薄层色谱鉴别.ppt

薄层色谱法薄层色谱法 概念概念薄层色谱法薄层色谱法(TLC)(TLC) 将固定相将固定相( (如硅胶如硅胶) )薄薄地均匀涂敷在底板薄薄地均匀涂敷在底板( (或棒或棒) )上，试样点在薄层一端，在展上，试样点在薄层一端，在展开罐内展开，由于各组分在薄层上的移动距离不同，形成互相分离的斑点，测定开罐内展开，由于各组分在薄层上的移动距离不同，形成互相分离的斑点，测定各斑点的位置及其密度就可以完成对试样的定性、定量分析的色谱法各斑点的位置及其密度就可以完成对试样的定性、定量分析的色谱法  薄层色谱法是一种吸附薄层色谱分离法，它利用各成分对同一吸附剂吸附能力不同，薄层色谱法是一种吸附薄层色谱分离法，它利用各成分对同一吸附剂吸附能力不同，使在移动相（溶剂）流过固定相（吸附剂）的过程中，连续的产生吸附、解吸附、再使在移动相（溶剂）流过固定相（吸附剂）的过程中，连续的产生吸附、解吸附、再吸附、再解吸附，从而达到各成分的互相分离的目的吸附、再解吸附，从而达到各成分的互相分离的目的 基本原理基本原理•在给定的条件下（吸附剂、展开剂、板层厚在给定的条件下（吸附剂、展开剂、板层厚度等），化合物移动的距离和展开剂移动的度等），化合物移动的距离和展开剂移动的距离之比是一定的，即距离之比是一定的，即RfRf值是化合物的物理值是化合物的物理常数，其大小只与化合物本身的结构有关，常数，其大小只与化合物本身的结构有关，因此可以根据因此可以根据RfRf值鉴别化合物值鉴别化合物。

比移值比移值组分二组分二组分一组分一被分离被分离混合物混合物薄层色谱展开示意图薄层色谱展开示意图薄层色谱法薄层色谱法优点优点 操作简单，定性结果直观操作简单，定性结果直观缺点缺点有一定毒性、定量方面的精密度较差有一定毒性、定量方面的精密度较差•实验仪器实验仪器 ⑴ ⑴ 载板载板 ⑵ ⑵ 固定相（吸附剂）或载体固定相（吸附剂）或载体 ⑶ ⑶ 涂布器涂布器 ⑷ ⑷ 点样器点样器 ⑸ ⑸ 展开室展开室 实验操作实验操作实验操作实验操作1 薄层板的制备薄层板的制备 吸附剂（硅胶）调制玻璃板玻璃板涂布¯调制时慢慢搅拌，勿使产生气泡调制时慢慢搅拌，勿使产生气泡¯均匀涂布在玻璃板上，摇动摊平，晾干均匀涂布在玻璃板上，摇动摊平，晾干¯使用前放入烘箱内，在使用前放入烘箱内，在105-115℃105-115℃左右烘干左右烘干40-50min40-50min冷 却后使用却后使用粘合剂、添加剂粘合剂、添加剂 固定相（吸附剂）的选择固定相（吸附剂）的选择纤维素、淀粉纤维素、淀粉硅酸镁硅酸镁硫酸钙硫酸钙 硅胶硅胶佛罗里硅土佛罗里硅土氧化镁氧化镁 氧化铝氧化铝活性炭活性炭对极性有机物的吸附作用增强对极性有机物的吸附作用增强•2 供试品的制备供试品的制备：按照各药品质量标准规：按照各药品质量标准规定的方法进行提取分离。

