大黄中药材及其醇水提取物中大黄素成分分析标准物质研究.docx

大黄中药材及其醇、水提取物中大黄素成分分析标准物质研究［摘要］采用“单一化学成分一复杂成分体系”的量值传递技术路线, 完成了大黄、大黄95%乙醇提取物、大黄水提取物中大黄素成分分析系列 标准物质的研制使用大黄索国家一级纯度标准物质进行量值传递，利用 高效液相色谱协作标定法，确定了不同基质中大黄素成分的标准值；建立 不确定度评估数学模型并计算各不确定度分量，最终获得不确定度值完 成大黄、人黄95%乙醇提取物、人黄水提取物中大黄素成分分析标准物质, 其大黄素成分分别为 0. 40%±0・ 03%, 1. 15%土0. 18%, 0. 16%±0. 08% (k=2, P二0. 95)o建立的量值传递技术路线成功解决了中药复杂体系中化学成分 量值溯源的技术难题，研制的标准物质属国家级计量有证标准物质，为人 黄中药材及其提取物中大黄素的定量质量控制提供了准确可靠的标准物 质、物质标准、标准方法[关键词]大黄；大黄95%乙醇提取物；大黄水提取物；大黄索；标准 物质；不确定度[Abstract]The certified reference materials (CRMs) of emodin in rhubarb and its alcohol extract, water extract were developed by using quantity transfer technology from single chemical composition to the complex systems. The CRM of emodin was used forquantity transfer, and high performance liquid chromatography(IIPLC) method was used to determine the contents of emodin in different matrix composition. By establishing mathematical model and calculating the parts of uncertainty, the uncertainty values were final1y gotten. CRMs of emodin in rhubarb, alcohol extract and water extract were accomplished・ The content values of emodin were 0. 40% ±0. 03%, 1. 15%±0. 18%, 0. 16%±0. 08% (k二2, P二0. 95), respective!y. The established method for quantity transfer has successfully solved the technical problems that the value of active ingredient of traditional Chinese medicine can' t be traced to ST units・ The series of CRMs are assigned as grade primary reference materials, which are useful for quality control of the emodin content, al so provide the accurate and reliable CRM, materials standard and standard methods.[Key words]rhubarb； alcohol extract； water extract； emodin； CRM； uncertainty中药历史悠久，其用药特点是多成分复杂体系协同起效，因此如何进 行中药的质量控制成为研究重点与难点，这也成为了制约中药国际化与现 代化进程的主要原因。

在中药的质量控制中，有效成分含量的控制是关键, 用于含量测定的中药对照品的标准化则成为关键中的关键[1-2] o通常情 况下，有效成分在中药材中的含量较低，通过水煎、醇提等提取方式可以 实现有效成分的富集，但有效成分在水提取物和醇提取物中的含量差异显 著因此对于不同中药产品的质量控制，若均以有效成分的化学纯品进行 参照，难免由于含量值数量级的差异而引起较大测量误差与基体误差国际对药品质量控制趋势己从仅提供药物的有效成分含量值，发展到 需要提供药物有效成分的标准值和不确定度值，即将药品的一般标准提升 为计量标准，以保证药品质量控制的量值溯源性和准确性［3］因此，能 够符合国际计量标准并能用于国际交流的中药材相关标准物质将成为中 药质量控制的趋势所向木文首次完成了大黄、人黄95%乙醇提取物、大黄水提取物中大黄素 成分分析国家级标准物质的研制，确定了药材、醇提物、水提物3种不同 基质中大黄素成分含量的标准值与不确定度值人黄不同基质中有效成分 含量的系列标准物质研制，使相关中药药品检测更加便捷、准确、可靠， 同时也为中药标准品的标准化探索提供了可借鉴的数据与经验1材料高效液相色谱仪：美国Agilent 1200型,DAD检测器，Agilent chemstation I作站；分析用天平:XS105 型，Mettler,感量 0. 01 mg (0 WmW5 g, 0. Olmg； 5WniW20 g, 0. 02 mg)；三用电热恒温水箱:SHH. W21.420, 北京精科华瑞仪器有限公司。

国家一级标准物质：大黄素化学纯度标准物质，证书编号GBW09513, 纯度标准值及不确定度值：99.54%±0. 18% (k=2, P=0. 95) ［5］(经中国 医学科学院药物研究所研制)大黄中药材，甘肃产(经中国医学科学院药物研究所马林教授鉴定) 样品，质量检查符合2010年版《中国药典》规定要求［6］大黄中药材经 除尘、粉碎、并过50目筛，备用精密称取1 g样品置于棕色安甑瓶密封包装，共计完成了 500支最小包装1 g量的大黄中药材成分分析标准物 质候选物样品的制备工作 大黄醇提取物，取大黄中药材，以5倍量95%乙醇作为提取溶剂，经加热回流提取3次，合并提取液，减压浓缩 得浸膏，浸膏真空干燥，粉碎过40目筛，再经温度70 °C,压力-0. 09 MPa 下真空T•燥，得大黄95%乙醇提取物，备用精密称取100吨样品置于棕 色安咅瓦瓶密封包装，共计完成了 500支最小包装100 mg量的大黄95%乙醇 提取物成分分析标准物质候选物样品的制备工作大黄水提取物，取大黄中药材，粉碎，加入6倍量纯净水，煎煮lh, 过滤，得提取液，将药渣再加入与提取液等体积的纯净水，煎煮1 h,过 滤，再次向药渣中加入与提取液等体积纯净水，继续煎煮1 h,过滤。

