课程论文多糖酶制剂果树褐变.doc

白灵菇多糖读书报告多糖是来自高等植物、动物细胞膜、微生物细胞中的天然大分子物质，一般 多糖常由一百个以上甚至几千个单糖通过糖苷键连接而成多糖是所有生命有机 体的重要组成部分，并与维持生命所需的多种生理功能有关对多糖的研究，最 早是在20世纪40年代，但自50年代末人们发现真菌多糖具有抗肿瘤活性以后， 尤其是近二十多年来，由于分子生物学、免疫物质的化学研宄与发展以及新药物 资源的寻找与开发，多糖的研究冰受到越来越广泛的重视，相继多次召开了有关 “糖生物学和糖工程”的专题会议，并对多糖来源、提纯、结构分析、生物活性、 产品开发应用等方面做了大量的研究工作，取得了巨大的进展［1］白灵菇(Pleurotus nebrodensis)是白灵侧耳的商品名称，又名白阿魏燕、白阿 魏蘑、阿魏侧耳，属于真菌门、担子菌纲、伞菌目、侧耳科侧耳属［23］，是近几 年发展起来的食用菌新秀之一白灵菇生物活性有效组分食药用真菌多糖的含量 很高；其子实体多糖和液态深层发酵培养过程中产生的真菌多糖入药有消积杀虫 的作用，对腹部肿痛、腹部肿块、癌症等均有显著疗效［4］目前，白灵菇多糖的 药用价值及其应用己为世界各国重视近年来，国内的研究重点己经由白灵菇的 栽培及菌种的驯化［M］转移到白灵菇多糖的提取及活性功能等方面。

笔者依据近 期科研成果，论述了白灵菇多糖的提取、分离纯化、深层发酵及活性功能等方面 的研宂进展1. 白灵菇多糖的提取、分离、纯化及结构鉴定1.1提取与分离多糖是由20多到上万个单糖组成的大分子，在生物体内多糖除以游离状态 存在外，也以结合方式存在结合型多糖有与蛋白质结合在一起的蛋白多糖和与 脂质结合在一起的脂多糖等多糖的提取要根据多糖的存在形式及提取部位不同 而采用不同的提取方法［9］董洪新等［10］以白灵菇干子实体为原料，研允了白灵菇 子实体多糖的提取工艺试验表明，碱提法的多糖得率比水提法提高2.82倍， 提取多糖的最高得率为8.74%;酸浸提法的多糖得率比水提法提高1.38倍；碱提 法得率最高但碱提法所得的多糖溶液粘度太大，过滤困难，且对多糖的立体旋 光活性结构有一定破坏作用，影响其生理活性；酸提法同样可能对多糖成分有一 定破坏作用，且对容器的腐蚀性较人；相比而言水浸提法成本低、方便实用许 金国等［11］采用70C热水浸提法，经95%乙醇沉淀、离心，蔥酮比色法测定白灵 菇干子实体多糖最高得率为6.95%,比董洪新等经过优化的最佳提取温度85C、 提取时间4h、乙醇浓度80%等条件下所得多糖得率5.38%高出0.29倍。

董洪新 等［12］又将热水浸提过的子实体残渣加8倍量3%的三氯乙酸浸提，经浓缩、醇析 沉淀、丙酮洗涤、真空冷冻干燥得酸提水溶性粗多糖PFA总的来看，以上采用 的酸提、碱提、热水浸提等方法虽然都是提取多糖的经典方法，但水浸提法时间 长、效率低，而酸碱法又极易导致多糖的立体结构破坏及生物活性改变，因此， 探索更为高效、经济、可靠的提取方法具有现实意义白灵菇子实体、菌丝体 中除多糖外，还含有一定量的蛋白质、胶质和粗纤维等成分，如能采用有关酶类 对白灵菇菌丝体和子实体进行预处理，将会奋利于其糖类物质的溶出和分离， 从而提高多糖的提取率：或者借助超声波、微波等辅助手段来提高其多糖的提取 率近儿年，陈石良等『131己采用复合酶解法并结合热水浸提，提高了灰树花菌 丝体多糖的提取率，其干菌丝体多糖得率达7.4%陈哲超等［14］采用复合酶解法 提取香菇干子实体多糖，不仅提高Y多糖的得率以及其他有效成分的提取率，而 且改善了糖类的分布胡稳奇等采用盐析法提取香菇、草菇干子实体多糖，在 提高了多糖得率的同时，还降低了生产成木李钟玉等［16］采用超声波法提取灵 芝干子实体多糖，缩短了提取时间45min,提取率比酸浸提对照组高2.12%。

