银杏黄铜的提取工艺、性质和功能研究.doc

银杏黄酮的提取工艺、性质和功能研究摘要目的从银杏叶中分离纯化出总黄酮，并用来做定性、定量分析及其 功能研究方法采用超声提取法从银杏叶中提取总黄酮，再用硅胶柱层析 法分离纯化，用镁粉、浓盐峻做定性分析，以NaNO?、Al （N03 ） 3和NaOH为显色 剂在510nm处测定其吸光值，分析其含量，用普鲁士蓝法进行总黄酮还原力的测 定 结果 与镁粉、浓盐酸反应溶液颜色呈橙色，银杏叶提取液稀释10倍后 测得吸光度0.147；稀释5倍时吸光度为0.262；不稀释时浓度为1.229,当样 品浓度为0. 04mg/nil时还原力最强 结论 用超声波辅助提取法、硅胶柱层 析法能较快速的分离纯化出银杏叶中的总黄酮，银杏叶黄酮具有较强的还原力关键词银杏总黄酮；提取工艺；银杏黄酮功能前言 银杏又名公孙树，为银杏科银杏属植物银杏叶中黄酮类化合物含量较 高，为2.5%〜5.91%,主要含有黄酮和银杏内酯等有效成分，其中银杏黄酮具有 扩张血管，增加脑血管流量，降低脑血管阻力，改善脑血管循环功能，保护脑细 胞，免受缺血损害扩张冠状动脉；防止心绞痛及心肌梗塞，抑制血小板活化因子、 抗氧化，防止血栓形成，清除有害的氧化自由基，提高免疫力和调血脂等药理作 用⑴。

对治疗心脑血管疾病，增加冠状动脉血流量，及治疗脑缺血、脑老化、老 年痴呆症哮喘等有独特疗效⑴国内外相继有银杏叶黄酮新药投入市场1实验仪器：紫外分光光度计、电子天平、超声波提取机、漏斗、滤纸、三角瓶、50ml 移液管、容量瓶、移液枪、烧杯等2实验方法⑵2.1银杏黄酮提取步骤：（-）采用超声提取法从银杏叶中提取总黄酮称取100g磨碎的银杏叶，用1000ml 60%的乙醇溶解称取的银杏叶三） 在超声功率800Hz T提取，连续超声35mino（四） 提取液减压布式漏斗过滤，再旋转蒸发器浓缩问收乙醇2.2柱层析方法2.2.1硅胶的预处理称取3g硅胶样品放入烧杯中，再放入烘箱中105C,干燥40mino现处理现装柱 ►加样 ►洗脱 ►样品收集 >处理分析用(防再次吸潮)柱层析简易图解(见图2.2)图2.2柱层析流程图2.2.2装柱干法装柱时，先将柱竖直固定在铁架台上将所需量的硅胶(300-400 H) 通过一支短颈玻璃漏斗慢慢加入柱中至柱容积的1/2,同时，轻轻敲柱身使柱填 充紧密干法装柱的缺点是容易使柱中混有气泡2.2.3加样将配好的溶液沿着柱内壁缓缓加入，切记勿冲动吸附剂，否则将造成吸附剂 表面不平而影响分离效果。

2.2.4洗脱洗脱剂极性大小和对被分离物各组分的溶解度大小对于分离效果非常重要 如果洗脱剂的极性远大于被分离物的极性，则洗脱剂将受到吸附剂的强烈吸附， 从而将原来被吸附的待分离物“顶替”下来，随多余的洗脱剂冲下而起不到分离 作用；如果洗脱剂的极性远小于各组分的极性，则各组分被吸附剂强烈吸附而留 在固定相中，不能随流动相向下移动，也不能达到分离的目的2.2.5样品收集用规格相同的试管对样品进行收集，每个试管收集2ml洗脱黄酮液，收集完 做紫外可见分光光度法分析配置空白对照：准确吸取30%乙醇5ml,在吸取5% NaN02溶液0. 3ml,放置6min； 再加 10% Al (NO3)3溶液0. 3mL 放置6min,最后加Imol/LNaOH溶液4ml,放置 15min2.3黄酮的定性分析：吸取5ml的滤液，加入少量镁粉，再滴加2-3滴浓盐酸, 摇匀，放置2min,溶液颜色呈橙色，即说明该溶液中含有黄酮化合物2.4银杏总黄酮的含量测定方法：2.4.1芦丁标准曲线的绘制精确配置0. Img/mL芦丁标准液，分别取0. 0、1. 0、2. 0、3. 0、4. 0和5. 0 mL于］0 mL容量瓶中,各加30%乙醇使成5 mL,加入5% NaN02溶液0.3mL摇匀。

