功能性食品的设计方案--食科1102班.doc

功能性食品的设计方案：一.设计题目：增强人体免疫力——香菇（香菇多糖）二. 香菇多糖提取方案：原理：香菇多糖，是从优质香菇子实体中提取的有效活性成分，经热水提取的香菇多糖可调节人休内有免疫功能的T细胞活性，可降低甲基胆蒽诱发肿瘤的能力，从而提高人体的免疫能力实验方法1． 提取 将香菇洗净后除根部后切除根部，菌伞切成小块，放入真空干燥箱（低温）烘干，然后将烘干的香菇小块放在研钵里研磨 用台秤量取香菇粉20g，置于250ml烧杯中，加入100ml蒸馏水，于石棉网上加热至沸，并不断搅拌，煮沸30min后,抽滤滤渣再用100ml蒸馏水溶液煮沸30min,抽率合并两次滤液，然后将合并后的滤液加热浓缩至20ml,溶于100ml95℅乙醇，搅拌并冷却至室温，静置1h将混合液以4000r/min的转速离心10min,得到的沉淀放在真空干燥器中干燥，得到粗香菇多糖2.除蛋白 将得到的粗糖50ml100℃热水溶解，加Sevage 溶液 [氯仿：正丁醇=5：1（V/V）] 10ml,剧烈震动 10mim,静置10min， 4000r/min离心10min,取上层清液，加Sevage 溶液反复操作5次3.纯化 将提取的粗糖置于烧杯中，加蒸馏水50ml溶解，向溶液中加入等体积0.15mol/l的CTAB与硼酸-硼砂缓冲液处理，静置10min, 4000r/min离心得沉淀用2mol/l乙酸溶解，静置10min, 4000r/min离心后去上清液加等体积甲醇，静置24h.三．香菇多糖注射液的用量及毒理学评价1.用法用量：每周两次，每次一瓶2ml（含1mg），加入250ml生理盐水或5%葡萄糖注射液中滴注，或用5%葡萄注射液20ml稀释后静注。

2.毒理学评价：药理作用：香菇多糖是一种具有免疫调节作用的抗肿瘤辅助药物，能促进T、B淋巴细胞增殖，提高NK细胞活性，从而提高人体免疫能力毒理研究重复给药毒性：大鼠、犬和猴重复给药试验中均可见网状内皮细胞肿大和增殖，在大鼠（≥0.03mg/kg，1个月；≥0.01mg/kg，3个月）和猴（≥2mg/kg，6个月）中，可见中小动脉动脉炎，在≥2mg/kg组中，部分犬和猴有胃肠道或膀胱出血及皮疹和溃疡以上病变除大鼠的动脉炎外，仅见于高剂量组，停药后有恢复趋势猴和犬大剂量注射本品可产生泡沫细胞和血管炎，泡沫反应表现过量的多糖进入组织，特别是网状内皮系统遗传毒性：本品致突变试验结果阴性生殖毒性：雌性大鼠妊娠前给予香菇多糖剂量达1.0mg/kg，未见异常雄性大鼠给予0.01mg/kg未见授精异常，但在0.1和1.0mg/kg组可见轻至中度授精异常在大鼠和免器官形成期给药的试验中，最大剂量分别为5.0mg/kg和1.0mg/kg，未见致畸作用，但仔鼠断乳后体重略低大鼠围产期和哺乳期给予香菇多糖果剂量达5.0mg/kg时未见异常四：香菇多糖的功能学评价选取六只生长状况相近的小鼠，分为三组，每组都用电压为0.2伏，电流为4—5微安的电击设备进行处理，使小鼠的胸腺萎缩，免疫功能下降，然后注射一定量的香菇多糖液，观察并测定小鼠的免疫力增强情况，相同试验重复三次。

1.试验项目（动物试验） （1）体重（绝对体重） （2）脏器｜体重比值 胸腺｜体重比值、脾脏｜体重比值 相对比值越大，免疫能力也越强 （3）细胞免疫功能测定：小鼠脾淋巴细胞转化试验、迟发型变态反应 ***小鼠脾淋巴细胞转化试验：1. 采用刀豆蛋白A刺激T淋巴细胞，使母细胞发生增殖反应，活细胞特别是增殖细胞中的线粒体水解酶可将MTT（黄色）分解成蓝紫色结晶2. 721分光光度计570nim测定光密度值0D能反映细胞的增殖情况3. 受试样品组的光密度差值显著高于对照组的光密度差值，结果为阳性，需方差分析迟发型变态反应：1. 二硝基氟苯(DNFB)稀释液与腹壁皮肤蛋白结合成完全蛋白，由此刺激T淋巴细胞增殖成致敏淋巴细胞，4—7天后，再将其涂抹于耳部进行抗原攻击，使局部肿胀，一般在抗原攻击后，24—48小时后达到高峰，其肿胀程度可以反应DTH程度2. 用左右耳的重量之差表示DTH程度，受试样品组的重量差值显著高于对照组的重量差值，判断阳性，数据处理采用方差分析 (4).体液免疫功能测定：抗体生成细胞检测，血清溶血素测定***抗体生成细胞检测：1. 经过绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞悬液与一定量的绵羊红细胞混合，在补体参与下，使分泌抗体的脾细胞周围的绵羊红细胞溶解，形成肉眼可见的空斑。