但 是截至FI前，利用复合酶解法、超声波辅助法、盐析法等提取白灵菇多糖的研宂 还少有报道1.2纯化与结构鉴定李永泉等［12］采用Scvag法除去白灵菇菌丝体粗多糖中的蛋白，确定了最佳除杂蛋 白3因素参数:V^:V^ot=2:1, V氯仿:V正丁醇=2:1,抽提时间40min;粗多糖 用离子交换纤维素DEAE-cellulose32柱纯化，然后将所将浓缩液用Sephadex G-100于室温下进一步纯化，最后得多糖纯品，含糖量83.22%采用聚丙烯酰 胺凝胶垂直板电泳法对多糖进行纯度鉴定，再用紫外光谱进一步分析，确定其不 含蛋G质和核酸等杂质最后通过红外光谱和核磁共振分析，确定了多糖HYZH 的单糖组成为卄油、阿拉伯糖、半乳糖、卄露糖和葡萄糖；糖苷键连接方式有1^3 和卜么其中主链是1->3键，侧链是1^6键甘勇等［17］以阿魏菇子实体和菌丝 体为实验材料，采用水浸法提取阿魏菇粗多糖，与李永泉不同的是，苏用CTAB 络合、乙醇沉淀、溶液溶解、透析的方法，对粗多糖进行纯化，紫外光谱分析鉴 定多糖为均一组分，通过凝胶渗透色谱法得子实体多糖数均分子量为141088、 重均分子量为142897,单糖组成为木糖、半乳糖、葡萄糖。

董洪新等［12］采用凝 胶渗透色谱和光散射联用法（GPC-LS）测定丫其酸提所得的白灵菇子实体纯多 糖的分子量，其中数均分子量为1418000、重均分子量为1965000,比甘勇提 取的多糖分子量大近10倍，多糖PF3单糖组成为：鼠李糖、木糖、葡萄糖、半 乳糖和卄露糖综合来看，无论是哪种多糖都含有半乳糖和葡萄糖，但分子量差 别很大；试验原料不同、提取方法不同，得到的多糖种类也不尽相同2. 白灵菇多糖的药用价值2.1.免疫活性功能赵祁等ll8j报道了阿魏菇子实体能有效增强小鼠的体液免疫功能（P<0.05）且有 剂量依赖关系当剂量为25mg/kg时，溶血素含量提高了 67%；剂量为2500mg/kg 时，提高了约120%；剂量为1250mg/kg时，相对于其他剂量小鼠的红细胞C3BR: 花环率明显提高，1C花环率有所下降，说明阿魏菇对红细胞免疫功能刺激的最 佳剂量为1250mg/kgo但阿魏菇对非特异性免疫功能、细胞免疫功能无明显影响 邓春生等采用碳粒廓清试验、淋巴细胞转化试验以及肿瘤坏死因子（TNF）的 诱生及其活性检测试验，观察阿魏侧耳子实体和菌丝体水溶性多糖的免疫活性， 结果表明，阿魏侧耳子实体多糖（剂量为20mg/kg） PFWPi具有非特异性免疫功 能和特异性细胞免疫功能；其菌丝体水溶性粗多糖PFWP2和子实体水溶性纯多 糖PFWPj免疫活性不明显,有可能纯化的PFWP3不是活性级分,也可能是PFWP3 必须和其他级分混合才能表达活性，具体原因有待于研究。

甘勇等ll7j报道了子 实体粗多糖A、菌丝体粗多糖B在巨噬细胞吞噬作用试验、迟发型变态反应试 验、白细胞介素-2（IL-2）的诱生与检测试验中均有显著效果，而由子实体多糖纯 化后所得到的多糖A,免疫活性不显著2.2抗氧化活性功能郑琳等［2Q］研宂了白阿魏侧耳人工栽培子实体在不同条件下提取的各不同组 分对于Fenton反应生成的均具有一定的清除作用对的有效清除说明 白阿魏侧耳体内可能存在着天然抗氧化剂的新资源从白阿魏侧耳水溶性粗多糖 的抗氧化效果来看，热提多糖对*01?和•()"均能有效清除李永泉等［21］报道了白 阿魏菇菌丝体多糖(PNMP)对Fe2++H2O2体系产生的•01?清除效果 比较显著，抑制心比所致的过氧化的发生，保护膜系统免受心!?损伤，防止膜 脂质过氧化的发生，维持膜的流动性，减轻线粒体肿胀和红细胞溶血的发生，维 持正常的生理功能PNMP还对连苯三酚自氧化速率有明显的抑制作用，说明 PNMP其有较强的抗氧化作用2.3抗肿瘤作用和抗肿瘤机制2002年宋旭红等新疆阿魏蘑菇的不冋剂水提取物对肿瘤细胞生长及蛋白 合成产生不同程度的影响研究结果还显示：不同剂量组阿魏蘑菇醇提物对各类 型肿瘤细胞的生长及活体细胞蛋白合成也有不同程度的抑制作用，值得一提的 是，醇提物对正常肝细胞的存活量未见影响，却能促进正常肝细胞蛋白质的合成。

