过氧化氢酶试剂盒说明书.docx

过氧化氢酶(CAT)试剂盒说明书一、测定原理：过氧化氢酶(CAT)分解H202的反应可通过加入钼酸铵而迅速中止，剩余的H202与钼酸铵作 用产生一种淡黄色的络合物，在405nm处测定其变化量，可计算出CAT的活力试剂一 (ml)二、 试剂组成与配制：试剂一：液体100 mlX1瓶，4°C保存6个月试剂二：底物液体10 mlX1瓶，4°C保存6个月试剂三：显色粉剂X1瓶，4°C保存6个月加双蒸水至100 m l溶解，4°C保存1个月如 果底部有不溶粉末沉淀，直接取上清使用，不影响测定结果)试剂四：液体10 mlX1瓶，4°C保存6个月天冷时会凝固，临用前37°C水浴至透明方可 使用三、 组织样本的检测1、 组织匀浆液的制备：准确称取组织重量，按重量(g):体积(ml)=1： 9的比例加入9倍体 积的生理盐水，冰水浴条件下，制备成10%的组织匀浆，2500转/分离心10分钟，取上清， 再用生理盐水稀释成最佳取样浓度，待测(最佳取样浓度摸索减附录)2、 操作表：对照管测定管组织匀浆(ml)试剂一(37°C预温)(ml)试剂二(37°C预温)(ml)混匀，37°C准确反映1分钟(60秒)试剂三(ml)试剂四(ml)组织匀浆(ml)混匀，波长405nm,光径，双蒸水调零，测定各管吸光度值。

注：一般样本没有高脂等导致显著差异情况，对照管的样本更换成双蒸水，做1-2管对照即 可如需做样本自身对照，则试剂盒所测定样本数量减至48样3•组织中CAT活力的计算：(1) 定义：每毫克组织蛋白每秒种分解1umol的H202的量为一个活力单位2) 计算公式：组织匀浆中 1CAT活力(U / mgprot)=(对照OD值-测定OD值)x 271* x +待测样本蛋白浓度(mgprot / ml)60 x取样量注： *271为斜率的倒数(3) 计算举例：取10%水稻叶片匀浆做CAT检测，测得对照管吸光度为，测定管吸光度为，同时测得10%水 稻叶片匀浆蛋白浓度为mgprot/ml则计算结果为：组织匀浆中 CAT 活力(U/mgprot) =(0.704 - 0.332)x 271x - - 3.1303 = 10.7351U/mgprot60x0.05 注：1.测定血清和血浆时，如果样本不溶血，每批样本只需要随机挑2个样本做对照或者用 双蒸水代替额样本做对照；如果样本溶血的话，必须每个样本都要做对照2. 测定组织匀浆时，如果样本不是高脂，每批样本只需要随机挑2个样本做对照或者用双蒸 水代替额样本做对照；如果样本高脂，必须每个样本都要做对照。

3. 测定全血时，必需每个样本都要做对照。