反相高效液相色谱2二极管阵列检测同时测定去痛片中4组分的含量.pdf

反相高效液相色谱 2二极管阵列检测同时测定去痛片中 4 组分的含量刘道杰 3 　王　霞 孙吉令(聊城师范学院化学系 ,聊城 252059) (山东省药品检验所 ,济南 250012)摘 　要 　 建立了一种同时测定去痛片中 4 组分的含量的反相高效液相色谱法采用 YWG C18柱 ,以甲醇 2磷酸二氢钠 (35∶ 65)为流动相 ,流速为 1. 0 mLPmin ,用二极管阵列检测器检测 ,检测波长为 214 nm该方法简便快捷 ,线性范围广 ,结果准确可靠 ,用于实际样品的测定 ,结果满意关键词 　 反相高效液相色谱 2二极管阵列检测法 ,去痛片 ,氨基比林 ,非那西丁 ,苯巴比妥 ,咖啡因2001210222 收稿 ;2002203215 接受1 　引　　言去痛片是一种常用的解热 、镇痛、抗风湿药按国家基本药物标准 ,每片含氨基比林 0. 15g ,非那西丁 0. 15 g ,咖啡因 0. 05 g ,苯巴比妥 0. 015 g卫生部药品标准 1 对这 4 种成分采用化学反应方法进行鉴别 ,对咖啡因的鉴别尚需提取、蒸干等 ,方法繁琐、费时 ,反应不明显有报道用薄层色谱法同时鉴别氨基比林、非那西丁、咖啡因与扑尔敏 2 ,也有用高效液相色谱法同时测定氨基比林、非那西丁和咖啡因 3 。

本文探索了用高效液相色谱法同时测定氨基比林、苯巴比妥、非那西丁及咖啡因的实验条件 ,并应用于去痛片中这 4 种组分含量的同时测定结果表明 ,本法简便快捷 ,结果准确可靠 ,可用于此类药物中各组分的含量测定2 　实验部分2. 1 　主要仪器及试剂HP1100 高效液相色谱仪系统 (包括真空脱气机 ,四元泵 ,二极管阵列检测器 , Rheodyne 7725 定量进样阀以及液相色谱系统 HP 化学工作站 ) 标样 :氨基比林、苯巴比妥、非那西丁、咖啡因对照品 (山东省新华制药厂 ) ,符合国家药品检定标准分别准确称取 50 mg 非那西丁、氨基比林 , 25 mg 咖啡因 ,30mg 苯巴比妥 , 用 1∶ 1 的乙醇 2水溶液溶解后 ,定容至 50 mL ,于 4 ℃保存实验时按需要稀释去痛片为市售品 ,甲醇为高效液相色谱专用试剂 ,乙醇 ,磷酸二氢钠为分析纯 ;水为重蒸水2. 2 　色谱分析条件色谱柱 : YWG C18 (10μ m ,200 mm × 4. 6 mm) ;流动相 :甲醇 20. 05 molPmL 磷酸二氢钠 (pH 2. 8) (35∶65) ;流速 :1. 0 mlPmin ;检测波长 :214 nm ;柱温 :室温 ;进样量 :20μ L。

2. 3 　实验方法取适量的氨基比林贮备液 ,以 1∶ 1 的乙醇 2水为溶剂 ,依次配制浓度为 0. 1 , 0. 2 , 0. 3 , 0. 4 , 0. 5 gPL的标准溶液 ;同样 ,分别配制苯巴比妥、咖啡因标准溶液 ,浓度为 0. 02 , 0. 04 , 0. 06 , 0. 08 , 0. 1 gPL ;非那西丁标准溶液 ,浓度为 0. 1 ,0. 2 ,0. 3 ,0. 4 ,0. 5 gPL按上述色谱条件 ,依次分析各标准溶液 ,以峰面积对浓度做图 ,绘制响应值与浓度的关系曲线3 　结果与讨论3. 1 　检测波长的选择 　本文用二极管阵列检测器在 200～ 400 nm 之间进行光谱扫描 ,考虑到苯巴比妥仅在 200～ 220 nm 之第 30 卷2002 年 9 月 　　　　　　　　　　　分析化学 (FENXI HUAXUE) 　研究简报Chinese Journal of Analytical Chemistry第 9 期1106～ 1108间有明显的吸收 ,药品中咖啡因的含量为氨基比林和非那西丁的 13 ,故选择苯巴比妥有吸收且咖啡因吸收较为灵敏的波长处 214 nm 为分析波长。

如果只测氨基比林、非那西丁和咖啡因 ,则可以选择 254 nm为分析波长3. 2 　流动相的选择3. 2. 1 　流动相组成的选择 　 对 0. 02 molPL 磷酸氢二钠 (pH 7. 0)2甲醇和 0. 05 mol/ L 磷酸二氢钠 2甲醇两个流动相体系进行试验 ,结果前者分析时间较长 ,灵敏度低 ,且非那西丁与氨基比林不能很好的分离 ,而后者可以在较短的时间内实现分离为考察甲醇与磷酸二氢钠的比例 ,试验了 18∶ 82、 35∶ 65、 40∶ 60、55∶ 45、 60∶ 40 等几个体系 ,结果综合考虑分离效果以及分析时间 ,选择甲醇 2磷酸二氢钠比为 35∶ 65 的体系为流动相3. 2. 2 　 pH值的影响 　 pH值对这 4 种组分的分离和峰形具有一定的影响 ,试验中尝试通过调节磷酸二氢钠的 pH值来改善峰形 ,实验了 pH 值 5. 0、 4. 0、 3. 0、 3. 2、 3. 4、 2. 8、 2. 6 ,结果 pH 为 2. 8 时分离效果最佳 ,峰形对称性较好3. 3 　回归方程和线性范围按上述条件 ,对各组分的标准溶液依次测定 ,得各组分的线性回归方程及相关系数分别为 :氨基比林 : A = 31986 C + 551. 7 , r = 0. 9984 ;非那西丁 : A = 39780 C - 221. 24 , r = 0. 9997 ;苯巴比妥 : A = 41077 C -145. 46 , r = 0. 9990 ;咖啡因 : A = 93076 C - 115. 22 , r = 0. 9987。

