基因组文库和cDNA文库的比较.ppt

•基因组文库和cDNA文库的比较• •0 01 1•基因组文库•02•cDNA文库•03•两者比较基因组文库基因组文库u概念u文库构建（原核）u文库构建（真核）•01•概念基因组文库：某种生物基因组的全部遗传信息通过克隆载体贮存在一个受体菌的群体中，这个受体菌群体就是该种生物的基因组文库公式:N=ln（1-P）/ln（1-f）,实际克隆子数应为2N~3N或更大•01•文库构建（原核）物理学方法：机械类或超声波等生物化学方法：限制酶部分切割制备基因组DNA并片段化重组DNA导入受体菌细胞并扩增DNA片段与载体重组连接筛选鉴定基因组文库原核生物基因组较小，一般采用质粒载体或λ载体•01•文库构建（真核）a.构建 λ噬菌体型基因组文库真核生物和原核生物基因组真核生物和原核生物基因组文库构建的原理和过程基本文库构建的原理和过程基本相似，方法有异（原核采用相似，方法有异（原核采用质粒载体或质粒载体或λλ载体）下面载体）下面介绍三种方法：介绍三种方法：•01•文库构建（真核）b.构建 Cosmid基因组文库由于筛选困难、重组效率低、文由于筛选困难、重组效率低、文库不易贮存，库不易贮存，CosmidCosmid使用不如使用不如λλ噬菌体载体普遍。

噬菌体载体普遍•01•文库构建（真核）c.构建酵母人工染色体型基因组文库酵母人工染色体酵母人工染色体基因组文库基因组文库u概念u文库制备•02•概念cDNA文库：以mRNA为模板，经反转录酶催化，在体外反转录成cDNA，与适当的载体连接后转化受体菌，则每个细菌含有一段cDNA，并能繁殖扩增，这样包含着细胞全部mRNA信息的cDNA克隆集合称为该组织细胞的cDNA文库公式:N=ln（1-P）/ln（1-f）•02•文库构建l细胞总RNA的制备及mRNA的分离￿￿￿￿包括mRNA、tRNA、rRNAlcDNA第一条链的合成￿￿￿￿oligo引导合成法、随机引物引导合成法l双链cDNA的合成￿￿￿￿￿￿￿四种常用方法lcDNA与载体的连接和噬菌体颗粒的包装及转染或质粒的转化•02•文库构建引引导导合合成成第第一一链链oligo•02•文库构建双双链链 合合成成方方法法DNA•02•文库构建大大肠肠杆杆菌菌 酶酶降降解解取取代代法法RNaseH•02•文库构建寡寡聚聚引引物物引引导导法法Oligo•02•文库构建PCR法法比较比较ucDNA文库优点u基因组文库优点•03•cDNA文库优点真核生物克隆序列直接应用于基因工程，基因组文库不能。

以mRNA为原料，研究RNA病毒的基因组结构和基因克隆分离复杂性低、筛选简易其克隆子数为基因组文库的十分之一假阳性概率低基因组克隆子复杂，假阳性概率高•03•基因组文库优点基因组文库含有全部基因，cDNA文库只含有全部蛋白质编码的结构基因且受材料影响￿cDNA文库能反映mRNA信息，但不能直接获得基因的内含子序列和基因编码区外大量的调控序列信息需要基因组文库cDNA文库中，高丰度mRNA的cDNA克隆,所占比例较高,分离基因容易;低丰度mRNA的cDNA克隆,所占比例较低,分离基因困难;•感谢聆听！•THANK￿YOU!。