放置6min后，加10% Al (N03) 3溶液3mL摇匀放置6 min后加入ImoL /L Na Oil溶液4mL,再加蒸馄水稀释至刻度，摇匀放置15 min后于500nm波长处测定吸光度值，以吸光度值对芦丁标准品含量作图2.4.2银杏黄酮定量分析用紫外分光光度计测在500nm肘的吸光度，用空白对照作参比银杏叶提取 液不稀释、稀释5倍、稀释10倍后测吸光度2.5总黄酮还原力的测定一鲁士蓝法⑶2. 5.1样品测定步骤：在15ML的离心管中依次加入pH6. 6的磷酸缓冲液2. 5ML,不同浓度的样品液2. 5ML和1%的铁氤化钾溶液2. 5ML,混合均匀后，置于50度水浴中温浴 20Min,然后迅速冷却再加入10%的三氯乙酸2. 5ML混匀后，在3000r/min的条件下分离Wmin后，取上清液5而于20而比色管中，再加入蒸馄水4ml和0. 1%的三氯化铁1ml,混匀后，放置lOmin,在700nni处测定吸光度，吸光度值越高, 还原能力越强2. 5.2阳性对照试验将抗坏血酸等抗氧化药品配制成梯度浓度，与提取样品一起进行抗氧化试验，进 行结果对比，以判断样品的抗氧化能力方法同样品3实验结果 3.1银杏总黄酮提取率：银杏叶乙醇提取物旋转蒸发器浓缩后得浓缩液质量为13. 016g,所以总黄酮提取率=13. 016g/100g=13. 016%。

3.2黄酮的定性分析：颜色呈橙色，即说明该溶液中含有黄酮化合物3.3银杏总黄酮的含量测定:3.3.1芦丁标准曲线的绘制 根据实验方法，在500nni测定各浓度的吸光度(见 表2.1),并制定芦丁标准曲线芦丁标准品吸光度值表芦丁样品浓度0.01 0.02 0.03 0.04 0.05(mg/ml)吸光度/A0. 101 0.235 0.358 0.435 0.5120.65o.4 3 2 1 • • ♦ ♦ o o o o 8Q > 1 1 1 1 1 0 0.01 0.02 0.03 0.04 0.05 0.06芦丁浓度（mg/ml）图2.1芦丁吸光度标准曲线标准曲线回归方程为：y= 10.529x4-0.0103其线性范围0〜0.05mg/mL,相关系数r = 0.9945,说明线性关系良好3. 3. 2银杏黄酮定量分析：银杏叶提取液稀释10倍后测得吸光度0. 147；稀释5倍时吸光度为0. 262；不稀释时吸光度为1. 229O3.4总还原力的测定：在700nm处测得吸光度浓度梯度mg/ml0. 010. 020. 01样品测定（黄酮） 吸光值0. 5060. 5350. 570阳性对照（抗坏 血酸）吸光值0. 8731.0821.9014 讨论4. 1本实验的总黄酮提取率=13. 0I6g/100g=13. 016%。

由于本实验只是对银杏提 取物的提取分离工艺做了初步的实验室研究，重在对银杏黄酮的定性、定量及功 能研究，以便更好地掌握银杏总黄酮的性质及功能，因此本文的提取工艺较为简 单快速，所以本实验的提取率并未能像其他文献报道的总黄酮忒含量＞24%那样4.2参考文献1 .拓义芳，颤锋.银杏叶及其制剂的开发应用近况.中成药.1995（11）： 40.2.银杏黄酮分离纯化的工艺研究.百度文 库.http://wenku. baidu. com/view/df370a23af45b307e8719767.html3.赵丰丽.生物活性物质开发与利用实验指导（试用本）.2012.2： 26 （广西师范 大学生命科学学院自编教材）。