目v检测限测定 （1）直观评价法直观评价法可以用于非仪器分析方法，也可以用于 仪器分析方法一般比色法、TLC等可用此法检测限度的测定是通过对一系列已知浓度分析物的 样品进行分析，并以准确地测得被分析物的最小量 来建立2）信噪比法该方法仅适用于出现基线噪音的分析方法，如 HPLC,G。