中药菊花主要药用成分分析及挥发油指纹图谱研究.pdf

浙江大学硕士学位论文 1 中药菊花主要药用成分分析及挥发油指纹图谱研究中药菊花主要药用成分分析及挥发油指纹图谱研究 浙江大学药学院药物分析学专业 2002 级硕士研究生 李福高 导师 蒋惠娣 副教授 摘摘 要要 菊花(Flos Chrysanthemi)是传统中药，它是菊科菊属植物菊（Chrysanthemum morifolium Ramat.） 的头状花序，被《中国药典》收载的菊花有滁菊、贡菊、亳 菊、杭菊 传统研究认为：菊花具有清热解毒，止血消肿，疏肝明目等功能现代药理 研究表明，菊花具有抗肿瘤、消炎、抗菌、抗氧化、增加冠脉流量、抗心肌缺血 等多种生理活性 研究表明，菊花中所含的挥发油及黄酮类化合物与其生理活性密切相关因 此本实验旨在研究不同种类的菊花在主要黄酮苷元含量、挥发油成分、挥发油主 要成分含量、挥发油 GC-MS 指纹图谱上的差别，并较为系统地观察产地、等级、 炮制方法、采摘时间、物候期、贮存时间等对菊花黄酮类成分和挥发油成分含量 的影响 1.菊花水解木犀草素及芹菜素含量分析 目的： 1.菊花水解木犀草素及芹菜素含量分析 目的： 建立菊花水解木犀草素及芹菜素含量测定方法， 比较不同种类菊花上 述两成分的含量差别，并较为系统地观察产地、等级、炮制方法、采摘时间、物 候期、贮存时间对杭白菊黄酮类成分含量的影响。

方法：方法：以正交试验法考察盐酸浓度、甲醇浓度、水解温度、水解时间四个因 素对木犀草素苷和芹菜素苷水解效率的影响，确定最终提取条件以 RP-HPLC 法测定木犀草素及芹菜素含量 色谱条件为： 安捷仑 Zorbax SB-C18 柱(4.6mm × 250 mm, 5μm),柱温 35 ℃； 流动相： 甲醇： 0.20%磷酸 51:49 （v/v） ； 流速 1 ml·min -1， 检测波长 344nm，进样量 20μl 浙江大学硕士学位论文 2 结果结果： 优化的菊花黄酮类成分的最终水解条件为： 0.25g 菊花粗粉， 加 30ml 盐酸甲醇溶液（盐酸 2.4mol/L、甲醇 80%（v/v） ） ，水解温度 80 ℃，水解时间 2h木犀草素、芹菜素的线性及范围分别为 2.233～71.456 μg·ml -1 （r=1.000）, 1.668～53.376 μg·ml -1 (r=1.000)；日内精密度分别为 RSD 2.4%、1.6％；日间 精密度分别为 3.6％ 、3.2％ ；该方法平均回收率分别为 100.3%(RSD 0.83%) 、103.9%(RSD 0.91%) 。

不同品种菊花上述成分含量存在较大差别，而对于道地杭白菊，木犀草素、芹 菜素含量的变化趋势几乎一致木犀草素、芹菜素含量随着采摘期延后和等级降 低、花开放程度增大而下降；不同种植基地有所差异，而贮存时间对两者含量影 响不大 结论：结论：本研究建立含量测定方法简便、准确、重复性好，可同时测定菊花中 木犀草素、芹菜素的含量；菊花中水解木犀草素及芹菜素含量受多种因素影响， 木犀草素和芹菜素含量可以作为评价菊花品质的依据之一 2.菊花挥发油的研究 目的： 2.菊花挥发油的研究 目的：建立菊花挥发油中 β-榄香烯、樟脑、龙脑含量测定方法；比较不同 品种的菊花挥发油成分的含量差别，并较为系统地考察种植基地、等级、炮制方 法、采摘时间、物候期、贮存时间对杭白菊挥发油中上述 3 成分含量的影响，为 菊花挥发油的利用提供参考 方法：方法：以正交试验设计考察提取时间、加水量、浸泡时间、粉碎程度四个因 素对挥发油提取率的影响，确定最终提取条件以气相色谱内标法测定菊花挥发 油中 β-榄香烯、樟脑、龙脑含量选择正辛烷为樟脑、龙脑测定内标，正十四 烷为 β-榄香烯内标色谱柱：安捷仑 HP-5 毛细管柱；柱温：起始温度 70℃， 以 2.5 ·min℃ -1 升温速率升至 140 ℃，再以 10℃·min -1升温速率升至 260 ℃；气 化室温度 280℃；检测器 FID 温度 300 ℃；分流比 20:1；氮气流速 1ml·min -1， 空气 350ml·min -1，氢气 70ml·min-1，灵敏度 10 AUFS。