2. 溶血空斑数反映抗体生成细胞数，用空斑数｜十的六次方 脾细胞数或空斑数｜全脾细胞数表示，受试样品组的空斑数显著高于对照组的空斑数，判断阳性，数据处理采用方差分析血清溶血素测定1. 用绵羊红细胞免疫细胞后，产生抗绵羊红细胞的抗体，利用其凝集绵羊红细胞的程度来检测溶血素的水平2. 血清凝集程度一般分为5级，受试样品组的抗体水平显著高于对照组的抗体水平，判断阳性，数据处理采用方差分析级别显示：++++ 所有红细胞均凝集-----说明凝集能力很强 +++ 肉眼观察到的大部分红细胞凝集----说明凝集能力强++ 部分红细胞凝集---说明凝集能力属于中等强度 + 少部分红细胞凝集-----说明凝集能力弱 - 红细胞完全不凝集（5）单核-巨噬细胞功能测定：小鼠碳廓清试验，小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验***小鼠碳廓清试验1. 从小鼠尾静脉注入稀释的印度墨（100ml|kg）立即计时，在一定范围内，体内碳颗粒被清除速率与血碳浓度呈指函数关系2. 721分光光度计600nm测血液碳酸钠溶液的光密度值，采用吞噬指数表示碳廓清能力，受试样品组的吞噬指数显著高于对照组的吞噬指数，判定阳性，数据处理采用方差分析。

吞噬指数@=（体重 ｜ 肝+脾的重量）×k的三分之一次方 ***小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验1. 滴片法：巨噬细胞对光滑表面有粘附的特性，将含有巨噬细胞的腹腔液滴在载玻片上，加入鸡红细胞，孵育一定时间后，冲洗掉未粘附的细胞，固定染色，显微镜计数巨噬细胞数显示吞噬细胞率和吞噬指数2. 721分光光度计600nm测血液碳酸钠溶液的光密度值，采用吞噬指数表示小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力，受试样品组的吞噬指数显著高于对照组的吞噬指数，判定阳性，数据处理采用方差分析 （六）NK细胞活性测定1. 乳酸脱氢酶测定法：活碳含有的乳酸脱氢酶不能透过碳膜，受到NK杀伤后，乳酸脱氢酶释放到碳外，可使乳酸锂脱氢，进而使NAD还原成NADH,NADH再经递氢体PMS还原INT成紫红色化合物2.在酶标仪上490nm比色测定光密度值，根据公式计算NK细胞活性﹪=【（反应孔0D—自然释放孔0D）｜ （最大释放孔0D —自然释放孔0D）】×100%，受试样品组的NK细胞活性显著高于对照组的NK细胞活性，判定阳性，数据处理采用方差分析2】试验原则：1. 所有项目均为必测项目2. 采用正常或免疫力低下的模型动物进行实验3】结果判定测定项目2---5的结果阳性或任一试验的两个剂量组的结果阳性及测定项目6的一个以上剂量组为阳性，则可判定该受试样品具有免疫调节作用。

五．适宜人群全体人群六．自我评价： 转眼间，一学期的功能性食品课程已经结束了，回想这一学期的表现，总结如下： 我仍然清楚的记得第一节课，老师给我们进行的思想教育，课后我也自己思考了好多，明白自己为什么会迷茫，会找不到方向，最主要的原因是缺乏动力和意志力 因此，以后的每节课，我都会坐在第一排，认真听讲，不把这堂课当做考查课，而是想着多汲取点知识对于老师上课提出的问题，我也能认真思考，积级回答，几乎没有开过小差，保证了课堂效率，但是课后疏于巩固，在以后的学习中我会特别注意这一点的 在做实验的环节中，我每次都会按时到，严格按照老师的要求，积极主动的投入实验中，并就实验中发现的问题，和同学讨论，感觉收获颇丰 这次的功能性食品设计作业，我采用了香菇为原料，设计了有关提高机体免疫力的功能食品，在设计过程中，我查阅了有关图书，翻阅了上课做的笔记，就自己的思路设计了以上内容 就本学期的表现而言，我觉得首先我学习的态度没有问题，学习方法也在逐步完善，所以我给自己的分数是93，请老师支持我，谢谢！ 。