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蛋白酶活性采用茚三酮比色法测定.doc

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文档编号：39659378

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蛋白酶活性采用茚三酮比色法测定称取 29 过 lm 二筛的风干土样置于 IOOml 三角瓶中往三角瓶中加入 0.5ml 甲苯，摇匀后放置 15 分钟再加入 10ml 用 pH7.4 磷酸缓冲液配制的白明胶溶液，将瓶塞紧，小心摇荡将三角瓶置于 30℃恒温箱中，培养 24h培养结束后，将瓶中悬液用致密滤纸过滤至另一三角瓶中吸取 sml 滤液于一试管中，加 0.5ml0.IN 硫酸和 3ml20%硫酸钠以沉淀蛋白质，然后再过滤到另一试管中于上述试管中加入 lm120/0 荀三酮溶液，将混合物仔细摇荡，并在煮沸的水浴上加热 10min将着色液转移到 50ml 容量瓶中，并用蒸馏水稀释至刻度用光电比色计于 56Onm 处进行比色测定实验设无土对照和无基质对照蛋白酶活性以 24h 后 19 土壤中酶促反应后生成的甘氨酸毫克数表示中性磷酸酶活性采用磷酸苯二钠比色法测定取 10.00g 新鲜土壤(

同时做空白对照，用 10ml 去离子水代替磷酸苯二钠溶液三次重复取上述滤液卜 4ml 于 50ml容量瓶中，加 2.5ml 缓冲液，混匀后用去离子水稀释至大约 4Oml，再加 0.5m12，6 一二滇 2424 酮氯亚按溶液，室温下 20 一 3Omin，定容至 50ml，在 600nm 处比色测定结果以 24h 后 19 土壤中释放出的酚的mg 数表示。

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