浙江大学硕士学位论文 3 结果：结果： 菊花挥发油的优化的提取条件为：菊花粉末 50g，加水 500ml，细度 50 目，微沸 5hβ-榄香烯、樟脑、龙脑的线性范围分别为 0.6250～10.00mg·ml-1 （r=0.9999）, 0.02231～0.3570 mg·ml-1 (r= 0.9993), 0.01143～0.1828mg·ml-1 (r=0.9996)；方法重复性实验 RSD 分别为 0.90% 、1.7%、1.9%；方法平均回收 率分别为 98.2%(RSD 1.7%)、97.8(RSD 0.45%) 和 100.4(RSD 1.6%).不同品种 菊花上述成分含量存在较大差别；在杭白菊中，β-榄香烯含量较高；采摘时间 对 β-榄香烯含量无明显；不同种植基地、炮制工艺、等级、物候期、贮存时间 的杭白菊 β-榄香烯含量有所差异， 但是， 樟脑及龙脑含量极低， 且变化无规律 结论：结论：本研究建立的含量测定方法简便，准确，重复性好，可同时测定菊花 挥发油中 β-榄香烯、樟脑、龙脑含量；菊花挥发油中上述 3 种成分含量受各种 因素影响 3．菊花挥发油指纹图谱研究 目的： 3．菊花挥发油指纹图谱研究 目的： 建立杭白菊挥发油的色谱指纹图谱，控制菊花挥发油质量稳定性以及 鉴别不同品种菊花的挥发油。

方法：方法：以 GC-MS 法对杭白菊挥发油样品进行分析,获取菊花挥发油指纹图 谱，并采用夹角余弦法比较了不同产地、不同物候期、不同品种菊花的相似度， 以 聚 类 分 析 法 进 行 分 类 色 谱 条 件 ： GC:DB-5MS毛 细 管 色 谱 （0.25mm*30m*0.25µm） ； 进样口温度 260℃； 载气为高纯氦， 流速为 1.0ml·min-1； 恒流，分流比 25:1，进样量为 2μl；柱温：80℃ 2·min℃ -1 100 ℃（45min） 0.5·min℃ -1 132 ℃ 5·min℃ -1 250 ℃（10min）MS：EI 源(70ev)，双灯丝，离 子源温度：230℃；四极杆温度：150℃；质量范围 m/z 50～500 全程扫描；延时 3min 结果：结果：采用本文建立的 GC/MS 色谱条件进行杭白菊挥发油指纹图谱研究，精 密度、重现性、稳定性良好，可用于识别不同产地、品种菊花对同一杭白菊种 植基地的道地药材进行相似度比较，其相似度在 0.92 以上 结论：结论：建立的气相指纹图谱可以作为菊花鉴别和质量控制的参考 关键词：关键词：菊花；挥发油；黄酮；指纹图谱；木犀草素；芹菜素；榄香烯；樟脑； 浙江大学硕士学位论文 4 龙脑 Determination of main active ingredients and fingerprint of essential oil in Flos Chrysanrhemi Department of Pharmaceutical Analysis and Drug Metabolism College of Pharmaceutical Sciences Zhejiang University Graduate student Fu-Gao Li Supervisor Hui-Di Jing, Associate Professor ABSTRACT The flower of Chrysanthemum is one of the most important global cut flowers and pot plants. To date, about 3000 species of Chrysanthemum have been identified worldwide. Officially, the flower of Chrysanthemum morifolium Ramat.(CMR) was documented in China Pharmacopoeia (2005). These species included Hangbaiju, Gongju, Boju, Chuju. However, only Hangbaiju, a significant species, was cultivated on a large scale in Zhejiang province, China. The flowering head of Chrysanthemum was used as a herbal tea or remedy for centuries.In the past,it was proved to be antipyretic,detoxicate, stanch bleed, reduce the swell ,and nourish hepar and view.By now,it have been found to possess antitumor, anti-inflammatory, antibacterial and antioxidant activities and to increase the coronary flow. In particular, the extraction of Hangbaiju has attracted more and more 浙江大学硕士学位论文 5 attentions for its therapeutic effects to cardiovascular diseases with few or no side effect. 1. Determination of luteolin and apigenin in hydrolysed Flos Chrysanthemi [Objective] This chapter reports the determination of mainly active ingredients in Flos Chrysanthemi by HPLC, and the influence of sources, grades, processing, harvest time, growth stages and storage life on flavone in Hangbaiju， which is one of the most significant chrysanthemum. [Methods] A new HCl hydrolysis/HPLC method has been developed to determine the free and conjugated forms of luteolin and apigenin in CMR. The hydrolytic procedure was optimized by a two indexes orthogonal experimental design in which HCl concentration, methanol concentration, hydrolysis temperature and hydrolysis time were only considered. Quantification of active ingredients was done by HPLC at 35℃ using Agilent Zorbax SB-C18 column (4.6mm × 250 mm, 5μm ), the methanol: 0.25% phos。