固相萃取和气相色谱联用测定结构脂α、β位置脂肪酸及甘油酯组成的方法.docx

固相萃取和气相色谱联用测定结构脂α、β位置脂肪酸及甘油酯组成的方法固相萃取和气相色谱联用测定结构脂α、β位置脂肪酸及甘油酯组成的方法一种固相萃取和气相色谱联用测定结构脂α、β位置脂肪酸及甘油酯组成的方法，先利用纯的花生四烯酸-甘油三酯、二十二碳六烯酸-甘油二酯、亚麻酸-甘油一酯、油酸-游离脂肪酸标准品，通过优化不同极性配比的洗脱液洗脱条件，在同一根SPE小柱上实现混合物中TAG、DAG、MAG、FFA的有效分离，其特征在于它包括如下步骤：1)混合标准样品的分离和脂肪酸组成分析；2)结构脂α、β位置脂肪酸及甘油酯组成的分析该方法具有操作简便、样品需求量低、需要溶剂消耗量少、定性定量分析结果准确、检测限低、分析时间快的优点，可实现结构脂α、β位置脂肪酸组成和结构脂产品中TAG、DAG、MAG、FFA组成与含量的高通量检测专利说明】固相萃取和气相色谱联用测定结构脂α、β位置脂肪酸及 甘油酯组成的方法【技术领域】 [0001] 本发明涉及一种检测结构脂的方法，具体涉及一种固相萃取和气相色谱联用测定 结构脂α、β位置脂肪酸及甘油酯组成的方法背景技术】 [0002] 脂质是人类膳食的主要组成部分，在人体三大能量营养素中占有重要的地位。

随 着人们生活水平的不断提高，人类对膳食中脂质的营养提出了新的要求吃好油、吃营养健 康油，已成为我国消费者关注自身健康、保证正常营养摄取的新需求 [0003] 研究表明，油脂中TAGS的含量高达95%以上TAGS中脂肪酸的组成、碳链长短、 双键数目及位置是影响油脂物理化学性质及营养价值的重要因素，尤其是甘油骨架上脂肪 酸的位置分布对甘油酯在人体内的吸收代谢及其营养价值具有重要影响甘油酯中脂肪酸 的位置可以分为两大类，S卩a (Sn-1，3)位和β (Sn-2)位在人体的胃肠道内，胰脂肪酶是 消化脂质的最主要酶，具有较高的α位专一性酰基在α位上，脂肪酸以游离的形式被吸 收，而酰基在β位时，则是以单甘酯的形式被吸收，且β位单甘酯更易被人体吸收利用甘 油酯的这种"脂肪酸酰化位置效应"对于指导功能油脂产品的研发有着非常重要的意义 [0004] 结构脂质（StructuredLipid，SLs)，通过改变三酰甘油骨架上脂肪酸组成及位置 分布，将具有特殊营养或生理功能的脂肪酸结合到特定位置，从而充分发挥各种脂肪酸的 物理和营养功能性质结构脂作为一类新型功能性油脂，其开发与应用程度越来越广在 合成SLs的过程中，常伴随着TAG、DAG、MAG、FFA的产生。

产物中TAG、DAG、MAG、FFA的分离 是优化反应条件、鉴定反应产物的前提此外，建立一种高通量的快速有效测定SLs中α、 β位置脂肪酸组成的方法，在SLs研究工作中有着重要的现实意义 [0005] -直以来，分离TAG、DAG、MAG、FFA的方法主要是TLC法和正相高效液相色谱法 (NP-HPLC)TLC法的制板、平衡、分离、提取等操作比较复杂，被测样品经过点样后暴露在 空气中，增加了脂肪酸的氧化几率，尤其是对于一些长碳链多不饱和脂肪酸（LCPUFAs)影 响较大另外，由于TLC法难于定量，且存在用时长、受操作者操作水平的影响较大等缺点， 因此，只能作为定性分析的一种辅助手段，从而限制了它的进一步应用而NP-HPLC仪器昂 贵，且需要先记录相应标准品的保留时间，在进行样品分析时，需要按照各个组分的保留时 间分别收集各个组分，经GC进行脂肪酸检测，因此存在有机溶剂消耗大、费时等缺点相对 于传统的TLC法和HPLC法，固相萃取技术具有有机溶剂消耗少、富集倍数高，能有效对SLs 合成产物中TAG、DAG、MAG、FFA快速有效分离等特点，结合GC法，能实现测定结构脂α、β 位置脂肪酸及甘油酯的组成分析。

本发明对固相萃取小柱分离TAG、DAG、MAG及FFA的洗脱 条件进行优化，建立了采用商品化的固相萃取小柱完成了 SLs合成过程中产生的TAG、DAG、 MAG、FFA的快速有效分离，结合GC法，实现了 SLs中α、β位置脂肪酸及甘油酯的组成分 析，该方法操作简便，快速有效，便于批量处理样品发明内容】 [0006] 本发明的目的在于提供一种固相萃取和气相色谱联用测定结构脂α、β位置脂 肪酸及甘油酯组成的方法，该方法具有操作简便、样品需求量低、需要溶剂消耗量少、定性 定量分析结果准确、检测限低、分析时间快的优点 [0007] 为了实现上述目的，本发明的技术方案是：一种固相萃取和气相色谱联用测 定结构脂α、β位置脂肪酸及甘油酯组成的方法，先利用纯的花生四烯酸-甘油三酯 (ARA-TAG)、二十二碳六烯酸-甘油二酯（DHA-DAG)、亚麻酸-甘油一酯（Ln-MAG)、油酸-游 离脂肪酸（0-FFA)标准品，通过优化不同极性配比的洗脱液洗脱条件，在同一根SPE小柱上 实现混合物中TAG、DAG、MAG、FFA的有效分离，其特征在于它包括如下步骤： [0008] 1)混合标准样品的分离和脂肪酸组成分析 [0009] (1)样品制备：分别称取花生四烯酸-甘油三酯、二十二碳六烯酸-甘油二酯、亚麻 酸-甘油一酯、油酸-游离脂肪酸标准品，按花生四烯酸-甘油三酯：二十二碳六烯酸-甘油 二酯：亚麻酸-甘油一酯：油酸-游离脂肪酸的质量比为5-50mg:5-50mg:5-50mg:5-50mg， 混合，用正己烧溶解，质量浓度控制在5mg/mL?50mg/mL之间，得到样品，并置于-20°C冰箱 保存； [0010] (2)柱子活化：将固相萃取小柱置于固相萃取装置上，用5-10倍固相萃取小柱内 的填料体积的正己烷对柱子进行平衡活化（为常规方法；正己烷为填料体积的5-10倍）； 固相萃取小柱内填料为弗罗里硅土； [0011] (3)上样：将步骤（1)中配制的样品转移到固相萃取小柱中，样品上样体积为固相 萃取小柱内的填料体积的1-2倍，控制流速。