实验室常用试剂缓冲液配制方法一览表.docx

实验常用试剂、缓冲液的配制方法1、1M Tris-HCl □组份浓度 1 M Tris-HCl4. 高温高压灭菌后，室温保存pH7.4，7.6，8.0） □配制量 1L□配置方法 1. 称量 121.1gTris 置于 1L 烧杯中2. 加入约 800mL 的去离子水，充分搅拌溶解3.按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值pH 值浓 HCl7.4约 70mL7.6约 60mL8.0约 42mL4. 将溶解定容至 1L5. 高温高压灭菌后，室温保存注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH 值随温度的变化差很大，温度每升高1°C,溶液的pH值大约降低 0.03 个单位2、 1.5 M Tris-HCl □组份浓度 1.5 M Tris-HCl（pH8.8） □配制量 1L□配置方法1•称取181.7gTris置于1L烧杯中2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解3. 用浓盐酸调 pH 值至 8.84. 将溶液定容至 1L5. 高温高压灭菌后，室温保存注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的 pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1C，溶液的pH值大约 降低 0.03 个单位。

3、 10xTE Buffer □组份浓度 100 mM Tris-HCl，10 mM EDTA （pH 7.4， 7.6， 8.0） □配制量 1L□配置方法1.量取下列溶液，置于1L烧杯中1 M Tris-HCl Buffer（pH7.4， 7.6， 8.0） 100mL500 mM EDTA（pH8.0） 20mL2. 向烧杯中加入约800mL的去离子水，均匀混合3. 将溶液定至1L后，高温高压灭菌4. 室温保存4、 3 M 醋酸钠 □组份浓度 3 M 醋酸钠（pH5.2） □配制量 100mL□配置方法1.称取40.8gNaOAc・3H2O置于100〜200mL烧杯中，加入约 40mL 的去离子水搅拌溶解2. 加入冰乙酸调节pH值至5.23. 加入去离子水将溶液定容至 100mL5、PBS Buffer □组份浓度 137 mM NaCl， 2.7mM KCl， 10 mMNa2HPO4， 2 mM KH2PO4□ 配制量 1L□配置方法1.称量下列试剂，置于1L烧杯中NaCl8 gKCl0.2gNa2HPO41.42 gKH2PO40.27g2. 向烧杯中加入约800 mL的去离子水，充分搅拌溶解。

3. 滴加 HCl 将 pH 值调节至 7.4，然后加入去离子水将溶液定 容至 1L4. 高温高压灭菌后，室温保存注意：上述PBS Buffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中 补充 1mM CaCl2 和 0.5 mM MgCl26、 10 M醋酸铵 □组份浓度10 M醋酸铵□ 配制量 100mL□配置方法1.称量77.1g醋酸铵置于100〜200 mL烧杯中，加 入约30 mL的去离子水搅拌溶解2. 加去离子水将溶液定容至 100mL3. 使用0.22gm滤膜过滤除菌4. 密封瓶口于室温保存注意：醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌7、 Tris- HCl 平衡苯酚 □配置方法1. 使用原料：大多数市售液化苯酚是清亮无色的，无需重蒸馏 便可用于分子生物学实验但有些液化苯酚呈粉红色或黄色，应避 免使用同时也应避免使用结晶苯酚，结晶苯酚必须在160C对其 进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物，这些氧化产物可引起磷酸二酯 键的断裂或导致RNA和DNA的交联等因此，苯酚的质量对DNA、 RNA的提取极为重要，我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物 学实验2. 操作注意：苯酚腐蚀性极强，并可引起严重灼伤，操作时 应戴手套及防护镜等。

所有操作均应在通风橱中进行，与苯酚接触 过的皮肤部位应用大量水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇3. 苯酚平衡：因为在酸性pH条件下DNA分配于有机相，因 此使用苯酚前必须对苯酚进行平衡使其pH值达到7.8以上，苯酚 平衡操作方法如下：①液化苯酚应贮存于-20C，此时的苯酚呈现结晶状态从 冰柜中取出的苯酚首先在室温下放置使其达到室温，然后在68°C 水浴中使苯酚充分溶解② 加入羟基喹啉(8-Quinolinol)至终浓度0.1%该化合物 是一种还原剂、RNA酶的不完全抑制剂及金属离子的弱螯合剂， 同时因其呈黄色有助于方便识别有机相③ 加入等体积的 1M Tris-HCl (pH8.0) ，使用磁力搅拌器搅 拌15 分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相④ 重复操作步骤③⑤ 加入等体积的0.1M Tris-HCl (pH8.0)，使用磁力搅拌器搅拌 15 分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相⑥ 重复操作步骤⑤，稍微残留部分上层水相⑦ 使用 pH 试纸确认有机相的 pH 值大于 7.8⑧ 将苯酚置于棕色玻璃瓶中4°C避光保存8、 苯酚/氯仿/异戊醇 □配置方法1. 说明：从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯/酚/氯仿/异 戊醇(25：24：1)。