各组分的线性范围分别为 :氨基比林 :0. 06～ 0. 56 gPL ;非那西丁 :0. 052～ 0. 63 gPL ;苯巴比妥 :0. 015～ 0. 22 gPL ;咖啡因 :0. 012～ 0. 3 gPL3. 4 　样品分析结果3. 4. 1 　合成样品的分析结果 　 按配方比例 ,准确称取氨基比林、非那西丁各 30 mg ,咖啡因 10 mg ,苯巴比妥 3 mg ,置于 100 mL 容量瓶中 ,用 1∶ 1 的乙醇 2水稀释并定容按上述色谱条件依次测量 ,各组分回收率及相对标准偏差 ( n = 5)分别为 :氨基比林 :98. 3 % ,1. 98 % ;非那西丁 :101. 1 % ,2. 21 % ;苯巴比妥 :100. 2 % ,3. 40 % ;咖啡因 :103. 4 % ,2. 08 %3. 4. 2 　实际样品的分析结果 　 分别取两个厂家的去痛片各 10 片 ,精密称重 ,计算片剂的单位质量 ,于研钵中研细 ,准确称取适量 (约相当于一片的质量 ) ,加入 50 mL 1∶ 1 的乙醇 2水使其溶解后 ,离心 ,取上层清液 1 mL 于 10 mL 容量瓶中 ,用 1∶ 1 的乙醇 2水稀释定容。

同样是按上述色谱条件进行分析 ,实际样品的分离色谱图如图 1从图中可以看出各组分均得到满意的分离 ,其中分离度较小的苯巴比妥和非那西丁分离度也达到 1. 5图 2 即为三维色谱图图 1 　分离色谱图Fig. 1 　 Chromatogram of separate11 咖啡因 (caffeine) ;21 氨基比林 (aminopyrine) ;31 苯巴比妥 (phenobarbital) ;41 非那西丁 (phenacetin) 图 2 　三维高效液相色谱图Fig. 2 　 Chromatogram of three dimensional image of high performanceliquid chromatography1～ 4 同图 1 (1～ 4 same as in Fig. 1) 实际样品的分析结果和样品精密加入氨基比林、非那西丁各 30 mg ,咖啡因 10 mg ,苯巴比妥 3 mg 的7011第 9 期 刘道杰等 :反相高效液相色谱 2二极管阵列检测同时测定去痛片中 4 组分的含量 　　回收试验结果见表 1 ,表 2表 1 　片剂含量测定结果 (mgP片 )Table 1 　 Assay results of tablets (mgPtablet)厂家Manufactures氨基比林Aminopyrine非那西丁Phenacetin苯巴比妥Phenobarbital咖啡因CaffeineA 148. 8 153. 8 14. 6 51. 4B 149. 6 151. 9 15. 3 51. 7表 2 　回收率试验结果 ( n = 5)Table 2 　 Results of recovery tests ( n = 5)厂家Manufactures氨基比林Aminopyrine回收率 ( %)Recovery RSD ( %)非那西丁Phenacetin回收率 ( %)Recovery RSD ( %)苯巴比妥Phenobarbital回收率 ( %)Recovery RSD ( %)咖啡因Caffeine回收率 ( %)Recovery RSD ( %)A 96. 7 2. 12 102. 4 2. 24 99. 2 3. 44 104. 8 2. 07B 97. 4 2. 06 100. 8 2. 19 102. 8 3. 26 102. 7 2. 094 　结　　论高效液相色谱法与二极管阵列检测器联用 ,可以全程扫描光谱吸收曲线 ,因而可以很好地选择分析波长 ,而且可以同时得到色谱分离与光谱吸收图 ,从而可以在三维空间清晰地看出色谱分离效果。

另外 ,从实验结果可以看出 ,使用二极管阵列检测器还可以大大提高分析的灵敏度 ,准确度和精密度References1 　 The Standard of Medicine in the Department of Health (卫生部药品标准 ) , Chemical Medicines and Preparations (化学药品及制剂 ) . (1st Volume) (第一册 ) . Beijing(北京 ) :People′ s Health Press(人民卫生出版社 ) ,1989 :202 　 Chen Zufen(陈祖芬 ) ,Xiang Daohui (向道慧 ) . Chinese J . Pharm. Anal. (药物分析杂志 ) , 1999 , 19 (2) :1203 　 Huang Yuesheng(黄跃生 ) ,Liu Zhisheng(刘志生 ) ,Lü He (吕 　荷 ) ,Sun Yuqing(孙毓庆 ) . Chinese J . Pharm. Anal. (药物分析杂志 ) , 1992 ,12 (1) :28Simultaneous Determination of Four Components in CommercialAnalgesic Tablets by Reversed Phase High Performance LiquidChromatography2Diode Array DetectorLiu Daojie 3 , Wang Xia( Department of Chemistry ,Liaocheng Teachers College , Liaocheng 252059)Sun Jiling( Shandong Provincial Institute for Drug Control , Jinan 250012)Abstract 　 A reversed phase high performance liquid chromatographic method was proposed for the simultaneousdetermination of the aminopyrine , phenobarbital , phenacetin and caffeine in analgesic tablets. In this method , aYWG C18 co。