制得的供试品应放定的方法进行提取分离制得的供试品应放置于密塞的小瓶中，防止溶剂挥发影响点样置于密塞的小瓶中，防止溶剂挥发影响点样量3 3 对照品溶液的制备对照品溶液的制备：可按质量标准规定：可按质量标准规定精配成一定浓度的对照品溶液，置密塞小瓶精配成一定浓度的对照品溶液，置密塞小瓶中备用标准药材对照溶液，一般需照供试中备用标准药材对照溶液，一般需照供试品的制备方法制备在使用对照品溶液时一品的制备方法制备在使用对照品溶液时一定要注意将取样的毛细管充分洗干净，防止定要注意将取样的毛细管充分洗干净，防止造成对照品污染造成对照品污染4 4 点样点样：：按规定吸取溶液用定量点样毛细管按规定吸取溶液用定量点样毛细管或色谱用微量注射器点样于薄层板上点或色谱用微量注射器点样于薄层板上点样基线距底边的距离为样基线距底边的距离为1 1～～2cm2cm，点间距一，点间距一般为般为1.0-1.5cm1.0-1.5cm点样直径一般应小于点样直径一般应小于5mm5mm两个以上的点样应在同一水平线上，并与两个以上的点样应在同一水平线上，并与薄层板的底边平行点样时必须注意勿损薄层板的底边平行点样时必须注意勿损伤薄层表面。

伤薄层表面 点样示意图点样示意图对照品对照品样样供试品样供试品样点样直径点样直径≤5mm1cm≤点间距点间距≤1.5cm1-2cm自动点样器自动点样器毛细管点样毛细管点样•5 5 展开展开•展开室展开室•展开剂（流动相）的选择展开剂（流动相）的选择：主要根据样品中主要根据样品中各组分的极性、溶剂对于样品中各组分溶解各组分的极性、溶剂对于样品中各组分溶解度等因素来考虑度等因素来考虑展开剂的选择展开剂的选择 正己烷正己烷 环己烷环己烷 四氯化碳四氯化碳 甲苯甲苯 氯仿氯仿 正丁醇正丁醇 乙酸乙酯乙酸乙酯 丙酮丙酮 乙醇乙醇 甲醇甲醇 水水溶剂的洗脱能力随溶剂的极性增大而增强溶剂的洗脱能力随溶剂的极性增大而增强在一块薄层板上进行试验：在一块薄层板上进行试验： ¯ 若所选展开剂使混合物中所有的组分点都移到了溶剂前沿，此溶剂的极若所选展开剂使混合物中所有的组分点都移到了溶剂前沿，此溶剂的极性过强；性过强； ¯若所选展开剂几乎不能使混合物中的组分点移动，留在了原点上，此溶剂若所选展开剂几乎不能使混合物中的组分点移动，留在了原点上，此溶剂的极性过弱。

的极性过弱 理想的展开剂应能使混合物分离后各组分的理想的展开剂应能使混合物分离后各组分的R Rf f值相差尽可能大值相差尽可能大各组分理想的比移值在各组分理想的比移值在0.2-0.80.2-0.8之间当一种溶剂不能很好地展开各组分时，常选择用混合溶剂作为展开剂先当一种溶剂不能很好地展开各组分时，常选择用混合溶剂作为展开剂先用一种极性较小的溶剂为基础溶剂展开混合物，若展开不好，用极性较大用一种极性较小的溶剂为基础溶剂展开混合物，若展开不好，用极性较大的溶剂与前一溶剂混合，调整极性，再次试验，直到选出合适的展开剂组的溶剂与前一溶剂混合，调整极性，再次试验，直到选出合适的展开剂组合 1-2cm展开示意图展开示意图¯展开剂要接触到薄展开剂要接触到薄层板下沿，但切勿层板下沿，但切勿接触到样点接触到样点¯盖上盖子，展开盖上盖子，展开¯观察展开情况观察展开情况¯取出薄层板取出薄层板上升法上升法倾斜上行法倾斜上行法下降法下降法展开方式示意图展开方式示意图•影响展开的因素影响展开的因素 A A 相对湿度的影响相对湿度的影响 　　B B 溶剂蒸汽的影响　　溶剂蒸汽的影响　　 C C 温度的影响温度的影响 　　D D 展距的影响展距的影响•展开中斑点异常现象的探讨展开中斑点异常现象的探讨（（1 1））边缘效应边缘效应：同一种化合物，在同一块薄层板上，用：同一种化合物，在同一块薄层板上，用同一展开剂，在同一层析缸内展开后，薄层中部的斑同一展开剂，在同一层析缸内展开后，薄层中部的斑点比薄层两侧边缘处的斑点的点比薄层两侧边缘处的斑点的 RfRf值小即为边缘效应。