合 并上述3次提取液，水浴挥干后，75 °C真空干燥，得大黄水提取物，备 用精密称取100 mg样品置于棕色安甑瓶密封包装，共计完成了 500支 最小包装100 mg量的大黄水提取物成分分析标准物质候选物样品的制备 工作甲醇（Fisher Chemical,色谱纯）；磷酸（分析纯，北京化学试剂公 司）；娃哈哈饮用纯净水（杭州娃哈哈集团有限公司）2方法与结果2. 1高效液相色谱法2. 1. 1 色谱条件[7-8]Agilent SB C18 色谱柱 （4.6 mmX250 mm, 5 Mm）；流动相甲醇-0.1%磷酸80 : 20；流速1.0 mL?min-l；柱温30 °C； 进样量10 UL；检测波长254 nm2.1.2溶液制备方法标准储备液制备方法：精密称取人黄素化学纯度标准物质11.08 mg,置于50 mL量瓶中，用色谱级甲醇将样品完全溶解， 并定容至刻度，摇匀，配制成大黄素为220.6 mg?L-l的标准储备液精 密移取 0.1, 0.5, 1.0, 2. 5, 5.0, 10. OmL 分别置于 10 inL 量瓶中，用色谱级甲醇稀释至刻度，获大黄素为2. 2, 11.0, 22. 1, 55.2, 110.3, 220. 6 mg?L-l的标准溶液。

精密称取大黄中大黄索成分分析标准物质样品150 mg＞大黄95%乙醇 提取物中大黄素成分分析标准物质样品30 mg、大黄水提取物中人黄素成 分分析标准物质样30 mg,分别置具塞锥形瓶中，精密加甲醇25 mL （水 提取物为20 mL）,称定质量，加热回流1 h,放冷，再称定质量，用甲醇 补足减失的质量，摇匀，滤过精密量取续滤液5 mL （水提取物为lOmL）, 置烧瓶中，挥去溶剂，加8%盐酸溶液10 mL,超声处理2 min,再加三氯 甲烷10 mL,加热回流1 h,放冷，置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗涤 容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷层，酸液再用三氯甲烷提取3次， 每次10 mL,合并三氯甲烷液，减压回收溶剂至干，残渣加甲醇使溶解， 转移至10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀滤过，取续滤液，即得2. 2方法学考察2. 2.1线性关系考察分别精密移取6种不同浓度分标准溶液10 UL注 入到液相色谱仪，记录色谱图及峰血积色谱峰曲积分别55. 65, 279. 07, 564. 76, 1 387. 77, 2 768. 12, 5 371.02,以峰面积（Y）为纵坐标，进行线性回归，获得回归方程为Y二24.365X+26.858,相关系数r为0. 999 9 （n二6）。

标准曲线实验结果表明，大黄素标准溶液在2.2~220.6mg?L-l线性关系良好2. 2. 2仪器精密度精密吸取浓度为220. 6 mg?L-l的大黄索标准储备液 ImL至10 mL量瓶，用色谱甲醇稀释至刻度采用高效液相色谱法，按照 2.1.1项下色谱条件，重复测定6次，记录色谱图，获得大黄素的峰血积 为 564.25, 564. 87, 566. 85, 568. 46, 567.96, 567. 08,计算 RSD为0. 30%,表明仪器精密度良好2. 2. 3方法精密度精密吸取浓度为220. 6 mg?L-l的大黄索标准储备液 1皿置于10汕量瓶，6份，用色谱甲醇稀释至刻度，采用高效液相色谱 法，按照2.1.1项下色谱条件，各重复进样3次，分别记录色谱图，获得 大黄素的色谱面积均值为 560. 35, 557.10, 568. 95, 566. 63, 564.17, 560. 70,计算RSD为0.61%,表明实验方法精密度良好2. 2. 4标准物质溶液制备方法的精密度分别称取大黄中药材、大黄95% 乙醇提取物、人黄水提取物样品各6份，按照2.1.2项下的溶液制备方法, 按照2. 1.1项下色谱条件进行测定。

大黄中大黄素成质量分数为0. 391%, 0.385%, 0.403%, 0.397%, 0.395%, 0.402%,平均为 0. 395%, RSD 为 1.7%； 大黄95%乙醇提取物中大黄素成分质量分数为1.133%, 1.150%, 1.166%, 1. 154%, 1. 130%, 1. 157%,平均为 1. 148%, RSD 为 1. 2%；大黄水提取物中 大黄素成分质量分数为为 0. 154%, 0.156%, 0.159%, 0. 153%, 0.159%, 0. 159%,平均为0. 156%, RSD为1.7%；表明大黄中药材、大黄95%乙醇提 取物、人黄水提取物系列标准物质溶液制备方法的重现性良好2. 2. 5标准物质溶液的回收率试验分别称取大黄中药材150 nig、大黄 95%乙醇提取物30 mg＞大黄水提取物样品30 ing各6份，分别加入大黄索纯度标准物质作为加标样品，英。