DNA电泳相关试剂及缓冲液的配制.doc

DNA电泳相关试剂及缓冲液的配制2M Tris-HAc100mM EDTApH＝8.5配 制 量：配制方法：1L1. 称取Tris碱242.3g，置于烧杯中2. 再称取EDTA固体29.3g或Na2EDTA2H2O固体37.2g3. 加入约700ml ddH2O，溶解完全4. 加入57ml的HAc，充分搅拌5. 用HAc调pH至8.56. 定容至1L，室温保存50TAE缓冲液pH8.5配方：890mM Tris-H3BO320mM EDTApH＝8.3配 制 量：配制方法：1L1. 称取Tris碱53.88g，EDTA固体2.93g或Na2EDTA2H2O固体3.72g，H3BO3 27.5g置于烧杯中2. 加入约700ml的ddH2O，溶解完全3. 调pH至8.34. 定容至1L，室温保存5TBE 缓冲液pH8.3配方：10mg/ml EB配 制 量：配制方法：100ml1. 称取1g EB固体于专用容器中2. 加入100ml的ddH2O，搅拌数小时至溶解完全3. 转移至棕色瓶中，4℃避光保存注意：EB为强致癌物质，专用容器小心操作EB溴化乙锭配方：30mM EDTA36%(V/V)丙三醇0.05％(W/V)溴酚蓝pH＝7.0配 制 量：配制方法：100ml1. 用移液器吸取6ml EDTA (500mM，pH8.0)加入约50ml ddH2O中2. 再吸取5ml 1%的溴酚蓝3. 量取36ml丙三醇4. 用2N NaoH调pH至7.05. 定容至100ml，4℃保存6上样缓冲液Loading Buffer配方：10mM EDTA50%(V/V) 丙三醇0.25%(W/V) 溴酚蓝配 制 量：配制方法：100ml1. 用移液器吸取2ml EDTA (500mM，pH8.0)加入约40ml ddH2O中2. 再称取250mg的溴酚蓝3. 量取50ml丙三醇4. 定容至100ml，4℃保存10上样缓冲液Loading Buffer配方：1%(W/V)溴酚蓝配 制 量：配制方法：100ml1. 称取1g溴酚蓝置于烧杯中2. 加入约80ml的ddH2O，溶解完全3. 定容至100ml4. 转移至棕色容器中5. 避光，4℃保存1%(W/V)溴酚蓝配方：10%(W/V) AP配 制 量：配制方法：50ml1. 称取5g过硫酸铵置于烧杯中2. 加入ddH2O定容至50ml3. 分装于1.5ml离心管中4. -20℃保存10%(W/V)过硫酸铵配方：29.0%(W/V) Acr1.0%(W/V) Bis配 制 量：配制方法：1L1. 称取丙烯酰胺固体290g置于专用的烧杯中2. 再称取10g甲叉双丙烯酰胺3. 加入约500ml ddH2O，充分搅拌，溶解完全后定容至1L4. 用0.45um滤纸过滤除杂5. 转移棕色瓶中，4℃避光保存注意：丙烯酰胺有毒，需小心操作，专用容器配制30%(W/V)丙烯酰胺储液(DNA用)配方：1. 0.5M EDTA(pH=8.0):在800ml蒸馏水中加入186.1g二水乙二胺四乙酸钠（EDTA-Na22H2O),充分搅拌，这时溶液为乳白色，加NaOH调解pH值至8.0，这时溶液颜色逐渐变为澄清。

最后定容至1L高压灭菌2. 5 XTBE:Tris碱54g;硼酸27.5g;20ml0.5M EDTA(pH=8.0),加蒸馏水定容至1L高压灭菌不过我在实验中没有灭菌，实验结果影响不大）1 X TBE:5 XTBE缓冲液与蒸馏水按 1: 4稀释就OK配置方法方法1：1%的溴酚蓝将托盘天平上称取1g溴酚蓝定溶于100ml无水乙醇中，转移入滴瓶中，贴标签备用方法2：0.05%的溴酚蓝配western blot用的2*SDS上样缓冲液需要用到0.1%的溴酚蓝，2-DE中溴酚蓝一般也是配成0.1%母液实际上，溴酚蓝在水中的溶解度不高，直接将0.1g溴酚蓝溶于100ml水是有困难的下面是其较合适的配制方法：0.05%的溴酚蓝配制方法：取溴酚蓝0.1g，加0.05mol/L氢氧化钠溶液3.0ml使溶解，再加水稀释至200ml，即得 变色范围pH2.8～4.6（黄→蓝绿）只是不知道加入NaOH会不会影响2-DE实验估计影响不大，因为指示剂用量毕竟很少方法3：1％溴酚蓝加1g水溶性钠型溴酚蓝于100ml水中，搅拌或涡旋混合直到完全溶解溴酚蓝其钠盐易溶解在水里相关词条甲醇、乙醇、苯、有机化学、氢氧化钠Western上样缓冲液配制整理● 6SDS样品缓冲液4TrisCl/SDS,PH6.8(0.28mol/L)7ml 甘油[30%(V/V)]3.0ml（3.8g）甘油密度为1.2613g/cm3 (20/4℃)SDS [1%（m/V）]1g溴酚蓝[0.0012%(m/V)]1.2mgDTT (0.5mol/L)0.93g如果需要，加去离子蒸馏水至10ml；等量分装成0.5ml并于-70℃贮存● 8TrisCl/SDS,PH6.8Tris-base（0.5mol/L）6.05g40ml水中溶解后以1mol/L盐酸调至PH6.8，补加至100ml。

HCl调至6.80.45um滤膜过滤，再加0.4gSDSSDS[0.4%(m/V)]0.4g4℃可保存1月●丽春红S染色液丽春红S 0.2%SDS Loading buffer210ml410mlTris-HClPH=6.80.125 M1.25ml（1mol/L）0.25 M2.5ml(1mol/L)SDS4%0.4g或者(10%SDS4ml)8%0.8g2-ME25%10%DTT30.15 M1.5ml（1mol/L）0.3 M3ml（1mol/L）Glycerol20%2ml30%3mlBromphenol blue.01%0.001g.02%0.002gddH2O1.25ml1.5ml 1. Prepared using Tris base, pH adjusted with HCl.2. If 2-ME is used, omit DTT.3. If DTT is used, omit 2-ME.。