2003年，宋旭红等［23］又进一步研究了新疆阿魏菇提取物对肿瘤细胞P53蛋白表 达的影响，从细胞凋亡角度研究K抗肿瘤机制多糖经过羧甲基化后抗氧化活性 会得到显著提高［24］3. 展望白灵菇是深受市场欢迎的食药用真菌，对苏真菌多糖的研究是今后白灵菇研 宄的重点液态深层发酵是获取大量白灵菇活性多糖的有效途径，因此应更加深 入地研宄白灵菇深层发酵的工艺条件，建立发酵过程动力学模型，为实现其规模 化生产提供可靠的理论依据提高白灵菇多糖的提取率是进行多糖产品开发首要 解决的关键问题，虽然董洪新等人对多糖提取工艺做了比较深入的研宄，但仍存 在提取方式单一、提取率较低、提取吋间长等缺点因此，应结合白灵菇的细胞 结构组成特点，对白灵菇多糖的提取方式和工艺进行进一步的研究，尽可能地提 高多糖得率，减少多糖破坏采用不同的提取方式得到的多糖种类是有差异的， 同一粗多糖纯化得到的纯多糖其功效也不相同［25］因此今后要继续白灵菇多糖 提取分离纯化及活性功能方面的研宂，明确主要活性功能作用的物质基础，探 明白灵菇多糖有效成分活性作用的途径及机理，对多糖的药理药效做进一步的小鼠体内肿瘤模型试验，确定最佳服用方式和服用剂量，为进一步开发新药和功能 性食品奠定基础。

此外，还可以通过生物技术手段，选育出高产多糖的白灵菇菌 株，进一步提高多糖的产量参考文献：[1] 黄芳，蒙义文.活性多糖的研究进展.天然产物研究与开发，1999, 11(5): 90-98[2] 陈忠纯.阿魏侧耳驯化初报.食用菌，1986,(2): 16-17[3] 曹玉清.阿魏侧耳某些生物学特性的初步研究.微生物学通报，1985, 12: 97-101[4] 黄年来.中国大型真菌原色图鉴.北京：中国农业出版社，1998[5] 陈忠纯，吴政声.阿魏侧耳优良菌株KH2的选育.干旱区研究，1994, 11(4): 76-78[6] Durcilene A. Silva,Regina C.M. de Paula. Carboxymethylation of cashew tree exudate polysaccharide. Carbohydrate Polymers，2004, 163-171[7] Tehila Tannin-Spitz，Margalit Bergman. Antioxidant activity of the polysaccharide of the red microalga Porphyridium sp. Journal of Applied Phycology，2005，17: 215-222[8j Bilian Chen, Wenlang You. Isolation and antioxidant property of the extracellular polysaccharide from Rhodella reticulate. World J Microbiol Biotechnol，2001，26: 833-840[9] 叶振南，邵家坪，陆惠文.粗多糖的提取、分离及结构研究.中国药事，2004, 14(5): 329-332[10] 董洪新，刘新海，徐志玲.白灵菇子实体多糖提取工艺的研宄.食用菌学 报，2004, 11(1)： 22-25[11] 许金国，郑泉，刘俊.白灵菇多糖及总氮含量的测定.食用菌，2003,(3): 8-9[12] 董洪新，吕作舟.阿魏侧耳酸提水溶性多糖的研究.微生物学报，2004, 44(1): 101-103[13] 李永泉，吴炬，花立明.0阿魏菇菌丝体多糖分离纯化工艺的优化和结构 分析.兰州大学学报，2003, 39(4): 50-54[14] 陈哲超，林宇野，谢必峰.复合酶解法提取香菇多糖蛋白的研。