值小即为边缘效应 常用的解决办法：常用的解决办法： ① ①增加展开室（层析缸）中溶剂蒸气饱和度增加展开室（层析缸）中溶剂蒸气饱和度 ② ②选用较合适的单一展开剂代替混合展开剂选用较合适的单一展开剂代替混合展开剂 ③ ③采用共沸混合展开剂代替一般混合展开剂采用共沸混合展开剂代替一般混合展开剂 ④ ④在薄层板的两边各刮去约在薄层板的两边各刮去约5mm5mm的吸附剂有助于防止的吸附剂有助于防止 边缘效应边缘效应•（（2 2））拖尾现象拖尾现象•（（3 3））斑点形成念珠状斑点形成念珠状•（（4 4））同一块薄板上出现比移值相差悬殊同一块薄板上出现比移值相差悬殊 的斑点的斑点•（（5 5））斑点比移值不稳定斑点比移值不稳定•（（6 6））斑点异形斑点异形•6 6 显色显色 A 光学检出法光学检出法 　　 a a 自然光　自然光　b b 紫外光　紫外光　c c 荧光荧光 B 蒸汽显色法蒸汽显色法 C 物理显色法物理显色法 D 试剂显色法试剂显色法 a a喷雾显色喷雾显色 b b 浸渍显色浸渍显色 ( 通用显色剂通用显色剂 硫酸溶液、硫酸溶液、0.5%0.5%碘的氯仿溶液、碘的氯仿溶液、中性中性0.05%0.05%高锰酸钾溶液、碱性高锰酸钾溶液高锰酸钾溶液、碱性高锰酸钾溶液) )三用紫外仪三用紫外仪显色用喷雾器显色用喷雾器举例举例麻杏石甘冲剂中麻黄的鉴别麻杏石甘冲剂中麻黄的鉴别[ [处方处方] ] 麻黄麻黄31g 31g 苦杏仁苦杏仁31g 31g 生石膏生石膏157g 157g 甘草甘草 31g31g[ [鉴别鉴别] ]供试品溶液制备：取本品供试品溶液制备：取本品10g10g，加水，加水50ml50ml使溶解，使溶解，加氨水加氨水1ml1ml使成碱性，用乙醚提取使成碱性，用乙醚提取2 2次，每次次，每次10ml10ml，，合并提取液，用无水硫酸钠脱水，过滤，滤液挥去合并提取液，用无水硫酸钠脱水，过滤，滤液挥去乙醚，残渣加甲醇乙醚，残渣加甲醇2ml2ml，作为供试品溶液。

作为供试品溶液对照品溶液制备：取盐酸麻黄碱对照品加甲醇制成对照品溶液制备：取盐酸麻黄碱对照品加甲醇制成每每1ml1ml含含1mg1mg的溶液，作为对照品溶液的溶液，作为对照品溶液展开系统：硅胶板；以展开系统：硅胶板；以氯仿－甲醇－浓氨水试液氯仿－甲醇－浓氨水试液（（20:5:0.520:5:0.5）为展开剂；）为展开剂；显色：茚三酮试液，在显色：茚三酮试液，在105℃105℃加热至斑点清晰加热至斑点清晰显色结果：供试品溶液中，显色结果：供试品溶液中，在与对照品色谱相应的位在与对照品色谱相应的位置上，显相同的红色斑点置上，显相同的红色斑点盐酸麻黄碱盐酸麻黄碱 供试品供试品薄层色谱法薄层色谱法•应用应用1 食品和营养食品和营养2 药物和药物代谢药物和药物代谢3 化学和化工化学和化工4 医学和临床医学和临床5 毒物分析和法医化学毒物分析和法医化学 6 农药农药。