高效液相色谱法基本知识.docx

高效液相色谱法基本知识u HPLC 法分类与定义（见第 7章）正相 高效液相色谱法（ NP-HPLC ） —— 固定相极性大于流动相极性常用色谱柱有硅胶柱、氰基柱、 氨基柱； 流动相为烷烃加适量极性溶剂， 如正己烷 -异丙醇、 正己烷 -乙醇等主要用于分离溶于有机溶剂的极性至中等极性的分子型化合物，如维生素 A、维生素 D、维生素 K 1 的含量测定反相 高效液相色谱法（ RP-HPLC ） —— 流动相极性大于固定相极性常用色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶（ ODS）柱；流动相主要成分为甲醇 -水或乙腈 -水（添加适量酸或缓冲盐），用于大多数非极性、弱极性药物的分离分析v 系统适用性试验内容与要求理论板数 （n）＝ 16（ tR/ W） 2 或 n＝ 5.54（ tR/Wh/2） 2 ，计算 n 时应指明测定物质当测定结果有异议时，应以峰宽（ W）计算结果为准2(t R2 - t R1 )2 (t R - t R )2 1分离度 （ R） = 或 R= ，一般要求待测组分与相邻共W 1 + W 21. 70 (W1 ,h / 2+ W 2 , h / 2 )存物之间的 R 应大于 1.5。

当测定结果有异议时，应以峰宽（ W）计算结果为准重复性 ：用于评价连续进样中，色谱系统响应值的重复性能取同一溶液连续进样 5次，其峰面积的相对标准偏差（ RSD）应不大于 2.0％拖尾因子 （T） =W 0 . 05 h，峰高法定量时 T 应在 0.95～ 1.05 之间2 d 1w 测定方法内标法 ：按规定，取被测物对照品和内标物质一定量，混合，配制成校正因子测定用的对照溶液， 注入高效液相色谱仪， 记录色谱峰面积 根据对照溶液色谱图中对照品和内标物质的峰面积或峰高，以及对照品和内标物的浓度，按下式计算校正因子（ f）：f = A内A 对/ C 内/ C 对另取被测物适量，加一定量内标溶液，混合，制成供试品溶液，注入高效液相色谱仪，记录色谱峰面积 根据供试品溶液色谱图中待测成分和内标物质的峰面积或峰高， 按下式计算供试品溶液中待测成分的浓度（C样 ）：A样C 样 = f ′ ' 'A内 / C内外标法 ：按规定，精密称取对照品和供试品，分别配制成溶液，注入高效液相色谱仪， 记录各自色谱图，测量对照品溶液和供试品溶液中待测成分的峰面积（或峰高），按下式计算供试品溶液中待测成分的浓度（C样 ）：A样C 样 = C 对A对10。