氯仿可使蛋白(25 ：24 ：1) 质变性并有 助于液相与有机相的分离，而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现 的气泡2. 配置方法：将 Tris-HCl 平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇 (24： 1)均匀混合后，移入棕色玻璃瓶中4°C保存9、 10%(W/V)SDS □组份浓度 10%(W/V) SDS□配制量 100mL□配置方法1•称量10g高纯度的SDS置于100〜200mL烧杯中， 加入约80mL的去离子水，68C加热溶解2. 滴加数滴浓盐酸调节pH值至7.23. 将溶液定容至100mL后，室温保存10、 2 N NaOH □组份浓度 2N NaOH□配制量 100mL□配置方法1.量取80mL去离子水置于100〜200mL塑料烧杯中(NaOH 溶解过程中大量放热，有可能使玻璃烧杯炸裂)2. 称取 8g NaOH 小心地逐渐加入到烧杯中，边加边搅拌3. 待NaOH完全溶解后，用去离子水将溶液体积定容至100mL4. 将溶液转移至塑料容器中后，室温保存11、 2.5 N HCl □组份浓度 2.5 N HCl□配制量 100mL□配置方法1.在78.4mL的去离子水中加入21.6mL的浓盐酸 (11.6N )，均匀混合。

2. 室温保存12、 5 M NaCl □组份浓度 5 M NaCl□配制量 1L□配置方法1.称取292.2g NaCl置于1L烧杯中，加入约800mL 的去离子水后搅拌溶解2. 加去离子水将溶液定容至1L后，适量分成小份3. 高温高压灭菌后，4°C保存13、 20%(W/V)Glucose □组份浓度 20%(W/V) Glucose□配制量 100mL□配置方法1.称取20g Glucose置于100〜200mL烧杯中，加入约 80mL的去离子水后，搅拌溶解2. 加去离子水将溶液定容至 100mL3. 高温高压灭菌后，4°C保存14、Solution I □组份浓度 25 mM Tris-HCl(pH8.0)， 10mMEDTA， 50mM Glucose(质粒提取用) □配制量 1L□配置方法1.量取下列溶液，置于1L烧杯中1M Tris-HCl (pH8.0)25mL0.5 M EDTA( pH8.0)20mL20%Glucose(1.11M)45mLdH2O910mL2. 高温高压灭菌后，4°C保存3. 使用前每50 mL的Soliution I中加入2mL的 RNase A( 20mg/mL)。

15、Solution II □组份浓度 250mM NaOH， 1%(W/V) SDS(质粒提取用) □配制量 500mL□配置方法1.量取下列溶液置于500mL烧杯中10% SDS 50mL2N NaOH 50mL2. 加灭菌水定容至500mL，充分混匀3. 室温保存此溶液保存时间最好不要超过一个月注意： SDS 易产生气泡，不要剧烈搅拌16、 Solution III □组份浓度 3M KOAc， 5M CH3COOH(质粒提取用) □配制量 500mL□配置方法1.量取下列溶液置于500mL烧杯中KOAc 147gCH3COOH 57.5mL2. 加入300mL去离子水后搅拌溶解3. 加去离子水将溶液定容至 500mL4. 高温高压灭菌后，4°C保存17、 0.5M EDTA □组份浓度 0.5 M EDTA(pH8.0) □配制量 1L□配置方法1.称取186.1g Na2EDTA・2H2O，置于1L烧杯中2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌3. 用 NaOH 调节 pH 值值 8.0(约 20g NaOH)注意：pH值至8.0时，EDTA才能完全溶解4. 加去离子水将溶液定容至 1L。

5. 适量分成小份后，高温高压灭菌6. 室温保存18、 1 M DTT □组份浓度 1 M DTT□配制量 20mL□配置方法1.称取3.09g DTT，加入到50mL塑料离心管内2. 加 20mL 的 0.01 M 的 NaOAc (pH5.2)，溶解 后使用0.22gm滤器过滤除菌3. 适量分成小份后，-20°C保存19、10mM ATP□组份浓度 10mM ATP6.□配制量 20mL□配置方法1.称取121mg Na2ATP・3H2O,加入到50mL塑料离心 管内2. 加 20mL 的 25mM Tris-HCl (pH8.0)，搅拌溶解3. 适量分成小份，-20°C保存分子生物学实验常用培养基的配制方法1、 Ampicillin □组份浓度 100mg/ml Ampicillin( 100mg/ml) □配制量 50mL□配置方法1.称量5g Ampicillin置于50mL离心管中2. 加入40mL灭菌水，充分混合溶解后，定容至50mL3. 用0.22gm滤膜过滤除菌4. 小份分装(ImL/份)后，-20C保存2、 IPTG □组份浓度 24mg/mL IPTG( 24mg/mL) □配制量 50mL配置方法1.称量1.2g IPTG置于50mL离心管中。

2. 加入 40mL 灭菌水，充分混合溶解后，定容至 50mL3. 用0.22gm滤膜过滤除菌4. 小份分装(ImL/份)后，-20C保存3、 X- Gal □组份浓度 20mg/mL X- Gal( 20mg/mL) □配制量 50mL□配置方法1.称取1g X-Gal置于50mL离心管中2.加入40mL DMF (二甲基甲酰胺)，充分混合6、 TB 培养基加入 ImL Ampicillin (100mg/mL)后均匀混合7. 4°C保存□组份浓度 1.2%(W/V)2.4%( W/V)TryptoneYeast Extract0.4%( V/V)17mM72mMGlycerolKH2PO4K2HPO4□ 配制量 1L配制磷酸盐缓冲液(0.17M KH2PO4，0.72M□配置方法 1.K2H。