4.汉防己中生物碱的提取、分离和鉴定.doc

实验名称实验四 汉防己中生物碱的提取、分离和鉴定实验班级实验课时间课时数10分组10实验目的：1．掌握一般叔胺生物总碱的提取和纯化方法2．熟悉柱色谱法分离生物碱的操作技术3．掌握生物碱的鉴定方法实验原理：根据大多数生物碱或生物碱盐均能溶于乙醇的通性，利用乙醇提取总生物碱利用季铵型生物碱易溶于水，不溶于亲脂性有机溶剂的性质，用溶剂萃取法分离脂溶性生物碱和水溶性生物碱；根据汉防己甲素和乙素和酸结合成盐而易溶于水，难溶于亲脂性试剂，在碱性条件下易溶于亲脂性试剂不溶于水的性质反复处理后，再利用两者在冷苯中溶解度的不同，使它们相互分离或者利用两者的极性不同，利用柱层析进行分离汉防己甲素 R=CH3汉防己乙素 R=H实验试药与器材：试药：汉防己、85%乙醇、1%盐酸、氯仿、氨水、1%氢氧化钠、无水硫酸钠、氧化铝、丙酮、环己烷、甲醇、改良碘化铋钾试剂、碘-碘化钾试剂、碘化汞钾试剂、硅钨酸试剂等器材：回流装置、圆底烧瓶、分液漏斗、层析柱、漏斗、薄层板、乳钵、量筒、烧杯、试管等实验内容与方法： 一、总生物碱的提取 取汉防己粉末100g，置于500ml圆底烧瓶中，加85%乙醇300ml，水浴加热回流1小时，滤出乙醇提取液；药渣重新加入85%乙醇200ml同法提取1次，合并两次提取液，过滤，浓缩至无醇味，成糖浆状，得到总生物碱。

二、精制 将上述糖浆状提取液转入烧杯中，加1%盐酸调PH为2，边加边搅拌，静置，过滤，得澄明滤液滤液加等体积氯仿，再加氨水调PH为10以上，于分液漏斗中振摇萃取，静置分层后放出氯仿层，碱液再用氯仿萃取两次，合并氯仿液氯仿液置于分液漏斗中，先以1%氢氧化钠溶液洗2次，再用水洗2-3次后加入约5g无水硫酸钠脱水，放置过夜，过滤，回收氯仿至少量，得汉防己总碱三、汉防己甲素和汉防己乙素的分离1．装柱 取层析柱垂直固定在铁架台上，在管的下端垫入少量棉花，称取中性氧化铝100目20g，缓缓加入层析柱中，边加边轻轻振动色谱柱，使氧化铝在柱中填实均匀2．上样 取100mg汉防己总碱置于小蒸发皿中，用少量丙酮溶解，另加0.5g色谱用氧化铝（作吸附剂），搅拌均匀，并于水浴上缓缓蒸去溶剂然后将含有样品的氧化铝装入色谱柱的上端，并盖一圆形滤纸3．洗脱 将色谱柱活塞打开，以正己烷-丙酮（4∶1）洗脱，流速控制在5ml/min，收集各流分（10ml～15ml/份）4．检查 将各流分回收溶剂，依次点于硅胶G-CMC-Na薄层板上，用氯仿—丙酮—甲醇（6∶1∶1）为展开剂，展开，喷以改良碘化铋钾试剂，比较各流分的Rf值，合并相同Rf值的流分。

5．结晶 将合并流分的溶液浓缩至适当体积，放置，析晶，滴加少量丙酮洗涤结晶，可得汉防己甲素、汉防己乙素结晶 四、检识1．化学检识 将提取的氯仿液，用1%的盐酸萃取，得盐酸溶液10毫升，分为四个小试管储存，分别在四个小试管中加入改良碘化铋钾、碘-碘化钾、碘化汞钾、硅钨酸试剂，观察各试管中的变化，记录在如下表格中改良碘化铋钾碘-碘化钾碘化汞钾硅钨酸汉防己生物碱空白2．色谱检识 色谱材料：硅胶G-CMC-Na硬板 点样：汉防己总碱、汉防己甲素和汉防己乙素的0.1%醇溶液 展开剂：①氯仿—丙酮—甲醇（6∶1∶1）②氯仿—乙醇（10∶1）③甲苯—丙酮—乙醇（4∶5∶1） 显色剂：改良碘化铋钾试剂 观察记录：记录图谱及斑点颜色 实验注意事项：1、提取装置的安装要小心，不能打碎仪器2、提取总生物碱时，回收乙醇至稀浸膏状即可，过干时，当加入盐酸后会结成胶状团块，影响提取效果3、用1%氢氧化钠溶液洗氯仿液目的是分除酚性生物碱汉防己乙素结构中的酚羟基由于空间效应和氢键的形成，呈隐性酚羟基性质，酸性减弱，不溶于强碱溶液中，在此步骤中仍留在氯仿液中。