农药残毒快速检测.doc

蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残毒快速检测酶抑制率法（分光光度法）专用试剂使用说明本试剂为国家标准快速检验方法GB/T5009.199-2003的专用配套试剂酶活性和对农药的灵敏度指标均达到或超过了国家标准要求，可以在各种型号的农药残毒检测仪（分光光度法）上使用，具有稳定性好、灵敏度高和使用方便等特点一、试剂配制1.缓冲液试剂：整包倒入大烧杯中，加1000mL纯净水溶解，酸碱度为pH8.0，常温保存；2.乙酰胆碱酯酶：取一支酶粉加20mL缓冲溶液溶解，4℃冰箱中保存，一周内用完也可将溶解后的酶液分成几个小瓶，将其冷冻，用时融化，但不能重复多次冷冻、化解3.显色剂：取一支显色剂加入20mL缓冲溶液，避光保存；4.底物：取一支底物加20mL缓冲溶液，摇匀后置4℃冰箱中保存；二、分析步骤1.样品处理：选取有代表性的蔬菜样品，冲洗掉表面泥土，剪成1cm左右见方碎片，取样品1g，（非叶菜类取2g）放入烧杯或提取瓶中，加入5mL缓冲溶液，手摇振荡1～2分钟，或超声波振荡30秒钟，倒出提取液，静置3~5min，待用2.对照溶液测试： 先于试管中加入100微升酶液和100微升显色剂，再加入2.5mL缓冲溶液，摇匀后于37°C放置15min，加入100微升底物摇匀，此时检液开始显色反应，应立即放入仪器比色池中，记录初始吸光度A1和反应3 min时的吸光度A2，A2-A1=DA0。

3.样品溶液测试：先于试管中加入100微升酶液和100微升显色剂，再加入2.5mL样品提取液，其它操作与对照溶液测试相同，记录初始吸光度A1和反应3 min时的吸光度A2，A2-A1=DAt三、结果计算结果以酶被抑制的程度（抑制率）表示抑制率(%)=[ (DA0-DAt)/DA0]×100 当蔬菜样品提取液对酶的抑制率≥50%时，表示蔬菜中有高剂量有机磷或氨基甲酸酯类农药存在，样品为阳性结果阳性结果的样品需要重复检验2次以上对阳性结果的样品，可用其它方法进一步确定具体农药品种和含量四、注意1.每批样品的控制时间、温度条件必须与对照溶液的条件完全一致2.葱、蒜、萝卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇及番茄汁液中，含有对酶有影响的植物次生物质，容易产生假阳性处理这类样品时，不要剪的太碎对一些含叶绿素较高的蔬菜，也不要剪的太碎3.当温度条件低于37°C，酶反应的速度随之放慢，加入酶液和显色剂后放置反应的时间应相对延长，延长时间的确定，应以胆碱酯酶对照溶液测试得到的吸光度A2-A1≥0.3以上，即可往下操作当对照溶液酶液的加入量大一些时，也可使A2-A1≥0.3以上4.当吸光度大到无法读取时，说明测定液浑浊有干扰。

五、产品有关技术指标1.代表性农药的检出下限见下表农药名称检出限mg/kg标准要求检出限mg/kg甲胺磷0.652.0氧化乐果0.50.8敌敌畏0.010.1呋南丹0.010.32.乙酰胆碱酯酶的活性：（室温20°C以上进行实验）DA0≥0.3六、包装及保存条件每包可做500份样品，0°C以下冰箱冷冻保质期为三年，配成试剂后保存期为一周。